刘相叶
- 作品数：17 被引量：42H指数：3
- 供职机构：徐州医科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- 华支睾吸虫成虫cDNA表达文库的构建与筛选被引量：2
- 2009年
- 为了获得华支睾吸虫成虫期强反应原性抗原基因，首先利用λZAP载体构建华支睾吸虫成虫cDNA表达文库：即从我国东北疫区（镇赉县）家犬胆管内分离收集华支睾吸虫成虫，采用Trizol Reagent提取其总RNA，Oligo（dT）纤维素柱纯化mRNA，反转录合成第1链eDNA及第2链cDNA，用CHROMASPIN-400柱离心层析纯化后，与载体xZAPExpress连接，体外包装后成功获得我国东北疫区华支睾吸虫成虫cDNA表达文库。文库容量为1．5×10^6pfu，重组率为99％，插入片段长度在0．4～2．0kb之间，扩增文库的滴度为1．5×10^10 pfu／mL。然后利用免疫学方法对该cDNA表达文库进行筛选：以自然感染华支睾吸虫的人血清为抗体探针，从2．0×10^5个重组噬菌体筛选强反应原性抗原基因，对筛选出的强反应原性克隆进行测序，利用相关分子生物学软件进行序列分析。共获得41个阳性克隆，测序结果分析表明，这些cDNAs根据其编码的蛋白可分为以下几种，即与来自华支睾吸虫的甘氨酸-2、脯氨酸-2及Cs44抗原高同源的基因及分别与来自Nematostella vectensis的未知蛋白、转录延伸因子及果蝇CG3446基因编码蛋白较低同源性的基因。本研究结果为进一步对华支睾吸虫抗原的生物学特性研究及应用奠定了理论基础和实验依据。
- 吴秀萍高丽芳张玲邓洪宽刘相叶叶春艳王子见王学林王峰刘明远
- 关键词：华支睾吸虫成虫CDNA文库
- 鲤外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28β全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析被引量：1
- 2008年
- 采用基因文库筛选方法,克隆了鲤外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28βcDNA,对其序列进行了分析,同时利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测了不同外界因子刺激下鲤外周血白细胞PA28β的表达情况。结果显示,用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A18,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过两轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明,该阳性克隆长1175bp,含有一个大小为735bp编码244个氨基酸的完整开放阅读框,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA。系统发生分析其与已报道的斑马鱼蛋白酶体激活因子PA28β亲缘关系最近,基因序列的同源性达95%。分离培养鲤外周血白细胞,在不同条件下经PHA和ConA刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28β全长cDNA序列和鲤鱼-βactin序列设计引物,利用RT-PCR方法对鲤外周血白细胞PA28β进行差异表达分析,结果表明:经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中PA28β的表达量明显增大,但随着时间推移(12h、24h)表达增加量有所降低,并不随时间的延长而持续增加。在刺激的和正常的白细胞中PA28β表达趋势都成抛物线图,不同的是经刺激的比正常的PA28β的表达量提前达到峰值。首次报道鲤蛋白酶体激活因子PA28β的全长cDNA序列,鲤PA28β的cDNA序列GenBank注册号为EU255233,并对其进行差异表达分析,这些结果可为PA28β在鱼类免疫应答中的作用研究提供参考和依据。
- 付保忠卢强谭业平孙晓义李伟刘相叶邓洪宽
- 关键词：CDNA克隆差异表达分析
- 噬菌体展示技术及其应用被引量：16
- 2008年
- 噬菌体展示技术是一项新兴的分子生物学技术;该技术将基因型和表现型有效地联系起来,是后基因组时代的有力工具。目前用于构建展示文库的噬菌体主要有丝状噬菌体、λ噬菌体、T4噬菌体和T7噬菌体;它们所展示的外源蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性。随着此项技术的不断完善和发展,噬菌体展示技术已在新型疫苗的研制、酶抑制剂的筛选、医学诊断和治疗、多肽药物的开发、蛋白质相互作用的研究等领域得到了广泛的应用,并显示了良好的应用前景。
- 刘相叶邓洪宽吴秀萍王学林于申业于艳玲刘明远
- 关键词：噬菌体展示技术
- 山东沂源硬蜱携带无形体的调查及进化分析被引量：2
- 2015年
- 为了解山东省沂源县境内硬蜱携带无形体的流行及菌株变异情况,于2015年5月~7月从该地区山羊体表共分离到54份126只不同生活史阶段的长角血蜱,分组研磨提取DNA后,利用套式PCR扩增无形体的16SrRNA（ribosomal RNA）基因片段并测序及进行序列的遗传进化分析。结果显示,54份样品PCR阳性扩增率为48.1%;序列分析表明,该地区无形体存在6个变异株,分为4类,其中3类与该地区以往报道的嗜吞噬细胞无形体序列保持密切的遗传关系,还有1类与日本长角血蜱体内检出的牛无形体序列遗传关系较近。由此可见,山东沂源地区长角血蜱存在较高的嗜吞噬细胞无形体感染率,并且变异株较多;应该加强该地区对人粒细胞无形体病的宣传力度,防止该病大规模暴发。
- 刘相叶武志强刘转转汤仁仙颜超郑葵阳
- 关键词：长角血蜱进化分析
- 旋毛虫与宿主肠粘膜上皮细胞相互作用蛋白的筛选
- 本研究为筛选旋毛虫与宿主肠粘膜上皮细胞相互作用蛋白，首先通过实验的方法确定收集旋毛虫肠道感染性第一期幼虫的最佳时间为经口灌服感染性第一期幼虫后6h。进而用Trizol试剂提取旋毛虫肠道感染性第一期幼虫总RNA，以纯化的肠...
- 刘相叶
- 关键词：旋毛虫小肠上皮细胞
- 文献传递
- 寄生虫核酸疫苗研究进展被引量：1
- 2007年
- 寄生虫核酸疫苗是近年来出现和发展起来的一种新型疫苗；它不仅可以引起体液免疫，而且还能诱导高水平的细胞免疫应答，在寄生虫病的预防方面显示出了强大的优势。目前，已经在利什曼病、疟疾、血吸虫病等寄生虫病中开展了相关研究，该文从寄生虫核酸疫苗的免疫机制、特点、应用以及影响免疫效果的因素等方面阐述了最近几年来在这一领域取得的成果。
- 刘相叶吴秀萍杨君敬王学林于艳玲邓洪宽刘明远
- 关键词：寄生虫核酸疫苗免疫机制影响因素
- 华支睾吸虫成虫虫体与排泄-分泌物抗原在ELISA检测中的评价被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨华支睾吸虫成虫可溶性抗原和排泄-分泌物抗原ELISA检测的临床诊断价值。方法:分别以虫体可溶性抗原和排泄-分泌物抗原作为诊断抗原,采用间接ELISA检测方法检测感染者(来自流行区,粪便虫卵检测阳性)血清107份和健康人(来自非流行区,粪便虫卵检测阴性)血清50份,计算其敏感性、特异性和符合率,并进行两种诊断抗原间的统计学比较与评价。结果:可溶性抗原的敏感性为58.88%,特异性为98%,符合率为71.34%;排泄-分泌物抗原的敏感性为87.85%,特异性为100%,符合率为91.72%。经统计学分析,两者敏感性和符合率差异具有统计学意义(P<0.05)。特异性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:作为诊断抗原,排泄-分泌物抗原优于可溶性抗原。排泄-分泌物抗原具有较高的敏感性与特异性,对于华支睾吸虫感染具有较高的诊断价值。
- 叶春艳王峰吴秀萍李玉香杨秀云于申业邓洪宽刘相叶刘明远
- 关键词：华支睾吸虫可溶性抗原ELISA
- 噬菌体展示文库筛选技术的研究进展被引量：3
- 2007年
- 噬菌体展示技术是将编码外源蛋白或多肽的基因片段定向插入到噬菌体的外壳蛋白基因区,使外源蛋白或多肽通过与噬菌体外壳蛋白融合而表达并展示于噬菌体表面,进而筛选表达特异蛋白或多肽的噬菌体,已发展成为生物学后基因组时代一个强有力的实验技术.噬菌体展示文库的筛选是其关键环节.为了提高筛选效率,许多研究者对传统的筛选技术进行了改进,如选择性感染噬菌体、迟延感染性噬菌体、以DNA为基础的筛选方法、亲合力捕获和反复筛选和封闭筛选法等,用于筛选的靶标也越来越具有多样性,使得这一技术有了更加广阔的发展前景.
- 夏慧卿邓洪宽孙磊崔国祯刘相叶于艳玲吴秀萍王学林刘明远
- 关键词：噬菌体展示文库
- 微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白主要特征与抗原表位的生物信息学分析被引量：1
- 2017年
- 目的运用生物信息学方法分析微小巴贝斯虫烯醇化酶(BmEno)基因编码蛋白的主要特征和抗原表位。方法运用ORF Finder、PROSITE、ProtPar am、SignalP、TMpred、SOSUI、MotifScan、Bcepred、HNN等生物信息学在线分析软件,结合DNASTAR生物信息学分析软件,预测BmEno蛋白的开放阅读框、特征结构域、理化性质、信号肽、跨膜区、翻译后修饰位点、可溶性、亲水性、表面可及性、二级结构和抗原表位。结果该蛋白由438个氨基酸组成,在349-362位存在烯醇化酶的特征结构域,分子式为C_(2098)H_(3366)N_(570)O_(648)S_(18),分子质量单位为47.5203ku,等电点理论值为5.98,有25个翻译后修饰位点,10个亲水性参数得分≥1.9的区域,6个柔韧性参数得分≥2.0的区域,18个表面可及性参数得分≥1.9的区域,7个潜在的B细胞抗原表位,15个潜在的T细胞抗原表位,为可溶性蛋白。结论微小巴贝斯虫烯醇化酶蛋白为可溶性蛋白,有多个抗原表位,具有潜在的免疫原性,可以作为微小巴贝斯虫的疫苗候选抗原。
- 刘相叶郑辰潘志华寇艳波郑葵阳
- 关键词：烯醇化酶理化性质抗原表位生物信息学分析
- 华支睾吸虫病免疫学诊断方法的研究进展
- 2008年
- 华支睾吸虫病(clonorchiasis)又称肝吸虫病,它是由华支睾吸虫寄生在人体胆管而引起的疾病,对人体造成巨大的损害。传统的病原学诊断方法存在着明显的局限和弊端。免疫学和分子生物学的发展为诊断提供了新的途径。随着对诊断抗原、抗体研究的深入以及诊断方法的改进,华支睾吸虫病诊断的敏感性和特异性不断提高。
- 李妍于申业刘相叶王瑞王佳魏利斌
- 关键词：华支睾吸虫病免疫学
