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史计: 作品数：11 被引量：24H指数：4; 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>; 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学更多>>

合作作者

基于DIG-化学发光法的Southern blot方法优化被引量：4: 2011年; 目前,基于DIG-化学发光法的Southern blot技术已在生物实验室广泛应用,但在试验过程中经常会遇到背景黑、目的信号弱等问题,以致不能获得理想结果。在棉花线粒体基因组RFLP分析过程中结合前人经验对基于DIG-化学发光法的Southern blot技术在探针标记、探针浓度、探针剥离等方面进行了优化。优化后的方法重复性好,一张转好的尼龙膜最多可以反复使用11次;一份杂交液在两年内至少可以反复使用5次且不会明显降低杂交效果。; 张晓张锐于源华史计孟志刚孙国清周焘郭三堆; 关键词：SOUTHERN BLOT 化学发光法探针

棉花线粒体atp9基因克隆及表达分析: 根据GenBank报道的植物线粒体atp9基因编码区保守序列设计探针,进行Southern blot分析,发现棉花线粒体atp9基因在CMS系和保持系间存在差异。通过Tail—PCR方法,克隆到了atp9的基因组全长以及...; 史计张晓郭三堆; 关键词：棉花 RNA编辑; 文献传递

用于鉴定陆地棉“三系”中可育胞质和不育胞质的SCAR和SSR分子标记的开发: 本文以P30A及其保持系P30B、恢复系Y18R为主要实验材料,对其线粒体atpA基因侧翼序列进行了基因组步移,克隆了不育胞质和可育胞质之间的差异序列,获得了1个SSR标记和2个胞质特异的SCAR标记,这些标记能够快速、...; 张晓张锐史计孟志刚郭三堆; 关键词：细胞质雄性不育 ATPA SCAR; 文献传递

棉花线粒体atp9基因的克隆及其表达分析: 棉花细胞质雄性不育（CMS）是母性遗传的性状,在生产中,通过不育系、保持系和恢复系的“三系”配套,充分利用杂种优势,利用“三系法”制种,可实现杂交棉种子规模化生产。在理论上,是研究花粉发育和核质互作的模式系统。陆地棉胞质...; 史计; 关键词：棉花线粒体 RFLP CMS; 文献传递

棉花线粒体atp9基因的克隆和转录研究获取渠道分析: 2012年; 以三系杂交棉胞质雄性不育系P30A、保持系P30B和恢复系Y18为材料,通过Tail-PCR从可育胞质获得线粒体atp9基因序列,并利用Northern blot分析了atp9基因在棉花幼蕾的的转录情况。结果显示:在三系中atp9基因均存一个0.5 kb的强杂交带和一个1.0 kb的弱杂交带,杂交结果无明显差异;三系中atp9基因编码区共有7个编辑位点,第7个编辑位点密码子由于编辑转变为终止密码子使翻译提前终止;atp9基因在保持系中幼蕾的编辑频率要明显低于不育系和恢复系;发现atp9基因的编辑与棉花胞质形式相关,而且不同的核背景也会影响编辑率,推测线粒体atp9基因与棉花的胞质雄性不育具有一定的相关性,但有待更进一步分析。; 史计张锐石庆华张晓郭三堆; 关键词：棉花线粒体 TAIL-PCR RNA编辑

陆地棉胞质雄性不育系与保持系线粒体SCAR分子标记: 陆地棉胞质雄性不育（CMS）系P30A已应用于杂交棉制种的生产实践,但该不育系及其保持系的分子标记尚不丰富,有必要开发新的分子标记。在克隆棉花atpA基因时发现,P30A与其保持系P30B线粒体基因组中各存在两个atpA...; 张晓张锐史计王远孙国清孟志刚周焘郭三堆; 关键词：细胞质雄性不育保持系 ATPA SCAR; 文献传递

优化的反向PCR结合TAIL-PCR法克隆棉花线粒体atpA双拷贝基因及其侧翼序列被引量：8: 2012年; 双拷贝基因及其侧翼序列的克隆是分子生物学中的一个难点。将优化的反向PCR(Inverse PCR,iPCR)与TAIL-PCR相结合,有效地克隆双拷贝基因及其侧翼序列。先用Southern blotting方法确定一种能获得合适长度片段的限制性内切酶,然后用优化的iPCR方法对该酶切产物进行自连和扩增,将2个拷贝的侧翼序列区分开。根据iPCR结果,进一步用TAIL-PCR扩增更远侧翼的序列。利用这套方法,获得了棉花可育胞质和不育胞质线粒体双拷贝atpA基因的所有EcoR I限制片段(2.2～5.1 kb)和HindⅢ限制片段(8.5～11.7 kb),克隆到2个拷贝各自的侧翼序列。研究结果说明,优化的iPCR与TAIL-PCR相结合是克隆双拷贝基因及其侧翼序列的一种高效方法。; 张晓张锐孙国清史计孟志刚周焘侯思宇梁成真于源华郭三堆; 关键词：反向PCR TAIL-PCR 细胞质雄性不育棉花 ATPA 侧翼序列

棉花线粒体atp9基因的克隆和转录研究: 为了深入探讨棉花的雄性不育分子机理,本试验以三系杂交棉胞质雄性不育系P30A、保持系P30B和恢复系Y18为材料,通过Tail-PCR从可育胞质获得线粒体atp9基因序列1627bp。利用Northern blot分析了...; 史计张锐石庆华张晓王远孙国清孟志刚周焘郭三堆; 关键词：棉花线粒体 TAIL-PCR RNA编辑; 文献传递

陆地棉线粒体nad6基因mRNA无常规终止密码子被引量：1: 2014年; 植物线粒体nad6基因编码NADH(还原型辅酶Ⅰ)脱氢酶第6亚基,前期研究发现,该基因可能与棉花细胞质雄性不育相关,但该基因的转录情况尚不清楚.本研究利用PCR测序、Southern印迹方法发现,陆地棉线粒体基因组(mtDNA)中nad6基因长621 bp,且为单拷贝.RT-PCR及环化RT-PCR分析发现,其mRNA在终止密码子前-14或-15 nt处提前终止;虽然该基因mRNA编码区存在12处RNA编辑(C-U)位点,但并未产生新的替代的终止密码子;基因mRNAs尾端poly(A)处含有0、1、2或4个"A",也并未与前方相邻碱基凑成新的终止密码子,即:该基因mRNA无常规终止密码子(UGA,UAG,UAA).本研究结果提示,棉花线粒体nad6基因mRNA很可能有其它的终止密码子.针对这种情况对植物线粒体如何翻译无常规终止密码子的mRNA进行了讨论.; 张晓孟志刚孙国清周焘史计于源华张锐郭三堆; 关键词：线粒体基因组终止密码子

高等植物线粒体基因组研究进展被引量：8: 2011年; 高等植物线粒体基因组在目前已知生物中是最大、最复杂的,阐述了高等植物线粒体基因组的最新研究进展。从全基因组的测序方法开始,重点介绍了高等植物线粒体基因组的组成和结构特点,特别是基因含量、内含子、基因间隔序列、RNA编辑、重复序列、叶绿体和细胞核与线粒体之间的DNA交换以及线粒体基因的遗传起源和进化等热点问题,以期为更好的了解核质互作、植物进化等科学问题奠定基础。; 张晓张锐侯思宇史计郭三堆; 关键词：高等植物线粒体基因组 RNA编辑