吴刚
- 作品数：6 被引量：52H指数：4
- 供职机构：中国科学院水生生物研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 两种不同终止子在转基因鲤鱼中的促生长效应被引量：4
- 2009年
- 转基因构建体中启动子的选择会直接影响转植基因的活性,近年来有研究表明转基因构建体中终止子的选择会一定程度地影响转植基因的活性。为了更好地筛选转基因构建体和培育快速生长的转"全鱼"生长激素(Growth hormone,GH)基因鱼,文章用鲤鱼β-actin基因终止子和生长激素基因终止子分别构建了转基因构建体,显微注射得到转"全鱼"GH基因鱼P0代养殖群体,比较两种不同终止子构建体的活性。统计分析发现,生长激素基因终止子构建体的养殖群体的体重频率呈正态分布且平均体重显著高于β-actin基因终止子构建体的养殖群体,β-actin基因终止子构建体的养殖群体的体重频率呈右倾趋势的非正态分布。值得一提的是在混合养殖组中得到一条生长最为快速的鲤鱼证实为转基因阳性且为生长激素基因终止子构建体的转基因鲤鱼。该结果表明转"全鱼"生长激素基因鲤鱼可快速生长,并能将转植基因向下代遗传。实验结果提示生长激素基因终止子构建体比β-actin基因终止子构建体表现的促生长活性要强。
- 钟山罗大极吴刚徐婧汪亚平朱作言
- 关键词：生长激素基因转基因鱼终止子
- 虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)组蛋白H_3启动子的分子克隆及在稀有(鱼句)鲫(Gobiocypris rarus)中的表达活性分析被引量：10
- 2004年
- 使用高保真PCR方法从虹鳟鱼基因组中克隆得到虹鳟鱼组蛋白H3启动子.将虹鳟鱼组蛋白H3启动子插入启动子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达载体pEGFP-1中,构建成重组载体pRH3EGFP-1.通过显微注射法得到转pRH3EGFP-1稀有(鱼句)鲫.在荧光解剖镜下,可以清楚地观察到EGFP在发育到原肠胚的转pRH3EGFP-1稀有(鱼句)鲫中表达.在稀有(鱼句)鲫幼体鱼苗中也可以清楚地观察到EGFP在多个组织中的泛组织表达.比较CMV启动子、鲤鱼β-actin启动子、虹鳟鱼组蛋白H3启动子的EGFP表达载体pCMVEGFP,pCAEGFP,pRH3EGFP-1在稀有(鱼句)鲫胚胎中的表达特性,结果表明pCMVEGFP最早表达,其后为pRH3EGFP-1和pCAEGFP,表达的强度依次为pCMVEGFP>pCAEGFP>pRH3EGFP-1.这说明虹鳟鱼组蛋白H3启动子可以作为一种有效的启动子,应用于鲤科鱼类(如稀有(鱼句)鲫)的转基因研究.
- 茅卫锋汪亚平孙永华吴刚陈尚萍朱作言
- 关键词：虹鳟鱼转基因鱼分子克隆表达活性
- 转基因鱼食品安全性分析与生态安全性对策研究
- 吴刚
- 关键词：食品卫生生长激素鲤鱼生态安全
- 鲤鱼(Cyprinus carpio)血清生长激素变化的酶联免疫吸附测定被引量：1
- 2008年
- 本研究的目标是纯化鲤（Cyprinus carpio）生长激素，用于制备抗鲤鱼生长激素的单克隆抗体，建立鲤鱼生长激素的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assays，ELISA）技术，并用所建立的技术检测不同环境下养殖的鲤鱼的血清生长激素水平的变化．利用柱纯化技术纯化酵母表达草（Ctenopharyngodon idella）生长激素，免疫新西兰白兔（Oryctolagus cuniculus），获得抗草鱼生长激素多克隆抗体．摘取鲤鱼垂体，从中提取生长激素，经层析纯化后，以变性聚丙烯凝胶电泳判断其分子量和纯度，并利用抗草鱼生长激素多克隆抗体以Western blot验证．纯化并经鉴定的鲤鱼生长激素作为免疫原被用于B淋巴细胞杂交瘤技术．共建立14株能够稳定分泌抗鲤鱼生长激素单克隆抗体的杂交瘤细胞系（FMU-cGH1-FMU-cGH14），其中8个克隆（FMU．cGH1～FMU-cGH6，FMU-cGH12和FMU-cGH13）成功用于Western blot分析，9个克隆（FMU-cGHl-FMU-cGH7，FMU-cGH9和FMU-cGH10）可用于荧光标记和免疫组织化学分析．利用竞争性ELISA进行表位分析，结果表明这些单克隆抗体能够识别5个不同的表位．利用其中的FMU-cGH12作为包被抗体，FMU-cGH6作酶标抗体，建立了能够检测鲤鱼生长激素含量的ELISA技术．这一检测系统被证明具有高度的稳定性和灵敏度，能够检测并定量低至70pg／mL的生长激素．利用这一检测技术，发现限制进食和网箱养殖的鲤鱼其生长激素含量都有明显提高，分别为对照的6．9和5．8倍，显示不同生长环境下鲤鱼生长激素水平具有不同的反应．
- 吴刚陈丽华钟山李琦宋朝君金伯泉朱作言
- 关键词：饥饿
- 甜蛋白Monellin在毕赤酵母中的分泌表达被引量：4
- 2003年
- 在西非热带植物Dioscoreophyllum cumminsii中存在着一种由两条多肽构成的甜度极高的蛋白Monellin。本研究根据已知的Monellin晶体衍射分析结果和毕赤酵母(Pichia pastoris)基因偏爱密码子设计并合成了连接两条多肽的重组基因,插入到毕赤酵母分泌表达质粒pGAPZαA中。扩增后,电击穿孔转化毕赤酵母GS115,筛选高产菌株放大培养。以5升罐发酵培养,表达量为150mg/L。经纯化,可以获得大于130mg/L的具有高甜度的活性蛋白。
- 吴刚汪亚平朱作言
- 关键词：甜蛋白毕赤酵母基因重组基因工程
- 转“全鱼”生长激素基因鲤鱼及其F_1遗传分析被引量：35
- 2001年
- 采用显微注射方法, 研制出转"全鱼"生长激素基因鲤鱼. 比较分析了转基因鲤鱼(P0)获得性状多样性, 筛选获得具有显著快速生长效应的转基因鱼个体; 繁殖力参数比较发现, 快速生长转基因鱼的繁殖能力无实质改变. 对F1转基因鱼转植基因分离和性状分布进行了遗传分析, 结果证实转植基因在2, 3条染色体上整合, 转植基因不同整合位点的生物学效应存在差异, 这为快速生长转基因鱼育种奠定了基础.
- 汪亚平胡炜吴刚孙永华陈尚萍张甫英朱作言冯建新张西瑞
- 关键词：鲤鱼繁殖能力
