吴胜
- 作品数：31 被引量：82H指数：5
- 供职机构：中国科学院微生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中国科学院知识创新工程更多>>
- 相关领域：生物学化学工程医药卫生理学更多>>
- 一种具有拆分消旋体苯基缩水甘油酯活性的酯酶及其编码基因与应用
- 本发明提供一种来源于液化微杆菌(Microbacterium liquefaciens)的酯酶MHest及其编码基因，还提供了该酯酶水解拆分消旋体苯基缩水甘油酯的应用。本发明所述酯酶是如下(a)或(b)的蛋白质：(a)由...
- 王建军吴胜
- 一种具有拆分消旋体γ-内酰胺活性的(+)γ-内酰胺酶及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种具有拆分消旋体γ-内酰胺活性的(+)γ-内酰胺酶及其编码基因与应用，其是来源于氧化烃微杆菌(Microbacterium hydrocarbonoxydans)的(+)γ-内酰胺酶及其编码基因，还提供了该...
- 王建军吴胜
- 基于细菌群感效应原理设计分子开关
- 基于细菌群落中普遍存在的群感效应的基本原理并结合酶催化的动力学特点，首先在大肠杆菌群落中建立信号分子高丝氨酸内酯(AHL)介导的细胞-细胞交流机制，进而通过控制信号分子AHL的合成和降解使靶蛋白质EGFP的表达置于精确的...
- 张志伟吴胜
- 关键词：细菌群落酶催化分子开关
- 文献传递
- Sinorhizobium morelens S-5菌海因水解酶系统的研究及其在光学纯氨基酸生产上的应用
- 光学纯氨基酸是医药、农药、人工多肽和食品添加剂等化学品制备过程中的重要中间体，有巨大的工业利用价值。利用“海因酶/氨甲酰基水解酶法”生产光学纯氨基酸包括两个基本反应步骤，DL-5-取代的海因在立体专一性的海因酶作用下水解...
- 吴胜
- 关键词：中华根瘤菌
- 组合蛋白质工程和代谢工程设计全细胞催化剂合成靛蓝和靛玉红被引量：4
- 2016年
- 从嗜高温放线菌Thermobifida fusca中分离得到的苯基丙酮单加氧酶主要催化芳香族化合物的Baeyer-Villiger氧化反应。对该酶的结构和功能进行研究时,发现位于底物结合口袋的Met446位点突变可以赋予突变酶催化C-H键活化的新功能,氧化吲哚合成靛蓝和靛玉红,但产量仅为1.89 mg/L。为了获得合成靛蓝和靛玉红的全细胞催化剂,直接补加吲哚并不能提高细胞合成效率,补加吲哚的前体物质L-色氨酸可以使细胞合成靛蓝和靛玉红的能力提高4.5倍,达到8.43 mg/L。为了进一步提高细胞的生物合成效率,通过代谢工程改造大肠杆菌的糖代谢途径,阻断葡萄糖异构酶基因pgi,使磷酸戊糖途径代替糖酵解途径成为葡萄糖的主要代谢通路,从而为细胞提供更多氧化吲哚所需的辅因子NADPH,导致细胞合成靛蓝和靛玉红的效率进一步提高3倍,达到25 mg/L。通过组合蛋白质工程和代谢工程设计全细胞催化剂不仅可以高效地合成靛蓝和靛玉红,而且设计理念为相关全细胞催化剂的开发提供了一种新的策略。
- 李阳朱俊歌王建军夏焕章吴胜
- 关键词：靛蓝靛玉红蛋白质工程代谢工程
- Sinorhizobium morelens S-5中N-氨甲酰基水解酶基因的克隆、表达和纯化
- 2006年
- N-氨甲酰基水解酶是一种非常具有工业应用价值的水解酶,可用于制备光学纯氨基酸。通过LA PCR从Sinorhizobium morelensS-5菌中克隆到1.3kb的DNA片段,测序表明该片段上含有一个完整的N-氨甲酰基水解酶的基因(hyuC)序列。将hyuC基因克隆到表达载体pET30a上,重组质粒pET30a-HyuC在大肠杆菌中获得了高水平表达。重组的N-氨甲酰基水解酶经过热处理和三步柱色谱分离而纯化。纯化倍数为16.1倍,收率21.2%。该酶为同源四聚体,亚基分子量是38kDa。最适温度是60℃,最适pH为7.0。该酶有较高的热稳定性和氧化稳定性。Fe2+和Ca2+对酶的活性有一定的促进作用,而金属螯合剂和巯基试剂对酶活无明显影响。
- 吴胜王建军杨柳孙万儒
- 关键词：SINORHIZOBIUM蛋白纯化
- 微生物来源的γ内酰胺酶研究进展被引量：6
- 2010年
- γ-内酰胺酶属于酰胺酶,其中的(+)γ-内酰胺酶能够高效率的动力学拆分外消旋体γ-内酰胺,获得光学纯的(-)γ-内酰胺。光学纯的(-)γ-内酰胺是制备抗病毒药物碳环核苷化合物的重要手性中间体。目前报道共有7个来源于微生物的γ-内酰胺酶,其中来源于Aureoacterium sp.的(-)γ-内酰胺酶的晶体结构获得了解析。根据晶体结构推测的(-)γ-内酰胺酶的催化机理与α/β水解酶超家族的催化机理是类似的。但是,目前还没有(+)γ-内酰胺酶的晶体结构模型的数据及机理的描述。γ-内酰胺酶的研究方向主要包括γ-内酰胺酶的蛋白质工程改造,对不同对映体选择性的γ-内酰胺酶的催化机理的阐述,以及γ-内酰胺酶在生物体内的功能研究。
- 王建军郑国钧吴胜
- 关键词：手性中间体
- 基于细菌群感效应人工构建分子开关被引量：1
- 2013年
- 对生物体内已有的或者人工组装的生物合成途径进行优化操作涉及两个重要问题:代谢途径中关键酶的活性及蛋白表达水平。对于酶表达水平的研究,传统的做法是采用强启动子控制下的靶蛋白过量表达策略。靶蛋白的过量表达通常会导致细胞内积累大量的无活性包涵体,从而严重影响细胞的生理状态和相关生物途径的有效运转。针对这一问题,设计一种分子开关来精确调控生物合成过程中关键酶的表达水平,对于研究生物合成途径的代谢节律以及促进生物合成途径高效运转都具有重要的实用价值。基于细菌群落中普遍存在群感效应的基本原理并结合酶促催化的动力学特征,首先在大肠杆菌群落中建立信号分子高丝氨酸内酯(AHL)介导的细胞–细胞交流机制,将靶基因egfp置入到启动子PluxI的控制之下。在细胞生长过程中,产生的AHL累积到一定浓度启动靶基因表达。通过在细胞生长的不同阶段启动AHL降解酶AiiA的表达控制环境中信号分子AHL的浓度水平,从而控制靶基因egfp的转录效率,最终实现对靶蛋白EGFP表达水平的精确控制。通过检测细胞的生长状态、靶基因在mRNA水平、蛋白质水平的表达情况证明人工设计的分子开关可以便捷高效地控制靶基因表达水平,具有时空调节的严谨性。该分子开关有望广泛应用于代谢工程和合成生物学等研究领域中。
- 张志伟吴胜
- 关键词：AIIA基因分子开关
- 酶催化功能的多样性及在合成手性药物中间体中的应用
- 从生物学意义上讲,探索酶催化功能的多样性是揭示微生物生存策略和阐明微生物在不同环境下适应机制的重要基础,为理解生命的进化和演变规律提供直接的酶学证据;从有机合成的角度讲,具有多种催化功能的酶是非常理想的生物催化剂,可以实...
- 吴胜王建军
- 文献传递
- 黑暗链霉菌原生质体制备、再生及其DNA转化条件的研究被引量：18
- 2001年
- 利用CP培养基培养黑暗链霉菌 (Streptomycestenebrarius) 990 4,采用二级培养即首先在37℃培养 48h ,然后按 10 %的转种量转种于新鲜的培养基中 ,同时补加 2 %甘氨酸 ,2 8℃培养 2 0h ,收获的菌丝体对溶菌酶敏感。在适宜的酶解条件下可形成 4 6 2× 10 9/mL原生质体 ,再生率为18%。利用经修饰的质粒DNA转化冻存的原生质体获得成功 ,转化率为 10 3～ 10 4 / μgDNA。
- 吴胜夏焕章程杉
- 关键词：黑暗链霉菌原生质体DNA安普霉素
