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烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒双价RNA沉默抗病载体的快速构建被引量：4: 2009年; 利用重组PCR技术将烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(△MP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(△Rep)连接起来,获得全长约1000 bp的MP-Rep融合基因,将所得融合基因以反向重复的方式与大豆内含子相连,并定向插入到植物表达载体pBIN438上35S启动子下游,构建了含两种不同病毒来源基因的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r)。酶切和PCR鉴定证明所构建的载体与预期的设计完全一致。该研究结果为利用RNA沉默原理进行植物广谱抗病研究奠定了基础。; 牛颜冰雷霄飞申林炎王德富姚敏郭平毅; 关键词：重组PCR 融合基因 RNA沉默

应用RNA沉默技术获取抗黄瓜花叶病毒(CMV)和烟草花叶病毒(TMV)转基因烟草被引量：9: 2011年; RNA沉默是迄今最为有效的抗病毒策略,利用该策略不但能获得免疫转基因植株,且所得植株不易与其他病毒基因重组或异源包壳、生物安全性较高。将本实验室已构建的携带有烟草花叶病毒(TMV)部分移动蛋白基因(ΔMP)和黄瓜花叶病毒(CMV)部分复制酶基因(ΔRep)反向重复结构的植物表达载体pBIN438-MP-Rep(i/r),用农杆菌浸润法转化普通烟草品种K326,共得196株转化植株,经卡那霉素筛选和PCR检测发现128株为阳性转基因植株;PCR-Southern和RT-PCR分析表明外源基因已整合到烟草基因组并在转录水平上得到表达;ELISA结果显示20.3%的转基因植株对CMV和TMV复合侵染表现免疫性。本结果为利用RNA沉默技术进行植物抗多种病毒育种提供重要数据,为防治其他多种病毒复合侵染提供借鉴。; 牛颜冰王德富姚敏闫钊由文鑫; 关键词：RNA沉默黄瓜花叶病毒烟草花叶病毒

高效诱导植物RNA沉默的反向重复构件的设计: 2008年; RNA沉默(RNA silencing)是真核生物体内普遍保守的、发生在RNA水平的、基于核酸序列同源性相互作用的一种对基因表达的调控机制。通过设计反向重复构建在植物体内产生双链RNA来诱导RNA沉默的方法是一条非常有效的植物抗病毒和功能基因组研究途径。本研究通过两个病毒基因的反向重复构建发展了两种通过小型中间载体设计反向重复构建的方法。其共同特点是构建简易,操作方便,可为通过设计反向重复构建实现植物体内高效持久的RNA沉默提供方法上的参考,促进RNA沉默技术更加广泛深入地应用于植物抗病毒基因工程研究和植物功能基因组研究。; 牛颜冰青玲王德富姚敏郭失迷郭平毅; 关键词：RNA沉默抗病毒基因工程

臭椿病毒病病原鉴定被引量：19: 2011年; 臭椿（Ailanthus altissima）属苦木科（Sima-roubaceae）落叶乔木,为我国常用中草药;以根皮入药,具有消炎、杀菌、杀虫、抗肿瘤及抗病毒等作用;亦可用在建筑、能源、环保和造纸等方面,具有广阔的开发和应用前景。已有研究表明,引起臭椿花叶症状的病毒病原主要是西瓜花叶病毒（WMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）等马铃薯Y病毒属病毒。; 牛颜冰姚敏王德富王贵军弓强; 关键词：病原鉴定病毒病臭椿马铃薯Y病毒属西瓜花叶病毒苦木科

侵染苘麻的烟草花叶病毒鉴定被引量：7: 2011年; 苘麻Abutilon theophrastiiMedic.为锦葵科苘麻属草本植物,其全草含芸香甙,根含粘液质,苘麻子含15%~17%脂肪油和球蛋白,可治赤白痢疾、痈肿、关节酸痛等症,有消炎、利尿、下乳等作用[1]。烟草花叶病毒Tobacco mosaic virus寄主范围广、侵染性强,可侵染茄科、十字花科、葫芦科及豆科等植物[2]。作者等2008年进行药用植物病害调查时,发现山西晋中地区许多苘麻叶片表现出褪绿、坏死斑等症状,对苘麻药用成分的含量、; 牛颜冰王德富姚敏王贵军弓强; 关键词：烟草花叶病毒侵染性苘麻病毒鉴定 TOBACCO MOSAIC

重组马铃薯X病毒注射番茄果实高效表达胸腺素α1被引量：5: 2009年; 植物病毒载体表达外源蛋白表达水平高、表达速度快、宿主范围广。本研究用马铃薯X病毒(PVX)载体在番茄果实中表达胸腺素α1(Tα1),是一种快速高效生产医用蛋白的新方法。将pGEM-T-Easy-Tα1质粒酶切,获得大约100bp大小的Tα1基因片段,并将该片段与PVX载体(pGR-107)连接,用SalI和ClaI酶切鉴定,筛选出阳性重组体。进一步将重组质粒转化根癌农杆菌GV3101,用农杆菌注射法(Agroinjection)侵染不同生长阶段的番茄果实,用ELISA检测外源蛋白Tα1的表达水平。结果表明已成功构建了pGR107-Tα1表达载体,在农杆菌的菌液密度(OD600值)为1.0、番茄植株开花后2周半到3周时侵染番茄果实,Tα1的表达量最大。; 牛颜冰史正文王德富姚敏乔木郭平毅; 关键词：番茄果实

植物病毒抑制子抑制RNA沉默的机制及生物学应用被引量：5: 2009年; RNA沉默(RNA silencing)是真核生物细胞内保守的和序列特异的RNA降解系统。高等植物中病毒诱导的、以降解病毒为目标的RNA沉默是一种寄主适应性防御系统。为了对该系统进行防御,植物病毒已进化形成了在RNA沉默的不同阶段起作用,并最终战胜寄主沉默反应的病毒抑制蛋白。本文讨论了现今鉴定和初步分析抑制子的方法以及抑制子的作用模式;同时对植物沉默抑制子的生物学应用包括用抑制子解析RNA沉默途径、用抑制子增强外源蛋白表达水平以及抑制子引起发育缺陷等进行了讨论。; 牛颜冰青玲王德富姚敏郭平毅; 关键词：RNA沉默生物学应用

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姚敏