孔令保
- 作品数：57 被引量：109H指数：5
- 供职机构：江西农业大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江西省自然科学基金江西省科技支撑计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学文化科学生物学更多>>
- 女贞子抗丙型肝炎病毒复制酶活性成分研究被引量：11
- 2013年
- 在前期发现女贞子(Ligustrum lucidum,LL)提取物抑制丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)复制酶(NS5B)活性的基础上,研究女贞子提取物抑制NS5B活性的化学成分及其作用机制。采用乙酸乙酯萃取和薄层色谱法分离女贞子水提取物,NS5B活性抑制实验检测各个分离组分的抑制活性。结果显示,分离组分1和2能够抑制NS5B活性,组分2的抑制能力更强。采用高效液相色谱法(high-performance liquid chromatography,HPLC)及NS5B活性抑制实验分析组分1和2中的活性成分。结果显示,熊果酸和齐墩果酸分别是组分1和2的抗NS5B活性成分,齐墩果酸的抑制能力更强。进一步的抑制机制分析发现,熊果酸和齐墩果酸通过非竞争抑制作用抑制NS5B活性,熊果酸和齐墩果酸的Ki分别约为4.7μg·mL 1(10μmol·kg-1)和2.5μg·mL-1(5.5μmol·kg-1)。本研究发现齐墩果酸和熊果酸通过非竞争抑制作用抑制丙型肝炎病毒复制酶NS5B活性,揭示这两个天然化合物具有潜在的丙型肝炎治疗价值。
- 孙瑞娜张艳妮汪俊刘好桔孔令保
- 关键词：丙型肝炎病毒女贞子熊果酸
- 持续表达的丙型肝炎病毒NS4B激活HepG2细胞内质网应激反应的研究被引量：2
- 2012年
- 目的研究持续表达的丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)对HepG2细胞内质网应激反应的影响。方法 NS4B重组真核表达质粒pcDNA3.1(-)NS4B通过脂质体转染HepG2细胞,G418筛选、基因组PCR和Western blot鉴定稳定转染细胞;RT-PCR检测稳定转染细胞内人X盒结合蛋白1(XBP1)mRNA剪接,荧光素酶试验检测稳定转染细胞内GRP78启动子、XBP1启动子和核因子κB(NF-κB)活性。结果基因组PCR和Western blot鉴定证实NS4B基因整合到转染HepG2细胞的染色体上,并有效表达;在NS4B稳定转染的HepG2细胞中,检测到XBP1mRNA剪接、XBP1和Grp78启动子激活、Ca2+稳态变化及NF-κB激活。结论 NS4B在HepG2的稳定表达诱导了内质网应激反应,揭示NS4B可能通过诱导肝细胞内质网应激反应在HCV感染及其致病性中发挥作用。
- 熊江红张庆华张艳妮朱向东孔令保
- 关键词：肝炎病毒属内质网应激反应HEPG2细胞
- 苹果醋发酵条件的优化研究被引量：12
- 2009年
- [目的]研究苹果醋发酵的工艺条件,为苹果醋的工业化生产提供依据和参考。[方法]以新鲜苹果汁为原料,通过单因素和正交试验研究了发酵温度、接种量、起始糖度、时间对酒精发酵的影响以及初始酒精度、接种量、转速、装液量对醋酸发酵的影响。[结果]酒精发酵的最佳条件为:发酵温度30℃,糖度12%,接种量15%,发酵周期4d。醋酸发酵过程中,以产酸量为考查指标时的最佳发酵条件为:初始酒精度7%(V/V),接种量20%,装液量30ml/250ml三角瓶,转速200r/min,发酵温度30℃;以酒精转酸率为考查指标时的最佳发酵条件为:初始酒精度5%(V/V),接种量20%,装液量30ml/250ml三角瓶,转速200r/min,发酵温度30℃。[结论]发酵液中的初始酒精度是影响苹果醋发酵的最主要的因素。
- 张庆华孔令保朱向东芦慧郭晓燕吴晓玉
- 关键词：苹果醋酒精发酵醋酸发酵
- 高校图书馆社会化信息服务探析——面向鄱阳湖高效生态农业发展开展信息服务被引量：6
- 2011年
- 高校图书馆面向鄱阳湖高效生态农业开展社会化信息服务,既能促进鄱阳湖生态经济区建设,又能提升图书馆服务能力。江西农业大学图书馆拥有特色馆藏资源、农业科研团队、专业学科馆员和先进技术设备,具备服务鄱阳湖高效生态农业的能力。更新服务理念、丰富特色资源、优化信息服务平台、注重现代信息技术、加强机构合作共享、深入宣传与培训、开展深层次服务将丰富高校图书馆社会化信息服务实践。
- 郭韫丽孔令保郑瑜王小雄
- 关键词：高效生态农业社会化信息服务鄱阳湖生态经济区
- 齐墩果酸在制备抗丙型肝炎病毒药物和试剂中的应用
- 本发明公开了齐墩果酸在抗丙型肝炎病毒方面的一种新用途，即齐墩果酸在制备抗丙型肝炎病毒药物和试剂中的应用。齐墩果酸能显著抑制丙型肝炎病毒在细胞感染模型中的增殖，体外和细胞内活性抑制实验发现丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合...
- 孔令保李珊珊孙瑞娜吴晓玉汪俊
- 文献传递
- 猴痘病毒E2L蛋白的表达、纯化及免疫原性评价
- 2023年
- 【目的】构建猴痘病毒E2L蛋白原核表达载体,经诱导表达及纯化鉴定后免疫接种昆明小鼠评价其免疫原性,为猴痘病毒诊断试剂、疫苗和特异性治疗药物的研发打下基础。【方法】根据GenBank已公布的猴痘病毒基因组序列优化密码子后合成E2L基因,将其克隆至表达载体pET-28a(+)上构建原核表达载体pET-28a-E2L,然后转化大肠杆菌BL21(DE3)受态细胞,采用控制变量的方法对融合蛋白最佳诱导表达条件进行优化,通过SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。融合蛋白经His-Bind柱亲和层析纯化后,经腹腔注射免疫昆明小鼠,从免疫当天(第0 d)开始每隔7 d通过断尾法采集昆明小鼠血清1次,采用ELISA检测血清抗体效价。【结果】以构建的原核表达载体pET-28a-E2L转化BL21(DE3)受态细胞后,经IPTG诱导,能成功表达获得融合蛋白E2L,且主要以包涵体的形式进行表达。融合蛋白E2L的最佳诱导表达条件为40℃下以1.0 mmol/L IPTG诱导16 h,通过His-Bind柱亲和层析纯化时的最佳咪唑洗脱浓度为100 mmol/L。昆明小鼠免疫试验结果表明,纯化后的融合蛋白E2L能诱导昆明小鼠产生较高水平的体液免疫,至免疫第42 d昆明小鼠血清仍然维持较高抗体水平,抗体效价高达1∶70400,说明融合蛋白E2L具有良好的免疫原性。【结论】猴痘病毒E2L蛋白在原核表达系统能实现高效表达,且以纯化后的融合蛋白E2L免疫昆明小鼠能产生较强的体液免疫,表明具有良好的免疫原性,可用于新型猴痘病毒检测方法及预防疫苗的研发。
- 贾梦乐熊嘉琦杨领弟王毅豪孙静婷王婷黎美凤孔令保彭棋
- 关键词：猴痘病毒原核表达免疫原性
- 猴痘病毒A5L蛋白的原核表达及其免疫原性评价
- 2024年
- 【目的】获取高纯度猴痘病毒(Monkeypox virus, MPXV)A5L蛋白,制备小鼠抗A5L高效价抗血清,为MPXV A5L蛋白功能研究及相关诊断试剂的研发提供材料。【方法】构建重组质粒pET-28a-A5L,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过分析不同IPTG诱导浓度、诱导温度、诱导时间条件下重组蛋白A5L表达情况,筛选最佳表达条件。通过Western blotting鉴定重组蛋白A5L表达,利用SDS-PAGE分析重组蛋白可溶性。A5L蛋白经His-Bind镍柱亲和层析纯化后免疫小鼠,通过ELISA法检测抗体效价。【结果】双酶切和测序结果显示,原核表达载体pET-28a-A5L构建成功。Western blotting结果显示重组蛋白A5L在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中成功表达;A5L蛋白在诱导温度42℃、诱导剂(IPTG)浓度为1.6 mmol/L、诱导16 h后表达量最高,大小为40 ku。SDS-PAGE分析结果显示,A5L蛋白主要以包涵体形式存在,最佳咪唑洗脱浓度为50 mmol/L。ELISA结果显示,制备的鼠抗A5L蛋白抗体最高效价达1∶205 440。【结论】本研究成功构建了重组质粒pET-28a-A5L,并在原核表达系统中成功表达重组蛋白A5L,制备的A5L多克隆抗体具有较好的免疫原性,研究结果为进一步探究MPXV A5L蛋白的生物学功能奠定基础。
- 熊嘉琦贾梦乐杨领弟王毅豪孙静婷王婷黎美凤孔令保孔令保
- 关键词：猴痘病毒原核表达免疫原性
- 熊果酸在制备抗丙型肝炎病毒药物和试剂中的应用
- 本发明公开了熊果酸在抗丙型肝炎病毒方面的一种新用途，即熊果酸在制备抗丙型肝炎病毒药物和试剂中的应用。熊果酸能显著抑制丙型肝炎病毒在细胞感染模型中的增殖，体外和细胞内活性抑制实验发现丙型肝炎病毒RNA依赖的RNA聚合酶NS...
- 孔令保李珊珊张艳妮吴晓玉汪俊
- 文献传递
- 丙型肝炎病毒RNA聚合酶在HepG-2细胞的稳定表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 目的:探讨丙型肝炎病毒RNA聚合酶(NS5B)在肝癌细胞株HepG-2的稳定表达与活性。方法:ScaⅠ酶切含有丙型肝炎病毒NS5B基因的重组表达载体pcDNA-5B,线性化的pcDNA-5B通过脂质体介导转染HepG-2细胞,G418筛选转染细胞。阳性细胞经基因组PCR、RT-PCR和Western Blot鉴定。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验鉴定稳定表达NS5B蛋白的RNA聚合酶活性。结果:NS5B基因可整合到转染的HepG-2细胞的染色体上,并能有效转录和表达。体外RNA聚合酶试验和荧光素酶试验表明稳定表达的NS5B在体外和细胞内均具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。结论:肝细胞HepG-2可以稳定表达丙型肝炎病毒NS5B,且具备RNA依赖的RNA聚合酶活性。
- 熊舒珺吴晓玉孔令保
- 关键词：肝炎病毒属RNA聚合酶HEPG-2细胞活性
- 梅毒螺旋体重组融合蛋白的表达及免疫特性被引量：1
- 2017年
- 表达纯化梅毒螺旋体重组融合蛋白,研究其抗原性和免疫原性,为梅毒诊断试剂和疫苗研究提供新候选抗原。合成梅毒螺旋体重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965基因,转入大肠杆菌中进行表达;镍柱纯化重组融合蛋白,western blot鉴定;以重组融合蛋白作为抗原,酶联免疫法(ELISA)检测人血清样本,分析其抗原性;利用该重组融合蛋白免疫新西兰兔,ELISA检测兔血清抗体滴度水平,评价其免疫原性。梅毒重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965在工程菌中成功表达,分子量为50kD。重组融合蛋白可被梅毒抗体阳性的血清识别,梅毒阴性血清与蛋白无反应。使用重组融合蛋白作为抗原检测人血清梅毒抗体,梅毒患者样本组与非梅毒患者样本组的检测结果存在非常显著性差异。重组融合蛋白免疫兔后,兔血清中可持续检测到高滴度梅毒抗体。梅毒重组融合蛋白Tp0453-TpF1-Tp0965有良好的抗原性和免疫原性,可作为梅毒诊断试剂抗原和梅毒疫苗的候选蛋白。
- 韩雪屈晓展崔勇青胡子颖郑义孔令保
- 关键词：梅毒螺旋体重组融合蛋白抗原性免疫原性
