孙宁
- 作品数：2 被引量：6H指数：1
- 供职机构：南京铁道医学院附属医院更多>>
- 发文基金：铁道部科技基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 特异切割多药耐药基因(MDR1)的核酶设计与克隆
- 1999年
- 目的:设计与克隆特异切割多药耐药基因(MDR1) 的核酶。方法:针对人类MDR1 mRNA第Ⅶ外显子附近第196 密码子的GUC 序列,按照“锤头结构”模型,设计、合成核酶,并定向克隆入载体PGEM-3Zf(t) 中;通过PCR- SSCP法及限制性分析,确保扩增片断为外源插入的DNA序列,并经DNA测序证实。结果:重组质粒插入片断序列与设计序列一致。结论:设计、克隆核酶作用人类MDR1
- 刘顺英孙宁武景阳单祥年
- 关键词：多药耐药基因核酶分子克隆肿瘤
- 核酶体外切割肝癌多药耐药基因的研究被引量：6
- 2000年
- 目的 利用核酶技术切割肿瘤多药耐药基因 (MDR1 ) ,逆转肿瘤抗药性。方法 针对人类MDR1mRNA第VⅡ外显子附近第 1 79及 1 96密码子的GUC序列 ,按照“锤头结构”模型设计、合成了两个核酶 1 79MDR1Ribozyme(1 79RZ)和 1 96MDR1Ribozyme(1 96RZ) ,并定向克隆入载体PGEM 3Zf(+)中。从肝癌多药耐药细胞株SMMC - 772 1 /DOX中提取MDR1mRNA ,RT -PCR法扩增出约 2 6 9bp大小的特异性cDNA片段 ,采用SmaRT法克隆入载体PGEM - 3Zf(+)中。在体外转录成RNA。结果 通过测序证实重组质粒插入片断正确 ,在生理条件下 ,两个核酶均能定点切割MDR1mRNA成两段特定大小的片段。核酶的切割效率与作用时间、核酶与底物的比率、Mg2 + 浓度有关 ,1 96RZ的切割活性高于 1 79RZ。结论 核酶技术逆转肿瘤抗药性具有现实可能性。
- 刘顺英孙宁
- 关键词：多药耐药基因核酶基因克隆肝癌RT-PCR
