目的:探讨糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对结肠平滑肌细胞内钙离子浓度的影响及可能机制.方法:酶解法分离培养SD大鼠结肠平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC),α-actin免疫荧光鉴定;激光共聚焦显微镜检测(SMC)钙闪烁;蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)活性检测试剂盒检测细胞PKC活性.结果:细胞免疫荧光鉴定大鼠结肠SMC.不同浓度AGEs(50、100μg/mL)刺激结肠SMC后,与对照组比较,钙离子浓度显著降低(56.7%±3.6%、78.6%±5%vs 99.6%±3.1%,P<0.05,P<0.01),50μg/mL为体外最大有效浓度.与对照组相比,AGEs(50、100μg/mL)升高细胞内PKC活性.PKC抑制剂chelerythrine可阻断A G E s介导的钙离子浓度降低(70.7%±3.7%vs 87.1%±2.5%,P<0.05).结论:AGEs可激活PKC通路、从而降低胞内钙离子的浓度,最终抑制大鼠结肠平滑肌收缩.
目的:探讨糖基化终末产物(advanced glycation e n d p r o d u c t s,A G E s)对糖尿病(d i a b e t e s mellitus,DM)大鼠结肠动力及肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响.方法:SD大鼠48只,随机均分为4组,即正常对照组、正常+AGEs抑制剂氨基胍(a m i n o g u a n i d i n e,A G)干预组、D M组、D M+A G干预组.单次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)(60 mg/kg)构建DM大鼠模型,造模成功后,AG干预按1 g/L饮用水给药,持续至实验结束.ELISA、Western blot检测大鼠血清及结肠肌层AGEs水平,玻璃珠排出法检测结肠转运功能,MPA分析系统检测结肠环肌肌条收缩力,Western blot检测结肠肌层肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)的表达.各组间比较采用单因素方差分析和成组t检验.结果:与正常对照组相比,DM大鼠结肠肌层AGEs表达增多,血清AGEs水平升高(3.00μg/mL±0.34μg/mL vs 4.31μg/mL±0.73μg/mL,P<0.01),结肠转运时间延长(209.50min±48.88 min vs 297.00 min±35.71 min,P<0.01),环肌肌条收缩力减弱(2.17 g±0.57g vs 0.80 g±0.34 g,P<0.01),结肠肌层MLCK蛋白表达减少(1.46±0.11 vs 1.01±0.08,P<0.01).AG干预不影响大鼠血糖水平,但与DM组相比,DM+AG组大鼠结肠AGEs表达减少,血清AGEs水平降低(4.31μg/mL±0.73μg/mL vs 3.35μg/mL±0.58μg/mL,P<0.05),结肠转运时间缩短(297.00 min±35.71 min vs 212.13min±42.95 min,P<0.01)、肌条收缩力增强(0.80 g±0.34 g vs 1.49 g±0.44 g,P<0.01),结肠肌层MLCK蛋白表达升高(1.01±0.08 vs1.40±0.09,P<0.01).结论:AGEs可能通过减少结肠肌层MLCK蛋白表达参与DM大鼠结肠动力障碍的发生.
