孙朝晖
- 作品数：10 被引量：46H指数：6
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 研究白细胞介素 6(IL 6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK1 1 β75IL6和重组病毒RVJ1 2 3 ,通过两步重组构建能同时表达IL 6和乙型肝炎病毒 (HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75IL6。免疫动物并观察其免疫效果。 结果 Southernblot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL 6基因的插入 ,IL 6和HBsAg可同时表达。鼻腔吸入分别免疫BALB c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗 HBsAgIgA、IgG抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75)显著增加 ,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗 HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体。与对照组相比 ,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高。结论 非复制型痘苗病毒载体中表达的IL 6可增强其诱导的免疫反应 ,为细胞因子IL
- 郭斐陆柔剑孙朝晖马海伦李军阮力张颖妹马大龙
- 关键词：白细胞介素6免疫佐剂
- 痘苗病毒天坛株非必需区TA25R…TA36L的两步重组表达载体的构建被引量：1
- 1998年
- 针对痘苗病毒天坛株非必需区ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ，构建了可去除ＴＡ２６Ｒ至ＴＡ３５Ｌ的１０个ＯＲＦｓ，并同时表达ＬａｃＺ基因的两步重组表达载体ｐＡ２４２７ＬａｃＺ。通过两种方法（一步重组和两步重组）获得了在该区域表达ＬａｃＺ基因的重组痘苗病毒ＲＶＡ２４２７ＬａｃＺ。实验表明，一步重组法获得重组病毒的机率大约为１‰，两步重组法的机率可达６２．５‰。由此可见，两步重组法可显著提高重组病毒的筛选机率。ＬａｃＺ基因可以在该区域中稳定表达，重组病毒与野毒株在繁殖能力上没有明显差别，表明ＴＡ２５Ｒ－ＴＡ３６Ｌ是较稳定的外源基因插入区域。上述结果对于深入研究该非必需区的功能特点。
- 邹艳阮力娄元梅朱诚陆柔剑孙朝晖朱既明
- 关键词：痘苗病毒
- 非复制重组痘苗病毒中共表达的细胞因子(IL-5、IL-6)可增强重组病毒的免疫效果
- 痘苗病毒载体的毒力和免疫原性是研究人员在基因工程活疫苗研究中所关心的两个方面。非复制型病毒载体的研究从根本上改变了痘苗病毒的毒副作用,为痘苗病毒载体疫苗的安全应用提供了可能性,但非复制重组痘苗病毒改变了传统的免疫接种方式...
- 郭斐陆柔剑孙朝晖阮力
- 文献传递
- IL-5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效果的影响被引量：8
- 2001年
- 利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 。
- 郭斐陆柔剑孙朝晖马海伦张颖妹马大龙阮力
- 关键词：白细胞介素5粘膜免疫佐剂免疫效果
- 非复制重组痘苗病毒天坛株C-K缺失区表达载体的构建及重组病毒生物学性状的研究被引量：7
- 2001年
- 将反向串联的痘苗病毒启动子 p11k和 p7.5k表达结构引入非复制痘苗病毒质粒载体 ,得到非复制痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75、pNEOCK75 11β、pNEOCK1175和 pNEOCK75 11。利用载体 pNEOCK11β75、pNEOCK75 11β及 pNEOCK11β75IL6和RVJ12 3重组病毒进行同源重组 ,分别得到非复制重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75、RVJ12 3Δ75 11β及RVJ12 3Δ11β75IL6。Southern blot证实 :重组病毒RVJ12 3Δ11β75C K片段间大片段基因的稳定缺失 ,同时 β 半乳糖苷酶基因插入到缺失区内并稳定表达 ,不影响另外非必需区外源基因的表达 ,缺失区内两外源基因的表达无相互干扰 。
- 郭斐陆柔剑娄元梅孙朝晖阮力
- 关键词：痘苗病毒
- 三种淋巴因子在重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒毒力和免疫效果影响的初步研究被引量：2
- 1996年
- 研究了巨噬细胞游走抑制因子（ＭＩＦ）、白细胞介素６（ＩＬ－６）及白细胞介素２（ＩＬ－２）等三种淋巴因子分别在含有甲型肝炎病毒基因的重组痘苗病毒中表达后，对病毒毒力及免疫效果的影响。使用Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠和家兔进行免疫的初步结果显示，表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒免疫后特异性抗体反应明显增强，痘苗病毒抗体及甲型肝炎病毒抗体阳转小鼠数量分别由对照的３／１０和１／１０提高到８／１０和７／１０，痘苗病毒和甲型肝炎病毒抗体滴度也明显升高。家兔初次免疫痘苗病毒后，抗体平均滴度比对照病毒组提高约６倍，并能促使甲型肝炎病毒抗体阳转。而ＩＬ－２和ＭＩＦ重组痘苗病毒免疫后，特异性抗体反应升高不明显。重组痘苗病毒毒力变化结果显示，兔皮内接种ＩＬ－２和ＭＩＦ均显示了一定的减毒能力，二者的重组痘苗病毒毒力均比单纯ＴＫ病毒下降接近１个对数，而表达ＩＬ－６的重组痘苗病毒的毒力与单纯ＴＫ病毒对照无差别。
- 王琴阮力陆柔剑孙朝晖朱诚马大龙朱既明
- 关键词：淋巴因子MIFIL-6IL-2重组痘苗病毒
- 麻疹病毒L4株血凝素基因的克隆与表达及免疫原性被引量：2
- 1996年
- 从部分减毒的麻疹病毒Ｌ４株感染的Ｖｅｒｏ细胞中提取ｍＲＮＡ、进行逆转录及ＰＣＲ扩增。克隆到了长１．９ｋｂ的４个血凝素基因克隆。ＤＮＡ序列分析发现，Ｌ４株的血凝素基因有４个碱基与Ｅｄｍｏｎｓｔｏｎ株不一致，造成３个氨基酸差异。这４个克隆在重组痘苗中表达后，３个克隆的表达产物均表现出良好的血凝活性、助融合活性（Ｆｕｓｉｏｎｈｅｌｐｅｒ）和较强的免疫原性。表达血凝素分子量分别为未糖化的６８ｋＤ以及糖化的７９ｋＤ分子，免疫的兔血清显示出较高的ＥＬＩＳＡ（１：８００）～１：３２００）、ＨＩ（１：１６０－：１：１２８０）、ＨＬＩ（１：１６０～１：６４０）及ＮＴ（１：１００～１：４８６）滴度。麻疹病毒ＬＡ株的血凝素基因的克隆为麻疹重组疫苗的研究提供了重要材料。
- 杨克俭阮力陆柔剑孙朝晖朱诚朱既明
- 关键词：麻疹病毒基因表达免疫原性
- 表达狂犬病毒糖蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建与鉴定被引量：7
- 1999年
- 目的提高表达狂犬病毒糖蛋白（ＲＧ）的重组痘苗病毒的安全性。方法将编码中国狂犬病毒５ａＧ株糖蛋白的基因，插入痘苗病毒天坛株的ＴＫ区，获得重组病毒ＶＴＫＲＧ，通过两步同源重组，删除ＣＫ片段间与痘苗病毒毒力及宿主范围相关的基因，得到非复制型重组痘苗病毒ＶＴＫＲＧ△ＣＫ。结果经ＰＣＲ鉴定，ＣＫ间的核酸片段被成功删除，其缺失性状能稳定地遗传。ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ及间接免疫荧光结果表明，ＶＴＫＲＧ△ＣＫ能有效地表达ＲＧ。该病毒在鸡胚成纤维细胞中繁殖，在人源细胞如ＴＫ１４３中几乎不增殖。动物实验证实，ＶＴＫＲＧ△ＣＫ免疫小鼠后能诱生中和抗体并能保护小鼠抵抗致死剂量狂犬病毒（ＲＶ）的攻击。结论ＶＴＫＲＧ△ＣＫ具有良好的免疫原性和更高的安全性。
- 李萍胡巧玲孙朝晖孙朝晖王继麟阮力
- 关键词：狂犬疫苗减毒
- 非复制型多价重组痘苗病毒粘膜与细胞免疫效果被引量：8
- 1999年
- 对已构建的同时表达乙型肝炎病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ以及ＩＬ２的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１，及其相应的复制型重组病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１，进行了兔皮内毒力、粘膜免疫和细胞免疫效果的比较研究。发现ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１在兔皮内的毒力明显低于ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经空肠内免疫家兔４周后，可在肠粘膜表面诱发特异性ＩｇＡ抗体，在血液中诱发特异性的ＩｇＧ抗体，其抗ＳＳ１和抗麻疹病毒ＩｇＡ和ＩｇＧ的抗体滴度与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１免疫组相同，抗痘苗病毒ＩｇＧ抗体比ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１免疫组低１６倍。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经腹腔注射免疫４周的小鼠脾细胞，可在体外刺激产生高水平的麻疹病毒及痘苗病毒特异性ＣＴＬ，与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１无显著性差异。这些结果初步证实了非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载体的有效性及安全性。
- 马海伦郭斐孙朝晖陆柔剑张帆阮力
- 关键词：毒力粘膜免疫
- 同时表达多种外源基因的非复制型重组痘苗病毒的构建被引量：17
- 1999年
- 利用非复制型痘苗病毒载体，构建了能同时表达乙型肝炎（乙肝）病毒ＳＳ１、麻疹病毒ＨＡ和Ｆ及白细胞介素２（ＩＬ２）的非复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１，及其相应的复制型重组痘苗病毒ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１。这两株重组病毒在ＣＥＦ细胞上连续传至第２５代，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实，两株病毒均在Ａ２４、Ａ２７间稳定整合有ＳＳ１基因，非复制型重组病毒Ｃ、Ｋ间基因稳定缺失。经ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法检测，这两株病毒均可稳定分泌表达ＳＳ１蛋白，其分泌表达的ＳＳ１蛋白与ＣＨＯ细胞表达的ＳＳ１蛋白性质相近，接近于天然。经免疫打点检测，两株病毒均可稳定表达麻疹病毒的ＨＡ与Ｆ蛋白以及ＩＬ２。而且ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１与ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１表达多种外源抗原的水平无显著性差异。ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫＳＳ１经皮内注射免疫家兔，４周后可诱发抗乙肝病毒ＳＳ１、抗麻疹病毒及抗痘苗病毒的特异性ＩｇＧ抗体；加强免疫２周后，特异性抗体滴度可上升４～１６倍，与其初始病毒ＶＨＦＩＬ２ΔＣＫ诱发的抗体水平相同，比ＶＨＦＩＬ２ＳＳ１诱发的抗体滴度低０～４倍。非复制型多价重组痘苗病毒的构建，为评价非复制型痘苗病毒载体作为多价疫苗载?
- 马海伦孙朝晖陆柔剑娄元梅郭斐张帆阮力
- 关键词：多价疫苗痘苗病毒载体免疫效果
