目的研究血管内皮细胞在冠状动脉疾病中的作用,着重阐明转录因子叉头框蛋白O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)调控靶标基因表达和可变剪接在血管内皮细胞损伤中的作用。方法通过在人血管内皮细胞系中过表达FOXO3a,利用转录组技术获得转录组数据。分析FOXO3a调控的潜在靶标基因的表达水平和可变剪接模式,以及这些基因的功能。结果FOXO3a过表达的HUVEC细胞中,与对照组比较,419个基因差异表达。基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)分析结果显示,上调基因富集在炎性信号通路,下调基因富集在代谢通路。基于转录组数据进行可变剪切分析,发现1784个可变剪切事件的模式在FOXO3a过表达组和对照组间发生显著差异。GO和KEGG分析结果显示,差异可变剪切基因富集在细胞凋亡相关通路。结论FOXO3a通过调控免疫炎症、脂类代谢和细胞凋亡相关基因的表达和可变剪接,影响血管内皮细胞凋亡,可能影响冠心病的发生。
目的:探究微小核糖核酸-21(mi R-21)对心肌缺血大鼠心肌细胞Toll样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)通路的影响。方法:取40只SD大鼠随机分为假手术组(10只)和建模组(30只),建模组大鼠通过左冠状动脉前降支(LAD)结扎术建立心肌缺血大鼠模型,假手术组大鼠仅开胸后不做其他处理即缝合。将建模成功大鼠随机分为对照组(转染mi R-NC慢病毒)、沉默组(转染mi R-21 antagomir慢病毒)、过表达组(转染mi R-21 mimics慢病毒),假手术组注射等量生理盐水。苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织损伤情况;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹法(WB)检测TLR-4、NF-κB、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)信使核糖核酸(m RNA)和蛋白表达及磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)水平。结果:对照组大鼠心肌纤维排列紊乱,大量心肌细胞肿胀坏死并伴随炎症细胞浸润,沉默组大鼠心肌组织损伤情况进一步加重,而过表达组大鼠心肌组织损伤现象得到明显改善。与假手术组比,对照组、沉默组、过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax m RNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 m RNA及其蛋白表达降低(P<0.05);与对照组比,沉默组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax m RNA表达与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平升高,Bcl-2 m RNA及其蛋白表达降低(P<0.05),过表达组大鼠心肌细胞凋亡率,TLR-4、NF-κB、Caspase-3、Bax m RNA与其蛋白表达,以及p-NF-κB p65水平降低,Bcl-2 m RNA及其蛋白表达升高(P<0.05)。结论:下调mi R-21表达可促进TLR-4/NF-κB通路表达,加重心肌缺血大鼠心肌损伤。
