张晋霞
- 作品数：6 被引量：7H指数：1
- 供职机构：暨南大学生命科学技术学院更多>>
- 发文基金：中央高校基本科研业务费专项资金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定
- 目的:为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。 方法:从真核表达载体pLEXm-ds-Diabody中扩增出ds-Diabody基因,...
- 张晋霞
- 关键词：毕赤酵母生物学活性肿瘤细胞
- 文献传递
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体抑制人肺癌细胞生长的作用研究被引量：1
- 2016年
- 目的研究二硫键稳定的人源性抗b FGF双链抗体(ds-Diabody)对人肺癌A549细胞的体内外增殖抑制作用。方法利用镍离子亲和层析和离子交换层析的方法纯化得到ds-Diabody,间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK-8法检测ds-Diabody对人肺癌A549细胞的增殖抑制作用,Western blot分析其作用于肿瘤细胞的机制,Transwell检测其对肿瘤细胞迁移侵袭的影响。建立裸鼠皮下移植瘤模型,记录各处理组裸鼠皮下移植瘤的体积及裸鼠体质量变化。免疫组化法检测肿瘤组织CD31和LYVE1的表达情况,初步探讨抗b FGF的人源性ds-Diabody抗体的抗肿瘤机制。结果成功纯化得到具有抗原结合活性的ds-Diabody。CCK-8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌A549细胞株的增殖。Western blot结果表明ds-Diabody能有效阻断与b FGF相关的MAPK和Akt通路。Transwell结果表明ds-Diabody可以显著抑制A549细胞的迁移及侵袭。裸鼠体内试验中,ds-Diabody抗体显著地抑制了肿瘤的生长,抑制率为86.54%。免疫组化的结果显示ds-Diabody抗体处理组肿瘤组织中微血管密度和淋巴管密度均有下降。结论抗bFGF的人源性ds-Diabody抗体可有效地抑制人肺癌A549细胞的生长。
- 蔡亚雄张晋霞姜浩武于云飞姚双娥邓宁
- 关键词：人肺癌细胞淋巴管新生
- 重组人EGFL6在HEK293细胞中的瞬时表达被引量：4
- 2013年
- 旨在通过构建EGFL6的真核表达载体,在HEK293T细胞中进行表达,并利用HEK293T细胞表达的EGFL6条件培养基,探讨EGFL6对人黑色素瘤A375细胞和人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响。利用PCR方法亚克隆得到的EGFL6基因片段及EGFP基因片段,用重叠PCR方法构建成EGFP-EGFL6融合基因片段,并分别将测序正确的EGFP-EGFL6融合基因片段及EGFP基因片段构建到真核表达载体pAAV中。表达载体质粒去内毒素纯化后,瞬时转染HEK293T细胞进行表达,荧光定位分析和Western blot检测EGFL6的表达。CCK-8试验分析含EGFP-EGFL6融合蛋白的HEK293T条件培养基对A375细胞和SKOV3细胞的增殖能力的影响。结果显示,酶切鉴定pAAV-EGFP-EGFL6和pAAV-EGFP两个重组表达载体均构建成功;EGFP荧光定位及Western blot结果均显示EGFP-EGFL6在HEK293T细胞中成功表达;增殖抑制试验结果显示EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖,对肿瘤细胞的促增殖率分别达到(37.79±14.05)%和(30.53±6.31)%。成功地将EGFP应用于EGFL6真核表达载体的构建与表达,结果表明人EGFL6促进了A375和SKOV3细胞的增殖。
- 亢中奎张晋霞姜浩武王宏宋其芳黄建芳邓宁
- 关键词：肿瘤细胞
- 抗FGF2人鼠嵌合抗体在HEK293T细胞中的表达优化
- 2014年
- 目的:FGF2是肿瘤血管新生过程中最重要的因子之一,因此通过制备抗FGF2人鼠嵌合抗体中和其发挥作用,以达到抑制肿瘤生长的目的。方法:利用分泌抗FGF2抗体的杂交瘤细胞株IgG9B9和人B淋巴细胞,分别克隆抗体轻链可变区V L、重链可变区V H和人重链恒定区C H基因,从pComb3λ载体中扩增出人λ链恒定区C L基因,通过重叠PCR,将V L,V H和C L,C H片段分别连接形成嵌合抗体的轻链L和重链H,将L/H链以单独构建或串联于同一载体的方式,构建抗FGF2嵌合抗体表达载体,并通过调控元件WPRE优化载体、共转染促生长因子aFGF以及调整表达温度等方式提高嵌合抗体在真核细胞中的表达。结果:成功构建了优化表达载体PLexmWPRE、PLexm-aFGF;L、H链基因也成功构建,并以L、H或L-F2A-H(2A连接肽将L和H连接起来)的方式分别成功连接到PLexm,PLexm-WPRE载体中。转染细胞上清的ELISA鉴定结果表明,L/H链单独构建要比串联构建的方式具有更高的表达水平,WPRE能有效促进抗体的表达而aFGF并不能促进其表达,与31、37℃相比,33℃时抗体的表达量最高,同时嵌合抗体表现出了很好的结合活性及中和活性,竞争IC50=6.25μg/ml。通过亲和层析获得了高纯度的抗FGF2嵌合抗体。结论:在33℃下,人鼠嵌合抗体基因在WPRE存在下表达量最高,且与抗原FGF2有很好的结合活性及中和活性,为临床应用奠定了基础。
- 王金胜姜浩武张晋霞潘磊赵凤芝于云飞蔡亚雄邓宁
- 关键词：碱性成纤维生长因子嵌合抗体真核表达载体
- VEGF/bFGF复合多肽抗体的制备及对卵巢癌细胞增殖抑制作用被引量：1
- 2014年
- 目的研究VEGF/bFGF复合多肽(VBP3)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)血管新生和人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法通过镍离子柱亲和层析和离子交换层析方法纯化出诱导表达的VBP3蛋白,免疫Balb/c小鼠制备抗bFGF和抗VEGF的多克隆抗体,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测抗体效价和特异性。成管试验研究抗体对HUVEC细胞的成管影响,CCK-8检测抗体对SKOV3增殖抑制的影响。Western blot检测抗体对bFGF和VEGF下游信号通路中Erk1/2和Akt磷酸化的影响。结果 SDS-PAGE鉴定出了纯度较高的VBP3蛋白;ELISA方法检测出了高滴度的抗体;HUVEC的成管实验结果表明VBP3多克隆抗体在一定程度上抑制了HUVEC的成管;CCK-8检测出抗体体外抑制了SKOV3细胞增殖,在抗体质量浓度为100μg/ml时抑制率达到39.20%。Western blot结果表明抗bFGF和抗VEGF多克隆抗体显著抑制FGFR和VEGFR下游信号通路中Erk1/2和Akt的磷酸化。结论 VBP3可能作为一种多肽疫苗抑制肿瘤的生长。
- 潘磊张晋霞王金胜翁锐强邓宁
- 关键词：BFGFVEGF增殖抑制
- 二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体的酵母表达及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的为提高小分子抗体表达量,利用酵母表达系统表达二硫键稳定的人源性抗bFGF双链抗体(ds-Diabody)并研究其生物学活性。方法将ds-Diabody基因构建到酵母表达载体中获得重组质粒pPICZαA-ds-Diabody,经BglⅡ线性化电转至毕赤酵母GS115中,甲醇诱导表达。表达产物经SDS-PAGE及Western blot鉴定,并进行镍离子亲和层析和阴离子交换层析纯化。间接ELISA检测其抗原结合活性,CCK8法和划痕实验检验其肿瘤抑制作用。结果成功构建人源性抗bFGF ds-Diabody酵母表达载体,并获得4株高表达酵母工程菌,经1%甲醇诱导96 h表达量即可恒定,表达量可达158 mg/L。SDS-PAGE及Western blot结果显示,目的蛋白大小约Mr35 000左右。通过两步纯化方案,目的蛋白的纯度可达95%以上。ELISA结果显示纯化的ds-Diabody可与bFGF特异性结合。CCK8结果显示,纯化的ds-Diabody可剂量依赖性地抑制人肺癌细胞株A549的增殖,最大抑制率为43.4%。划痕实验表明ds-Diabody可以抑制肿瘤细胞的迁移。结论研究结果表明人源性抗bFGF ds-Diabody在毕赤酵母中可获得高效表达,且具有很好的生物学活性。
- 张晋霞姜浩武亢中奎潘磊王金胜刘羿辰邓宁
- 关键词：肺癌细胞
