张洪海
- 作品数：55 被引量：255H指数：8
- 供职机构：首都医科大学附属北京佑安医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学更多>>
- 经肝动脉化疗栓塞术联合射频消融治疗巴塞罗那B期原发性肝癌的效果及预后影响因素分析被引量：32
- 2019年
- 目的探讨经肝动脉化疗栓塞术(TACE)联合肝癌射频消融(RFA)治疗巴塞罗那(BCLC) B期原发性肝癌患者的疗效及其预后影响因素。方法选择2007年1月-2012年1月在首都医科大学附属北京佑安医院住院行TACE联合RFA治疗的BCLC-B期原发性肝癌患者154例。收集所有患者基线实验室及影像检查资料,通过门诊、住院或电话随访所有病例。采用KaplanMeier法绘制生存曲线,采用log-rank检验生存曲线,将单因素分析中P <0. 05的指标纳入多因素Cox回归分析。结果 154例BCLC-B期肝癌患者,中位生存期37个月,1、2、3、5年生存率分别为82. 5%、59. 7%、50. 6%和36. 1%。将患者按照BCLC-B期亚分期分为B1、B2、B3、B4期,B1期患者生存率明显高于B2～B4期,差异有统计学意义(χ~2=16. 881,P=0. 001); RFA后1个月达到完全消融、年龄<60岁、术前AFP <400 ng/ml、胆碱酯酶≥4000 U/L、TBil≤21μmol/L、Child-Pugh A级,肿瘤数目≤3个、肿瘤最大直径<3 cm组患者生存率分别高于不完全消融、年龄≥60岁、AFP≥400 ng/ml、胆碱酯酶<4000 U/L、TBil> 21μmol/L、ChildPugh B级、肿瘤数目> 3个、肿瘤最大直径> 5 cm组,差异均有统计学意义(χ~2=173. 002,P <0. 001;χ~2=6. 336,P=0. 012;χ~2=10. 765,P=0. 001;χ~2=6. 933,P=0. 008;χ~2=4. 624,P=0. 032;χ~2=5. 570,P=0. 018;χ~2=6. 761,P=0. 009;χ~2=7. 430,P=0.024)。Cox多因素回归分析显示消融评价[P <0. 001,比值比(OR)=21. 950,95%可信区间(95%CI):11. 817～40. 772]、ChildPugh分级(P=0. 002,OR=2. 190,95%CI:1. 329～3. 609)、AFP水平(P=0. 014,OR=1. 760,95%CI:1. 122～2. 760)、B期亚分期(P=0. 004,OR=2. 178,95%CI:1. 284～3. 694)是BCLC-B期肝癌患者RFA治疗后生存期的影响因素。结论 TACE联合RFA治疗BCLC-B期肝癌安全有效,不完全消融、AFP≥400 ng/ml、Child-Pugh B级、BCLC-B期亚分期越晚是影响BCLC-B期肝癌RFA治疗后生存期的独立危险因素。
- 孙玉张洪海生守鹏李聪袁春旺崔石昌扈彩霞刘博君李星明张永宏郑加生
- 关键词：肝肿瘤导管消融术预后
- 分泌型碱性磷酸酶示踪的TA克隆真核表达载体的构建被引量：3
- 2010年
- 目的制备具有分泌型碱性磷酸酶示踪作用和真核表达功能的TA克隆载体。方法把CMV启动子区-TA克隆位点-BGH多聚腺苷酸区序列克隆到pSEAP2-control载体中,构建成具有真核表达功能并外分泌碱性磷酸酶(SEAP)的pcDNA5AP-前T载体。增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到pcDNA5AP-T载体上并进行EGFP表达分析和SEAP活性检测。结果 pcDNA5AP-EGFP以400ng/孔转染6孔板293T细胞,EGFP表达率达50%,SEAP活性比对照组高20倍。结论成功构建了具有真核表达功能并外分泌碱性磷酸酶的pcDNA5AP-T载体。
- 张洪海计云霞孙玉张玉林乔录新崔丹陈德喜
- 关键词：T载体真核表达
- NRTIs引起的细胞线粒体DNA缺失的检测及其意义
- 2010年
- 目的应用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative PCR)检测核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)司它夫定(d4T)与齐多夫定(AZT),对HepG2细胞线粒体DNA数量的影响,并探讨其意义。方法用0、3、10、100、200、300μmol/L d4T及AZT处理HepG2细胞2周,应用实时荧光定量PCR检测不同浓度药物作用后线粒体DNA的相对含量。结果成功建立线粒体DNA的定量PCR检测方法。d4T组中,药物浓度为0、3、10、100μmol/L的4个组,细胞线粒体DNA相对含量分别为(96.94±5.77)、(53.73±7.14)、(20.78±3.10)、(1.37±0.29),4个组比较差异有统计学意义(P<0.01);而药物浓度为200及300μmol/L的两个组,细胞均死亡。AZT用药组中,药物浓度为0-300μmol/L的6个组,细胞线粒体DNA相对含量分别为(96.94±5.77)、(108.84±7.80)、(172.56±4.70)、(199.51±10.37)、(158.74±6.64)、(64.06±6.27),差异有统计学意义(P<0.01)。结论实时荧光定量PCR检测细胞线粒体DNA方法切实可行,d4T引起细胞线粒体DNA缺失呈浓度依赖性,AZT对细胞线粒体DNA的影响表现为先增高后降低,其机制有待进一步研究。
- 孙玉张洪海石英柳雅立张彤吴昊陈德喜
- 关键词：核苷类逆转录酶抑制剂聚合酶链反应
- 天门冬氨酸氨基转移酶与血小板比值对肝动脉栓塞联合射频消融治疗乙型肝炎相关肝细胞癌患者预后的影响被引量：2
- 2020年
- 目的研究天门冬氨酸氨基转移酶与血小板比值(aspartate aminotransferase to platelet ratio index,APRI)对肝动脉栓塞联合射频消融治疗乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者预后的评估价值。方法选取2008年1月至2010年12月在首都医科大学附属北京佑安医院接受肝动脉栓塞联合射频消融治疗的201例HBV相关HCC患者为研究对象。收集患者基线临床资料,包括性别、年龄、病史、基础肝病、白细胞(white blood cell,WBC)、血小板(blood platelet,PLT)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)、总胆红素(total bilirubin,TBil)、胆碱酯酶(cholinesterase,CHE)、凝血酶原时间(prothrombin time,PT)、甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、Child-Pugh分级、肿瘤数目、肿瘤最大直径、肿瘤部位及腹水。计算各患者APRI值,采用受试者工作特征(receiver operator characteristic,ROC)曲线确定基线APRI的临界值,并将患者分为低APRI组(APRI≤临界值)及高APRI组(APRI>临界值)。采用Kaplan-Meier法进行单因素生存分析,绘制生存曲线,采用Log-rank检验比较组间差异,采用Cox多因素回归分析影响HBV相关HCC患者肝动脉栓塞联合射频消融治疗总生存率的独立危险因素。结果根据ROC曲线确定基线APRI临界值为1.30。低APRI组104例,高APRI组97例,低APRI组与高APRI组患者间肝硬化(无/有:62/41vs 42/56)、WBC计数(<4×10~9/L/≥4×10~9/L:29/74 vs 55/43)、ALT(<45 U/L/≥45 U/L:82/21vs 63/35)、ALB(<35 g/L/≥35 g/L:24/79 vs 49/49)、TBil(≤21μmol/L/> 21μmol/L:73/30vs 40/58)、PT(≤12.8 s/> 12.8 s:79/24 vs 46/52)、CHE(<4000 U/L/≥4000 U/L:16/87 vs43/55)、腹水(有/无:4/99 vs 15/83)及Child-Pugh分级(A级/B级:91/12 vs 70/28)的差异有统计学意义(P均<0.05)。低APRI组患者生存率显著高于高APRI组,差异有统计学意义(χ~2=27.84,P <0.001)。Cox多因
- 张洪海孙玉生守鹏张永宏郑加生
- 关键词：肝细胞癌射频消融预后
- 微RNA-758／星形细胞上调基因1信号通路调控肝癌细胞转移的分子机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨微RNA（miR）-758对肝癌细胞转移的影响及其作用机制，研究miR-758对促癌基因星形细胞上调基因1（AEG-1）的调控作用。方法用miR-758瞬时转染HepG2细胞，通过Transwell迁移和侵袭实验，观察miR-758对肿瘤细胞转移的影响。利用CCK8法检测细胞增殖活性，观察miR-758对肿瘤细胞增殖的影响。使用流式细胞仪定量分析细胞周期，观察miR-758对细胞周期的影响。通过上皮间充质转化（EMT）实验，观察miR-758是否影响肝癌细胞EMT。用miR-758瞬时转染人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察miR-758对管腔形成的影响。软件预测显示miR-758的靶基因为AEG-1。将含miR-758结合位点的AEG-1 3′UTR构建到荧光素酶表达载体中，用miR-758和AEG-1基因3′UTR载体共同转染HepG2细胞，验证miR-758的靶基因是否为AEG-1。用miR-758瞬时转染HepG2细胞，检测AEG-1蛋白的表达量变化。结果miR-758过表达可抑制HepG2细胞的迁移、侵袭，抑制细胞增殖和周期，抑制HepG2细胞EMT，抑制HUVEC细胞管腔形成。miR-758和AEG-1基因3′UTR质粒共同转染HepG2细胞后，荧光素酶的表达量降低。miR-758靶点AEG-1 3′UTR突变后，荧光素酶的表达量恢复。另外，细胞中miR-758含量升高时，Western Blot检测到AEG-1蛋白水平的表达量降低。结论miR-758负调控癌症转移的多个步骤，包括细胞迁移、侵袭、增殖、EMT以及血管新生等。miR-758下游靶基因为AEG-1。
- 李聪王宏光吕俊生龙江扈彩霞尹甜崔石昌张雯雯王勋生守鹏张洪海孙玉郑加生
- 关键词：肝癌肿瘤转移
- P53凋亡刺激蛋白2在gp120诱导的神经细胞凋亡中的作用被引量：1
- 2013年
- 目的研究P53凋亡刺激蛋白2(ASPP2)在人类免疫缺陷病毒外膜糖蛋白(gp120)诱导的神经细胞凋亡中的作用。方法体外培养小鼠大脑皮质神经细胞,给予gp120处理,免疫荧光技术检测P53和ASPP2在细胞内的表达与分布,蛋白印迹法检测活性caspase-3表达情况,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测神经细胞凋亡。分析gp120对神经细胞内P53、ASPP2表达影响,微小RNA干扰技术反向验证ASPP2的作用。结果 gp120处理前,神经细胞内无P53表达,ASPP2表达在细胞浆中;gp120处理后,神经细胞出现P53表达并定位于细胞核,部分ASPP2由细胞浆移位到细胞核,与P53定位于同一部位。gp120处理前,caspase-3无活性,神经细胞凋亡率为5%,gp120处理后caspase-3被激活,神经细胞凋亡率为50%,微小RNA干扰ASPP2表达后,神经细胞凋亡率由50%降低到15%。结论 ASPP2参与了gp120诱导的经P53介导的神经细胞凋亡。
- 孙玉栾森张洪海邓尧郑加生陈德喜
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征人类免疫缺陷病毒细胞凋亡神经元
- 1型HIV感染多重PCR检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 目的建立检测人免疫缺陷病毒1型（HIV-1）的多重巢式PCR（nPCR）和多重逆转录PCR（RT-PCR）方法。方法针对HIV-1的gag、pol和gp41区设计3套引物，分别建立检测HIV DNA的多重nPCR和检测HIV RNA的多重RT—PCR方法；以建立的PCR方法对150例HIV抗体阳性患者及50例阴性患者进行检测，以ELISA／免疫印迹实验（Westen blot，WB）相结合的抗体检测结果（ELISA／WB）为金标准，计算所建立的PCR方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确性、可重复性；分别用建立的多重nPCR和多重RT-PCR检测73份阳性标本，并与HIV-1核酸序列扩增技术（NASBA法）进行检测敏感度的比较；对43份检测阳性的DNA标本进行亚型鉴定。结果多重nPCR的检测敏感度为98．0％（147／150），多重RT—PCR的敏感度为91．3％（137／150），2种方法的特异度均为100％（50／50），多重nPCR和多重RT—PCR的阳性预测值分别为98．0％（147／150）和91．3％（137／150），阴性预测值均为100％（50／50），准确性分别为98．5％和93．5％。可重复性分别为96．7％（87／90）和93．3％（84／90）；多重nPCR的检测敏感度（97．3％）高于NASBA法（72．6％），差异有统计学意义（X^2=17．34，P〈0．01），多重RT—PCR的检测敏感度（79．5％）与NASBA法相比，差异无统计学意Y-（X。=0．94，P=0．332）；检测的43份HIV DNA阳性标本分别为37份B’亚型、5份AE亚型和1份BC亚型。结论成功地建立了多重nPCR和多重RT—PCR方法，操作简便、价格低廉，具有较高的敏感度和特异度和可重复性，能覆盖我国最主要的流行病毒株。
- 代丽丽陈德喜石英魏飞力绳波吴亚松柳雅立张洪海梁连春张彤吴昊
- 关键词：HIV感染HIV-1聚合酶链反应逆转录聚合酶链反应
- 乙肝相关肝癌射频消融术后复发因素分析被引量：2
- 2019年
- 目的探讨原发性肝癌射频消融(radiofrequency ablation, RFA)术后复发的相关危险因素,为延长患者生存期提供指导依据。方法选择2006年9月至2014年5月在首都医科大学附属北京佑安医院住院行肝癌RFA治疗的原发性肝癌患者330例,所有患者均于RFA术后出现肝癌复发。收集患者临床资料,跟踪随访所有病例。单因素生存分析采用Kaplan-Meier法,多因素分析采用Cox回归分析。结果所有患者复发时间为术后6~74个月,中位无病生存期(disease-free survival, DFS)25个月。单因素分析显示,血清AST(P=0.011)、AFP(P=0.000)、合并腹水(P=0.026)、ChildPugh分级(P=0.004)、肿瘤数目(P=0.006)、肿瘤最大直径(P=0.000)、巴塞罗那分期(Barcelona clinic liver cancer,BCLC)(P=0.000)是影响肿瘤复发转移的因素;多因素分析显示,Child-Pugh B级(OR=1.363, P=0.025)、AFP≥400 ng/ml(OR=1.565,P=0.001)、肿瘤最大直径>3 cm(OR=1.644,P=0.005)、BCLC分期晚(OR=3.320,P=0.000)是肝癌RFA术后复发的独立危险因素(P <0.05)。结论 Child-Pugh分级、AFP、肿瘤最大直径、BCLC分期是影响肝癌RFA术后复发的独立因素。综合评价患者肿瘤情况,制订个体化防治方案,有助于减少肿瘤复发,延长生存期。
- 张洪海孙玉生守鹏李聪刘博君孙斌张英华崔雄伟郑加生
- 关键词：原发性肝癌射频消融肿瘤复发
- 实时PCR检测HIV-1逆转录酶活性方法的建立
- 人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)为逆转录病毒科慢病毒属。本研究拟应用实时荧光定量PCR技术方法为基础，体外合成tRNA<'lys-3>分子，并模拟HTV-1的逆转录(由RNA合成cDNA)起始过程，试图建立一种更为迅捷...
- 魏飞力柳雅立石英张洪海吴亚松计云霞陈新月吴昊陈德喜
- 关键词：实时PCR检测人类免疫缺陷病毒-1逆转录酶活性
- 文献传递网络资源链接
- 艾滋病痴呆复合征抗病毒治疗研究进展
- 2010年
- 张洪海孙玉陈德喜
- 关键词：中枢神经系统HIV
