张长志
- 作品数：9 被引量：15H指数：2
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- 玉米大斑病菌转录因子StStel2的结构分析及其下游靶基因的筛选
- 本实验室在前期研究中已经克隆了玉米大斑病菌Fus3/Kss1-homolog MAPK级联途径下游的一个转录因子基因StSTE12，并获得了3株该基因的不同沉默程度RNAi转化子。本研究在此基础上利用生物信息学技术，明确...
- 张长志
- 关键词：玉米大斑病菌转录因子调控基因
- 文献传递
- 拟南芥MPK3、MPK4、MPK6在酵母hog1Δ中的渗透调节作用被引量：2
- 2012年
- 【目的】研究拟南芥MAPK信号转导途径的关键基因MPK3、MPK4、MPK6的功能,明确其在渗透调节中的作用。【方法】构建拟南芥MPK3、MPK4、MPK6的酿酒酵母表达载体,遗传转化酿酒酵母渗透调节功能丧失的hog1?突变体,筛选得到阳性转化子,并分析其在渗透胁迫下的表型特征。【结果】扩增得到了拟南芥MPK3、MPK4、MPK6的全长cDNA序列,构建了上述3个基因的表达载体,并筛选得到了3个基因的阳性转化子。在1 mol.L-1 KCl、0.3 mol.L-1 LiCl、1 mol.L-1 NaCl、1 mol.L-1 Sorbitol的盐胁迫处理下,阳性转化子生长状态良好,与野生型的表型基本一致,均恢复了hog1?对盐胁迫的抗性。在盐胁迫处理下,hog1?细胞形态异常且体内甘油含量较野生型低,而转化子的形态和体内甘油含量均恢复到正常的表型。【结论】MPK3、MPK4、MPK6均能够使酿酒酵母渗透调节功能丧失突变体hog1?恢复对盐胁迫的抗性,具有渗透调节的功能。
- 李坡谷守芹杨阳吴敏王梅娟张长志董金皋
- 关键词：拟南芥MAPK
- 玉米大斑病菌水甘油通道蛋白基因StFps1的克隆及敲除载体的构建
- 玉米大斑病(Northern Leaf Blight of Corn)是玉米上的重要叶部病害，我国东华北、西北和南方山区的玉米产区较易流行，严重年份感病品种减产可达50％。引起玉米大斑病的致病菌为玉米大斑病菌(Setos...
- 范钰张长志杨阳谷守芹董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌基因克隆基因敲除
- 玉米大斑病菌STK2的基因组定位、蛋白质结构预测及其表达被引量：4
- 2013年
- 【目的】确定玉米大斑病菌STK2在基因组中的位置;解析目的蛋白质Stk2的结构特征;构建STK2真核表达载体,获得真核表达体系中的胞外分泌蛋白。【方法】利用生物信息学方法,确定STK2在玉米大斑病菌基因组中的确切位置,解析Stk2蛋白质的结构特征;根据STK2的ORF序列及真核表达载体pPIC9K的多克隆位点设计引物,构建真核表达载体,采用电击转化法将重组质粒转入宿主菌GS115中进行诱导表达,利用SDS-PAGE检测并鉴定目的蛋白质。【结果】玉米大斑病菌STK2的ID为91433,该基因位于scaffold_3正链的1561986-1563262位置;Stk2蛋白具有MAPK类蛋白激酶的特征性保守结构域,其二级结构主要以α螺旋和无规则卷曲为主,β折叠较少且主要存在于N端,其三级结构具有1个较小的N端域和1个较大的C端域;成功构建了STK2的真核表达载体pPIC9K-STK2,筛选获得了抗性转化子;在毕赤酵母菌中,经甲醇诱导得到了1个分子量约为41 kD的蛋白质组分且被分泌至胞外,该蛋白质的大小与理论分子量相符,推测Stk2蛋白已在宿主菌中表达并被分泌至胞外。【结论】玉米大斑病菌STK2位于scaffold_3正链的1561986-1563262位置;Stk2具有MAPK激酶的所有特征性保守结构域,属于典型的MAPK蛋白激酶;该基因能在真核细胞中表达,获得了可溶性分泌蛋白质,为Stk2蛋白的多克隆抗体制备及基因的功能研究奠定基础。
- 巩校东范钰李坡杨阳张长志田兰张晓玉范永山韩建民谷守芹董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌生物信息学分析真核表达MAPK
- 玉米大斑病菌转录因子StSte12的结构分析及其下游靶基因的筛选
- 本实验室在前期研究中已经克隆了玉米大斑病菌Fus3/Kss1-homolog MAPK级联途径下游的一个转录因子基因StSTE12，并获得了3株该基因的不同沉默程度RNAi转化子。本研究在此基础上利用生物信息学技术，明确...
- 张长志
- 关键词：玉米大斑病菌转录因子基因表达
- 玉米大斑病菌转录因子基因StSte12原核表达载体的构建
- 玉米大斑病(Northern Leaf Blight of Corn)是世界各地玉米产区严重威胁玉139米生产的真菌性病害，引起该病害的病原真菌为玉米大斑病菌，该病菌无性态为玉米大斑凸脐蠕孢菌(Exserohilum t...
- 张长志范钰杨阳谷守芹韩建民董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌转录因子原核表达
- 玉米大斑病菌StMKP2基因的克隆和敲除载体的构建
- 玉米大斑病(Northern Leaf Blight of Corn)是世界各地玉米主产区的一种重要的真菌性病害,引起该病的病原菌为玉米大斑病菌(Setosphaeria turcica)。研究表明,MAPK(mitog...
- 杨阳张长志范钰谷守芹董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌基因克隆基因敲除
- 玉米大斑病菌转录因子StSte12的活性及其对酵母生长的功能互补分析被引量：7
- 2012年
- 【目的】分析玉米大斑病菌StSte12的结构、转录活性及功能。【方法】利用生物信息学方法,对获得的StSte12进行保守结构域和进化树分析,推测该基因的功能;利用β-半乳糖苷酶法检测StSte12的转录活性;将StSTE12转化至酿酒酵母ScSTE12基因缺失突变体ste12Δ中,筛选酿酒酵母ScSTE12的功能互补突变体并对其分析,验证玉米大斑病菌StSTE12的功能。【结果】通过蛋白比对发现StSte12具有转录因子特有的STE homeodomain和ZnF_C2H2锌指结构;同源性分析显示,该基因与其它植物病原真菌的STE12-like基因有较高的同源性;利用β-半乳糖苷酶法检测发现,StSte12具有转录激活活性;酵母互补试验表明,StSTE12可以回复酿酒酵母ste12Δ的功能,能够调控酵母细胞的生长。【结论】玉米大斑病菌StSTE12属于STE12-like基因;转录因子StSte12具有转录活性;对酵母细胞在YPD培养基上的侵入生长有重要的调控作用。
- 吴敏谷守芹李坡王梅娟张长志范永山韩建民董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌转录因子
- 玉米大斑病菌转录因子StSte12的表达特性分析及其调控基因的筛选被引量：2
- 2013年
- 【目的】确定玉米大斑病菌转录因子StSte12在基因组中的位置,分析目的蛋白质StSte12的结构特征;明确StSTE12在病菌不同发育时期的表达情况;筛选可能受StSte12转录因子调控的基因,分析其匹配序列的结构特征,并比较它们在病菌的中表达情况。【方法】利用生物信息学方法,确定StSte12在玉米大斑病菌基因组中的位置并解析目的蛋白质StSte12的结构特征;利用Western blot技术分析StSTE12在病菌不同发育时期的表达规律;根据酿酒酵母Ste12转录因子的下游调控基因,筛选病菌中可能受StSte12调控的功能基因;并利用生物信息学方法得出下游调控基因的结合位点;利用RT-PCR技术,分析这些基因在StSTE12 RNAi转化子与野生型菌株中的表达情况。【结果】StSTE12的ID为105656,该基因位于scaffold_13正链的1061747-1064127位置;该蛋白具有Ste12-like蛋白特有的保守结构域(STE homeodomain和ZnF_C2H2锌指结构)及空间结构;StSTE12在附着胞时期表达量最大;筛选了部分StSte12调控基因,与StSte12的匹配序列为T\C GAAAC A\G,中间部分GAAAC非常保守;StKAR5在野生型中表达量小于StSTE12 RNAi转化子,StBEM2、StBUD8、StCHS7相反;StRAX2的表达量在野生型和转化子中一致。【结论】StSte12具有Ste12-like所特有的DNA结合结构域和空间结构;该蛋白在附着胞发育中发挥重要功能;筛选了部分StSte12的调控基因,其匹配序列可概括为T\C GAAAC A\G,且证实了这些基因受StSte12调控。
- 张长志李坡谷守芹巩校东杨阳范钰田兰张晓玉韩建民董金皋
- 关键词：玉米大斑病菌转录因子调控基因
