张靖
- 作品数：18 被引量：82H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划北京市科委科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 流行性腮腺炎疫苗株S79全基因序列测定与分析被引量：2
- 2010年
- 目的 腮腺炎疫苗株S79工作种子噬斑纯化及全基因组测序,针对国内已经分离出的毒株,从分子生物学角度探讨疫苗保护力相关问题.方法 噬斑纯化S79疫苗株,利用RT-PCR分段扩增S79株两种亚株的全基因并测序,比较S79株与其来源株Jeryl Lynn（JL）核酸序列差异;从GenBank中获得WHO各基因型参考株和中国腮腺炎流行株疏水蛋白（SH）序列,分析病毒株和疫苗株遗传距离,并构建基因亲缘性关系树.结果 S79疫苗株由两种亚株构成,比例为2∶5（major∶minor）,获得全基因序列并递交GenBank;与相应的JL株相比,核苷酸序列同源性分别为99.7%和100%.亚株序列中存在散在区段异源重组.S79疫苗株为A基因型,中国的流行株为F基因型,遗传距离为11.2%～20.0%.结论 S79疫苗株由两种亚株构成,两亚株的全基因序列与JL株基本一致,但亚株的比例与国际上应用的其他JL疫苗株存在较大差异.疫苗株与中国流行株不属于同一基因型,遗传距离较远.S79疫苗免疫保护效果的差异可能主要与疫苗株和流行株不属于同一基因型有关.
- 张靖梁宇陈实于洁靳玉琴马智静张学峰卫江波李启明
- 关键词：腮腺炎病毒
- 一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法
- 本发明提供了一种重组多形汉逊酵母菌及其制备方法。本发明的重组多形汉逊酵母菌(Hansenula polymorpha)包含乙肝病毒的L蛋白的编码基因和S蛋白的编码基因。本发明的多形汉逊酵母菌与现有技术相比具有以下优点和积...
- 李启明张靖张学峰梁宇靳玉琴马智静陈实于洁
- 文献传递
- 人乳头瘤病毒疫苗研究历程被引量：8
- 2012年
- 早在1907年，Ciuffo就曾报道，分离自人疣体的细胞超滤物可引起不同个体间皮肤疣的传播。直到1933年，Shop首先分离和鉴定了美洲兔乳头瘤病毒，随后，研究人员不断从人或动物体中分离出大量不同型别的乳头瘤病毒，人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV）也逐渐被人们认识。20世纪80年代，德国科学家zurHausen和他的研究小组用HPV的分子流行病学调查数据揭示了HPV和宫颈癌的关系，并因此获得了2008年度诺贝尔生理医学奖。至今，已确证HPV可引起皮肤及生殖器疣等多种病症，能够诱发宫颈癌、肛门癌、阴道癌、阴茎癌、外阴癌、口咽癌（包括舌和扁桃体）。2006年，由Merck公司研发的“世界第一支癌症疫苗”——宫颈癌疫苗（商品名为Gardasil）成功上市，3年后，GSK公司的同类疫苗——Cervarix也相继问世。
- 李启明张靖
- 关键词：人乳头瘤病毒疫苗分子流行病学调查诺贝尔生理医学奖宫颈癌疫苗HPV
- 重组诺如病毒GⅠ．1和GⅡ．4型类病毒颗粒免疫效果初步评价被引量：10
- 2016年
- 目的初步评价基于汉逊酵母表达系统的重组诺如病毒（norovirus，NoV）GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白类病毒颗粒（virus-like particles，VLPs）的免疫效果。方法将纯化后VLPs经SDS-PAGE和Western blot分析及鉴定，透射电镜观察颗粒形态，动态光散射仪分析颗粒粒径大小及分布情况。将GⅠ.1和GⅡ.4型VLPs按照不同的免疫方案免疫BALB/c小鼠，组织血清抗原（histo-blood group antigen，HBGA）-VLPs阻断试验检测50%阻断滴度（50% of blocking titer，BT50）。结果纯化后重组GⅠ.1和GⅡ.4型VP1蛋白纯度大于90%，Western blot分析可见特异性条带。VLPs直径为30～50 nm，界限清晰，颗粒直径与天然病毒颗粒接近，颗粒大小分布均一。免疫小鼠血清中佐剂组BT50明显高于无佐剂组。结论应用含铝佐剂的GⅠ.1和GⅡ.4型VP1 VLPs免疫小鼠，诱生了较好的HBGA阻断抗体，可作为诺如病毒疫苗的组分抗原。
- 马智静唐芳张学峰张靖侯俊伟陈实李启明
- 关键词：诺如病毒
- 人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法和外源蛋白表达盒、表达系统
- 本发明涉及一种人乳头瘤病毒类病毒颗粒的制备方法，该方法使人乳头瘤病毒的结构蛋白L1和L2在同一双缺陷型甲醇酵母菌表达系统中共表达，所述表达系统使用包含以下元件的外源蛋白表达盒：a)标记基因序列；b)源自甲醇酵母菌的启动子...
- 李启明张靖陈实靳玉琴马智静梁宇张学峰于洁卫江波沈心亮
- 文献传递
- 麻疹疫苗株S-191全基因序列测定及与流行株进化关系的初步研究被引量：4
- 2008年
- 目的对国内现在使用的Shanghai-191（S-191）疫苗株进行全基因组测序，针对国内已经分离出的毒株，分析它们与疫苗株的核酸序列差异以及流行特征。方法利用RT-PCR的方法分段扩增S-191疫苗株的全基因并测序，从GenBank中获得全球24条麻疹全基因序列和211株中国各省分离到的麻疹流行株以及WHO各基因型参考株的N基因C端456个核苷酸序列，计算麻疹序列13个编码区和非编码区的突变率，分析病毒株和疫苗株基因型和遗传距离，构建基因亲缘性关系树。结果获得S-191疫苗株的全基因序列并递交GenBank收录，进化树分析表明大部分流行株为H1基因型。各省流行株与S-191相比遗传距离为6．7％～8．2％。突变率分析显示非编码区的突变率明显高于编码区，编码区中N基因的突变率最大。结论本研究表明，中国大陆的麻疹病毒流行株以H1基因型为主，不存在明显的地域流行差异，在时间上也没有明显的突变积累特征。S-191疫苗株与近年来的麻疹流行株在遗传距离上差异较大，其保护作用需做进一步追踪探讨。
- 于洁王海龙陈实张靖张卿靳玉琴李启明
- 关键词：麻疹病毒RT-PCR
- 多糖结合疫苗及其制备方法
- 本发明涉及一种多糖结合疫苗，包含细菌多糖与载体蛋白的化学偶联物，所述载体蛋白为细菌粘膜侵袭相关蛋白，如大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A1、空肠弯曲菌鞭毛分泌蛋白A2、肺炎球菌表面蛋白、肺炎球菌表面黏...
- 李启明张学峰马智静唐玉龙张靖陈实靳玉琴卫江波
- 文献传递
- 肺炎球菌表面蛋白A的原核表达及其作为多糖结合疫苗载体的可行性
- 2011年
- 目的原核表达肺炎球菌表面蛋白A(Pneumococcal surface protein A,PspA),并探讨其作为多糖结合疫苗候选载体的可行性。方法合成PspA基因,定向克隆至pET-30a(+)载体,构建重组表达质粒pET-30a-rPspA,转化E.coli Sta(rDE3)菌株,IPTG诱导表达。表达产物经Ni离子亲和层析纯化后,经Western blot鉴定。取破伤风类毒素(Tetanus toxoid,TT)及纯化的rPspA,分别与A群脑膜炎球菌多糖(Group A meningococcal capsular polysaccharide,GAMP)通过溴化氰活化法进行偶联,获得rPspA-GAMP与TT-GAMP多糖蛋白结合物,对其进行纯化及检定。多糖结合物分别以滴鼻和肌肉注射途径免疫BALB/c小鼠,评价其诱发的体液免疫和黏膜免疫水平。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定构建正确;表达产物主要以可溶形式存在,表达量约占菌体总蛋白的20%,经纯化后纯度可达90%,可与His单抗特异性结合;肌肉注射途径显示,两种蛋白载体的结合物均能诱发较高水平的体液免疫,不同载体间差异无统计学意义(P>0.05);滴鼻途径显示,载体蛋白rPspA的结合物刺激产生sIgA的能力优于传统载体TT,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原核表达并纯化了rPspA,其具有新型多糖蛋白载体的潜力,也可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选载体。
- 李启明唐玉龙张学峰靳玉琴马智静张靖
- 关键词：多糖结合疫苗
- 拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的以拟多形假丝酵母菌（ATCC26012）为材料，构建遗传稳定性良好的尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型工程化菌株。方法利用物化及基因工程等方法对拟多形假丝酵母菌株的染色体进行改造，将ura3基因和leu2基因进行定向诱变，以获得尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，并对其进行生物学鉴定，包括菌株的遗传稳定性、基因序列及生理生化特征分析等。结果筛选得到尿嘧啶和亮氨酸双营养缺陷型突变菌株，鉴定结果显示该菌株遗传稳定性良好，标志基因均发生定向改变，生理生化结果显示该菌株能利用多种碳源和氮源，且生长状况良好。结论拟多形假丝酵母的双营养缺陷型工程化改造为进一步研究该菌株的遗传学奠定了基础，为多价蛋白组成类病毒颗粒的外源表达提供了工程化宿主。进而，为复杂疫苗抗原的重组表达和功能研究提供了技术手段。
- 梁宇靳玉琴张靖陈实李启明
- 关键词：营养缺陷型
- rCTB和TT为蛋白载体的A群流脑多糖黏膜免疫初步研究被引量：1
- 2009年
- 目的对重组霍乱毒素B亚单位（rCTB）作为多糖蛋白结合疫苗候选载体的可行性进行分析，并对以破伤风类毒素（TF）与rCTB为蛋白载体的黏膜投递型疫苗的免疫效果进行初步探讨。方法首先通过基因工程手段获得具有五聚体结构的rCTB。再将rCTB五聚体蛋白利用化学方法（ADH方法）与A群脑膜炎球菌多糖（GAMP）耦联，获得多糖蛋白结合物GAMP—rCTB，并将其与TT为蛋白载体的A群流脑多糖蛋白结合物（GAMP—TT）以滴鼻和注射途径免疫BALB／c小鼠，并对其进行免疫学评价。结果以rCTB和TT为载体的A群流脑多糖蛋白结合物，通过黏膜投递途径均可在血清中产生相对较高的多糖特异性IgG抗体，在肺部盥洗液和小肠黏膜也产生了相应的特异性IgA抗体。结论rCTB和TT均可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选蛋白载体。以rCTB为载体的多糖蛋白结合物，黏膜途径可能在免疫功能方面优于注射途径。
- 高岩岩张靖张学峰靳玉琴沈心亮李启明
- 关键词：多糖蛋白结合疫苗蛋白载体
