朱永喜
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
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- PCV2-ORF2去信号肽基因的克隆与原核表达及对小鼠免疫效力的评价
- 2009年
- 目的通过基因工程的方法表达猪圆环病毒2型的ORF2蛋白,并对表达蛋白进行小鼠免疫效力评价,为猪圆环病毒病疫苗的研制提供技术支持。方法根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计了1对引物。从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的死亡仔猪病料中提取基因组DNA,用PCR方法扩增出ORF2去信号肽基因,将该基因克隆至原核表达载体pET32a,获得重组质粒,经PCR﹑酶切以及序列分析鉴定,表明插入的片段为目的基因,插入的位置、大小和阅读框均正确,成功构建了重组质粒pet32a-ORF2,阳性重组质粒转化大肠杆菌Blgold(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达的最佳条件,表达产物经纯化后,以每只小鼠0.2mg免疫5周龄的雌性小鼠,然后用ELISA检测免疫小鼠血清中抗体的产生情况。结果纯化的重组蛋白能使小鼠产生了抗猪圆环病毒的特异性抗体,从第7d开始产生抗体,第28d抗体水平达到最高,抗体可维持7周以上,并具有良好的安全性。结论表达目的蛋白能在小鼠体内产生特异性抗体,为进一步研究猪圆环病毒亚单位疫苗奠定了基础。
- 王云龙朱永喜李玉林霍雯李恒思王真邓黎黎黄欣
- 关键词：重组蛋白质类
