朱海龙
- 作品数：7 被引量：14H指数：3
- 供职机构：四川大学华西基础医学与法医学院感染免疫研究室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 构建Loa22基因去信号肽片段原核重组表达载体被引量：4
- 2007年
- 目的:构建赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因去信号肽片段的原核表达载体,并对其进行克隆表达。方法:实验于2004-12/2005-12在四川大学华西医学中心感染免疫研究室完成。以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板,PCR扩增Loa22基因去信号肽片段,亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1,经双酶切、PCR鉴定,筛选出阳性重组质粒克隆。经DNA测序正确后,转化大肠杆菌,利用IPTG进行诱导表达,通过SDS-PAGE鉴定表达产物。结果:PCR获得长516bp的片段。Loa22基因去信号肽片段与pGEX-4T-1的重组质粒构建成功。重组质粒经IPTG诱导后能在大肠杆菌中表达Mr45000的融合蛋白。结论:制备了Loa22基因去信号肽片段原核重组表达载体,为钩体新型疫苗的研究奠定基础。
- 朱海龙鲍朗张会东
- 关键词：钩端螺旋体OMPA信号肽原核表达
- 赖型钩端螺旋体Loa22重组质粒的蛋白表达和对巨噬细胞的毒性作用被引量：3
- 2008年
- 目的对赖型钩端螺旋体Loa22基因进行表达和功能研究。方法构建赖型钩端螺旋体Loa22成熟肽重组质粒,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western Blotting检测目标蛋白表达情况。经亲和层析获得目标蛋白并作用于小鼠巨噬细胞ANA-1,检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、四氮唑复合物(XTT)吸光度值和细胞凋亡率以评价其细胞毒性。结果成功构建Loa22成熟肽原核表达质粒,通过鉴定并纯化得到Loa22成熟肽,该蛋白使培养ANA-1细胞上清液中LDH活力升高,XTT吸光度值下降,细胞凋亡率增加。结论Loa22对ANA-1具有明显的毒性效性,该基因可能是致病钩体的一个重要毒力相关基因。
- 张英鲍朗朱海龙黄毕章乐张会东
- 关键词：钩端螺旋体巨噬细胞细胞毒性
- 赖型钩端螺旋体外膜脂蛋白LipL41基因真核表达质粒的构建及表达被引量：1
- 2007年
- 目的:构建赖型钩端螺旋体LipL41基因的真核重组表达质粒、并对其表达进行检测。方法:以赖型钩端螺旋体017株基因组DNA为模板PCR扩增目的基因,克隆至原核表达质粒pGEX-4T-1上。测序分析后酶切,并连接至真核表达质粒pcDNA3上,构建真核重组表达质粒LipL41-pCDNA3。利用脂质体介导转染COS7细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR检测其表达。结果:PCR扩增出1 011 bp大小的目的片段,序列分析显示它与Leptospira kirschneri的LipL41基因成熟肽序列同源性高达98%。酶切鉴定证实真核重组表达质粒LipL41-pCD-NA3构建成功,RT-PCR检测显示,LipL41-pCDNA3转染组在大约1kb处出现特异的扩增带,而空质粒组无此条带。结论:LipL41的真核重组表达质粒构建成功,并可在哺乳动物细胞中表达。
- 朱海龙鲍朗李学敏张会东
- 关键词：钩端螺旋体属基因真核表达
- 结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用被引量：1
- 2006年
- 目的观察结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白间的相互作用。方法采用PCR技术克隆结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10基因,构建酵母双杂交载体质粒pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10,经酶切分析和DNA测序证实连接片断的正确性后,采用醋酸锂法顺序转染酵母菌AH109。结果共转染pGBKT7-ESAT-6和pGADT7-CFP-10的酵母菌AH109可以在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp培养基上生长,β-半乳糖苷酶活性实验阳性。结论结核分枝杆菌ESAT-6与CFP-10蛋白可以相互作用。
- 李岩鲍朗张会东王晓樱朱海龙李娅莎
- 关键词：CFP-10酵母双杂交蛋白间相互作用结核分枝杆菌
- 问号状赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因克隆及表达研究
- 钩端螺旋体病（简称钩体病）是在世界范围内流行的人兽共患自然疫源性疾病。我国是钩体病疫情较为严重的国家，钩体病的防治是一项重要的任务。钩端螺旋体病的预防目前以疫苗为主，但现有疫苗仅能产生短期的、不完全的免疫保护效应，因此对...
- 朱海龙
- 关键词：钩端螺旋体基因克隆钩体病
- 文献传递
- 赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因的克隆分析及蛋白表达被引量：7
- 2006年
- 目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序。利用Bioedit、Dnaman、PSIPRED、NCBI及SignaIP等对其结构进行分析。最后在大肠杆菌JM109中诱导表达目的蛋白。结果不同毒力赖型钩体均能扩增出约600bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;PCR、双酶切及测序证实pGEX-Loa22构建成功:分析显示不同赖型钩体的Loa22的同源性很高,C末端都具有同OmpA一致的保守序列及肽聚糖相关基序,都有信号肽序列;表达产物经SDS-PAGE检测证明是目的蛋白。结论赖型钩体具有编码OmpA膜蛋白的Loa22基因,可能与赖型钩体毒力和免疫原性存在某种相关性。
- 朱海龙鲍朗张会东王晓樱李岩
- 关键词：钩端螺旋体克隆
- 问号钩端螺旋体毒力基因mviN的表达及细胞毒性作用研究
- 2007年
- 目的克隆表达问号钩端螺旋体毒力基因mviN并观察表达产物对血管内皮细胞ECV304及肺上皮细胞A549的毒性作用。方法将mviN基因插入原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET-mviN,转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx-MviN融合蛋白,并作亲和层析纯化。以XTT法检测毒力蛋白Trx-MviN对ECV304及A549细胞增殖的抑制作用,同时以流式细胞术检测其作用于ECV304及A549后的细胞凋亡率。结果成功构建了重组质粒pET-mviN并高效表达出Trx-MviN融合蛋白;毒力蛋白Trx-MviN作用于ECV304及A549后,与对照组相比较,其细胞增殖被显著抑制(P<0.05),而细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论重组质粒pET-mviN高效表达出Trx-MviN融合蛋白,纯化后的融合蛋白Trx-MviN对ECV304及A549具有细胞毒性作用。
- 王中平鲍朗张会东商正玲钟琪郝牧朱海龙
- 关键词：钩端螺旋体毒力细胞凋亡率
