李兵
- 作品数：8 被引量：19H指数：3
- 供职机构：安徽医科大学附属省立医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金中华医学会分子生物学临床应用研究专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- HPV18E6真核表达载体的构建及其在HaCaT细胞的表达
- 2014年
- 目的:构建pEGFP-C2-HPV18E6真核表达载体,观察其在HaCaT细胞中的表达。方法:采用RT-PCR法从HeLa细胞中扩增出带有XhoⅠ、EcoRⅠ酶切位点的HPV18E6基因片段,双酶切技术将HPV18E6基因全长片段克隆到真核表达载体pEGFP-C2上,PCR、双酶切、测序鉴定重组质粒;将重组质粒pEGFP-C2-HPV18E6通过脂质体瞬时转染HaCaT细胞,RT-PCR及融合蛋白绿色荧光观察,检测目的基因的表达。结果:双酶切及测序结果表明真核表达载体pEGFP-C2-HPV18E6构建成功,转染HaCaT细胞48h后可见绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR可扩增目的基因条带。结论:成功构建了pEGFP-C2-HPV18E6真核表达载体,为进一步研究HPV18E6的生物学功能提供了帮助。
- 李兵冯定庆李跃波伍娇娇张红丽尤青叶朱园园凌斌
- 关键词：宫颈癌基因表达
- 丙戊酸钠联合全反式维甲酸促进子宫颈癌细胞衰老的发生
- 2015年
- 目的研究丙戊酸钠(VPA)联合全反式维甲酸(ATRA)诱导子宫颈癌细胞衰老作用,并探讨其分子机制。方法实验分为对照组、VPA组、ATRA组、VPA+ATRA组,采用3 mmol/L VPA、1μmol/L ATRA单独或联合作用于人子宫颈癌He La及Si Ha细胞,对照组仅加溶媒;采用Cell Titer96AQueous法检测细胞增殖;β-半乳糖苷酶化学染色法检测细胞衰老;Q-PCR和Western blot法分别检测衰老相关基因P16、P63、h TERT的mRNA和蛋白表达变化。结果 VPA对He La及Si Ha细胞均有生长抑制作用,与ATRA联合抑制效果明显优于单独用药(P<0.05);β-半乳糖苷酶染色显示,VPA+ATRA组衰老细胞比例显著增加,与对照组及VPA组、ATRA组比较,差异有统计学意义(P<0.05);QPCR和Western blot法结果显示,VPA单独和联合ATRA可上调P16、P63的表达,降低h TERT的表达,且联合用药优于单独用药及对照组(P<0.05)。结论 VPA联合ATRA可抑制子宫颈癌细胞增殖,上调P16和P63的表达,下调h TERT的表达,可能是其诱导细胞衰老的分子机制。
- 尤青叶冯定庆凌斌张红丽李兵伍娇娇赵婷婷
- 关键词：子宫颈癌丙戊酸维甲酸细胞衰老
- 丙戊酸钠联合全反式维甲酸诱导三维培养模型中子宫颈癌细胞的分化作用被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨丙戊酸钠(VPA)联合全反式维甲酸(ATRA)对三维细胞培养模型中宫颈癌细胞的诱导分化作用。方法:将HeLa和SiHa细胞株接种于培养支架,构建宫颈癌细胞三维培养模型。实验分为VPA+ATRA组、VPA+ATRA+LY-294002组和对照组(加等量DMSO)。培养2周后,收获支架,石蜡包埋、切片。采用免疫荧光检测维甲酸受体β2(RARβ2)、E-cadherin及上皮细胞分化指标Filaggrin、Involucrin和Loricrin的表达;利用免疫荧光双标技术检测p-Akt/E-cadherin及p-Akt/Involucrin表达的时空关系,分析PI3K/Akt通路的调控作用。结果:与对照组比较,VPA联合ATRA上调三维培养模型中HeLa和SiHa细胞RARβ2及E-cadherin的表达(P<0.01),进而诱导上皮细胞分化标记Filaggrin、Involucrin和Loricrin的表达(P<0.05),提高Akt磷酸化水平;加LY-294002后,RARβ2和E-cadherin的表达无明显变化,但显著抑制Akt的磷酸化(P<0.01),分化指标的的表达显著降低(P<0.01)。结论:VPA联合ATRA可诱导三维培养模型中宫颈癌细胞的分化;上调RARβ2及E-cadherin的表达,其可能的作用机制是通过PI3K/Akt信号通路发挥作用。
- 李兵冯定庆伍娇娇张红丽尤青叶朱园园凌斌
- 关键词：宫颈肿瘤丙戊酸钠全反式维甲酸分化
- 宫颈部分性葡萄胎一例
- 2012年
- 患者35岁，孕6产1，人工流产2次，药物流产3次。2012年8月25日因“停经39天，阴道不规则流血1周”就诊于我院，患者自述平素月经规律，3d／26d，量中等，无痛经。患者末次月经2012年7月17日，2012年8月18日出现不规则阴道流血，有时可见少量血块，无腹痛，自测尿阳性尿HCG试纸条检测，提示阳性。
- 李兵杨霞卫莹张雪芬吴大保周颖凌斌
- 关键词：部分性葡萄胎阴道不规则流血不规则阴道流血宫颈月经规律末次月经
- HPV16E6真核表达载体的构建及其在CaSki细胞中的表达及定位被引量：3
- 2011年
- 目的:构建pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,转染CaSki细胞,检测其在CaSki细胞中的表达。方法:用RT-PCR法从CaSki细胞中扩增出带有HindⅢ、XbaⅠ酶切位点的HPV16E6基因片段,将HPV16E6基因全长片段克隆到增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因真核表达载体pEGFP-C2上,通过脂质体将pEGFP-C2-HPV16E6转染入CaSki细胞。结果:pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体构建成功,转染CaSki细胞48h后经RT-PCR及Western-blot检测可见HPV16E6蛋白的高表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白主要在CaSki细胞核内表达。结论:成功构建了pEGFP-C2-HPV16E6真核表达载体,为进一步对HPV16E6的研究奠定了基础。
- 王青元周颖杨霞李兵陶峰朱圆圆凌斌
- 关键词：CASKI细胞HPV16E6真核表达载体
- 组蛋白乙酰化修饰调控RAR-β2表达与宫颈病变的相关性被引量：3
- 2014年
- 目的：探讨组蛋白乙酰化修饰与RAR-β2表达及宫颈病变发生发展的关系。方法：收集正常宫颈、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）Ⅱ-Ⅲ和宫颈鳞状细胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）组织，分别采用免疫组织化学和WesternBlot方法检测AcH3、RAR—B：和Involucrin的表达；分析组蛋白乙酰化水平与RAR-β2表达及宫颈病变程度的关系。结果：随着宫颈病变的进展，AcH3、RAR-β2和Involucrin的表达逐渐降低，甚至缺失，组间差异有统计学意义（P〈0．05）；组蛋白乙酰化水平与RAR-β2表达呈正相关（r=0．797，P〈0．05），AcH3和RAR-β2的表达均与宫颈病变程度呈负相关[r=-0．5479（Ach3）,r=-0．585（RAR-β2），P〈0．05]。结论：组蛋白乙酰化修饰与RAR-β2表达调控有关，并可能参与宫颈癌的发生。
- 伍娇娇冯定庆田园徐汉杰李兵凌斌
- 关键词：宫颈上皮内瘤变宫颈鳞状细胞癌分化
- 沉默 Piwil2表达对子宫颈癌细胞增殖和衰老的影响被引量：7
- 2015年
- 目的采用shRNA沉默Piwil2基因的表达,探讨其对宫颈癌细胞株增殖和衰老特性的影响。方法通过脂质体Lipofectamine2000转染技术和嘌呤霉素筛选,建立稳转Sh-piwil2宫颈癌细胞株,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot法验证沉默效果。采用细胞增殖实验、集落形成实验、细胞周期和细胞衰老等实验观察沉默Piwil2表达对宫颈癌细胞生物学特性的影响。结果建立稳定转染Sh-piwil2宫颈癌细胞株,与对照组相比,沉默Piwil2表达后细胞的增殖和集落形成能力均显著降低(P<0.05);细胞G0/G1期比例增加、S期比例明显下降(P<0.05),同时沉默Piwil2后细胞衰老数量明显增多(P<0.05)。结论沉默Piwil2基因可发挥抗宫颈癌作用,推测Piwil2基因可作为宫颈癌临床治疗的一个潜在靶点。
- 张红丽冯定庆凌斌尤青叶李兵伍娇娇赵婷婷
- 关键词：宫颈癌SHRNA细胞增殖细胞衰老
- 人乳头瘤病毒分型联合液基细胞学检测在宫颈病变筛查中的意义被引量：5
- 2014年
- 目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型联合细胞学检测在子宫颈病变筛查中的意义。方法收集疑似宫颈病变患者408例,分别进行细胞学和HPV基因芯片分型检测,了解各亚型HPV感染率及其与细胞学结果的相关性,判断HPV感染与年龄的关系,进行统计学分析。结果在高危型感染中居于前3位的分别是HPV 16、58、52。单一高危型HPV感染率随宫颈病变级别升高呈增加趋势,且差异有统计学意义(r=0.879,P<0.05)。高危型HPV感染率在年龄分布上呈两端高的趋势(<25岁和>50岁),但各年龄组间差异无统计学意义。结论 HPV分型检测宜联合细胞学应用于宫颈病变的筛查及临床治疗和随访。
- 朱园园朱园园程志祥赵婷婷李兵
- 关键词：细胞学技术
