李庆海
- 作品数：16 被引量：11H指数：3
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- 发文基金：黑龙江省自然科学基金国家自然科学基金哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目更多>>
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- 新型冠状病毒SARS-CoV-2环介导等温扩增试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种新型冠状病毒SARS‑CoV‑2环介导等温扩增试剂盒及其应用。所述的试剂盒中包含用于检测新型冠状病毒SARS‑CoV‑2S基因的环介导等温扩增引物组，其中所述的引物组由一对外引物，一对内引物和一对环形引物...
- 沐晓芹李庆海黄文君李丁蔚俞浩刘树林张勇杨宝峰
- 文献传递
- 沙门菌病原性的分子进化
- 刘树林刘桂荣冯晔李用国李庆海包红霞朱松岭王春晓
- 背景：课题组在前期工作中发现，某些重要致病菌的进化可能遵循趋异进化与趋同进化这一模式.来自同一祖先的细菌，在不同的生存环境中，由于碱基变异或外来基因的获得，可进化为各种不同的致病菌(宿主不同或所致疾病不同)，此为趋异进化...
- 关键词：
- 关键词：疾病治疗动物实验
- 哈尔滨市HIV-1感染者TRIM5α基因多态性与艾滋病的相关性
- 2018年
- 目的分析编码TRIM5α蛋白的基因2号外显子单核苷酸基因多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）与艾滋病的相关性，并探讨病毒亚型对此相关性的影响。方法从331例已确诊但未接受治疗的HIV-1感染者的外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC）中提取基因组DNA，扩增HIV-1病毒的Gag基因和编码TRIM5α蛋白基因的2号外显子基因并获得基因序列信息，统计单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）和构建Gag基因系统进化树图。以CD4＋T淋巴细胞数200个/μL为界值将HIV-1感染者分为快速进展组（CD4〈200）和慢速进展组（CD4≥200），并分析比较所有331例样本和各HIV-1亚型中TRIM5α基因多态性与艾滋病的相关性。结果在全部扩增的331条HIV-1的Gag基因中，有239条Gag基因序列与不同的CRF01_AE亚簇聚集，CRF01_AE亚型感染者占所有感染者的72.2%，其他亚型较少，故不进行相关性分析。我们共发现4个SNP位点（-2GC、127CT、334GT和407GA），其中407GG基因型在所有样本和CRF01_AE感染者的快速进展组和慢速进展组中都有明显的统计学差异（P〈0.05），而407GA基因型只在CRF01_AE感染者中有统计学差异。结论突变位点-2G/C、127C/T、334G/T和HIV-1的感染无相关性，407G/A突变可能与宿主TRIM5α蛋白抗HIV-1的作用增强相关，而HIV-1病毒型别是研究TRIM5α基因多态性和艾滋病相关性应该考虑的因素。
- 李海宁常晓云王福祥苏天德于思远姜美美李庆海刘树林
- 关键词：HIV-1单核苷酸多态性
- 黑龙江省HIV-1型流行株CRE01_AE env基因序列特征和传播簇分析被引量：1
- 2018年
- 目的分析黑龙江省HIV-1感染者中流行株CRF01_AE env基因序列特征以及成簇特性。方法应用巢式聚合酶链反应（Nested polymerase chain reaction ，Nested-PCR）对env C2-C4区核苷酸序列进行扩增。用MEGA软件进行系统进化分析，然后对156份CRF01_AE重组型HIV-1毒株env基因V3环及邻近区域氨基酸特征分析以及生物信息学分析。
结果156份样本中绝大多数样本与中国黑龙江、吉林、辽宁的代表毒株聚成一簇，还有一小部分样本与来自中国云南以及泰国代表株90CM240、90CM235聚成一簇。共发现6种V3环顶端四肽类型，主要类型为GPGQ、GPGR，此外还有GLGR、GQGR、GPGK、GPGS。根据V3环的氨基酸分析可预测HIV-1辅助受体的使用情况，其中121份（77.6%）使用趋化因子受体5（chemokine reseptor，CCR5）作为辅助受体，没有可被预测为使用趋化因子受体4[chemokine（c-x-c matif）-receptor 4，CXCR4]为辅助受体的毒株，35份（22.4%）样本不能被预测。以bootstrap≥90%、基因距离≤0.045作为界定传播簇的参数，共形成16条传播簇，其中1条传播簇有9条序列。结论黑龙江省HIV-1流行株CRF01_AE V3环顶端四肽具有较大的变异性，大部分毒株呈现巨噬细胞嗜性。CRF01_AE毒株形成的传播簇规模较小，成簇序列数也仅达到四分之一。
- 常晓云李海宁王馨仪熊欣刘燕李庆海王福祥刘树林
- 关键词：人类免疫缺陷病毒1型CRF01_AE
- HIV-1 gp41表达产物免疫BALB/c小鼠血清ELISA实验中封闭液的优化
- 2013年
- 目的研究HIV-1 gp41表达产物免疫BALB/c小鼠后血清ELISA实验中封闭液的优化。方法 HIV-1 gp41表达产物免疫BALB/c小鼠,ELISA检测小鼠血清中的抗体,对封闭液的种类、浓度和作用时间进行优化。结果三种常用封闭液:脱脂奶粉脱(skimmed milk,S-Milk)、牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)及胎牛血清(fetal calf serum,FCS)只有S-Milk能达到较好的封闭效果。结论 2%S-Milk封闭液、4℃封闭过夜与0.5%S-Milk抗体稀释液联合,能够完全消除本研究所用免疫小鼠血清的背景。
- 陈文江李庆海
- 关键词：BALBC小鼠
- 长春市HIV感染者病毒基因亚型分布状况及CRF01_AE毒株基因特征被引量：3
- 2018年
- 目的了解长春市艾滋病病毒（HIV）感染者病毒基因亚型分布状况及当前主要流行株CRF01_AE毒株的基因变异特征。方法采集HIV感染者血液标本,提取病毒核糖核酸（RNA）,应用巢式聚合酶链反应对HIV的gag区（HXB2：863~1486）基因进行扩增并测序。PhyML3.0软件构建系统进化树,采用HIV database数据库中Entropy、N-Glycosite、VESPA对CRF01_AE毒株两个独立进化簇的氨基酸多态性、糖基化位点、特征性氨基酸进行分析。结果成功测得gag序列的97例感染者中,经男男同性传播感染者71例（73.2%）;经异性传播感染者13例（13.4%）,双向传播感染者1例,12例感染途径未知。基因亚型分析结果显示,CRF01_AE 73例（75.3%）,CRF07-BC 18例（18.6%）,B亚型5例（5.2%）。URFs1例（0.1%）。系统进化树显示CRF01_AE在感染者中形成两个独立的进化簇,其中簇Ⅰ44株（61.1%）,簇Ⅱ28株（38.9%）。进一步对CRF01_AE两个进化簇分析显示：这两个独立进化簇有10个特征性氨基酸存在差异,簇Ⅰ糖基化位点多态性大于簇Ⅱ,但氨基酸位点多态性小于簇Ⅱ。结论长春市HIV感染者主要以男男同性接触感染为主,CRF01_AE已成为本地最主要流行株。CRF01_AE毒株流行簇Ⅰ和Ⅱ存在特征性氨基酸,糖基化位点和氨基酸位点存在多态性差异,提示应密切关注本地区HIV的基因变异特征。
- 李锦邵冰李庆海杜娟宋波邵弘迟宗杨艳泽王福祥
- 关键词：艾滋病病毒感染者CRF01_AE
- HIV-1 ADA株gp140真核表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定。结果获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体。此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础。
- 李玉雪王甲业李庆海李妍凌虹
- 重组沙门菌载体HIV-12F5表位疫苗毒力及分布
- 2008年
- 目的研究表达Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）2F5表位的重组沙门菌（SA-2F5）对BALB／c小鼠的半数致死量（LD50），并观察其在小鼠体内的生物学分布。方法BALB／c小鼠随机分8组，以0，10^4～10^10菌落形成单位（CFU）重组菌灌胃，30d后用改良寇氏法测定LD50;BALB／c小鼠随机分2组，灌胃给予10^7 CFU重组沙门菌或磷酸盐缓冲液（PBS），分别于感染后第3，9，16，30d，无菌操作取各组肝、脾、肠系膜淋巴结，检测重组沙门菌在小鼠体内的分布。结果SA-2F5对BALB／c小鼠的LD，0为1．45×10^9CFU；感染后第3d，肝、脾、肠系膜淋巴结活菌数依次为5．38×10^4，4．87×10^4，9．08×10^3CFU。第9d各脏器活菌数分别降至7．35×10^2，7．50×10^2及3．00×10^2CFU。第16d各脏器活菌数基本与第9d相当。之后各脏器中活菌数持续下降，至第30d肝、脾内检测不到活菌，肠系膜淋巴结内活菌为2．1×10^2CFU。结论重组沙门菌SA-2F5毒力显著降低，在小鼠体内具有良好的生物学分布。
- 李庆海陈文江刘树林凌虹
- 关键词：包膜表位半数致死量(LD50)
- 哈尔滨市新确诊HIV-1 CRF01__AE亚型nef序列分析
- 2016年
- 目的分析哈尔滨市新确诊人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)CRF01_AE亚型nef基因及nef蛋白重要功能区氨基酸的变异性。方法从56例2014-2015年新确诊感染者外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中提取基因组DNA,扩增全长nef基因,并测序。构建nef基因系统发育树,分析基因特点;将nef氨基酸序列与中国和国际CRF01_AE共享序列进行比对,分析nef蛋白重要功能区氨基酸的变异性。结果 56株nef基因序列与不同CRF01_AE亚簇聚集,其中26株与CRF01-4亚簇聚集,24株与CRF01-5亚簇聚集,6株与CRF01-1亚簇聚集。亚簇内基因距离分析发现,CRF01-5亚簇最小,CRF01-4亚簇次之,CRF01-1亚簇最大。nef蛋白多个功能区氨基酸序列高度保守,但长度可变区、凋亡结构域、酸性区和C端PAK结合区变异率较高,其中凋亡区M50I突变和PAK结合区K192R突变多见于CD4数较低的样本(P<0.05)。结论哈尔滨市新确诊CRF01_AE亚型nef基因的组成较为复杂,可能来源于多个地区和多种感染途径;凋亡结构域和PAK结合区氨基酸变异与疾病进展相关。
- 曹立君李庆海杨全岳超彭鑫杨坤唐煜辉王福祥
- 关键词：功能区
- 重组沙门菌HIV-1 2F5表位疫苗小鼠体内毒力及免疫后血清抗体检测
- 目的：探讨重组沙门菌SA-2F5毒力变化及其在感染小鼠体内器官分布情况,并检测SA-2F5免疫BALB/c小鼠后诱发小鼠体液免疫反应情况。
方法：1) LD50测定：雌性BALB/c小鼠随机分为8组,每组6只,...
- 李庆海
- 关键词：多肽疫苗基因整合
