李思霆
- 作品数：10 被引量：6H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法
- 本发明公开了一种体外诱导巨核系祖细胞的三维细胞培养方法。该方法将单个核细胞培养于细胞培养袋中，并置于跷跷板式生物反应器上进行培养，其中，所述跷跷板式生物反应器的振荡角度为2-13°，转速为3-40rpm。采用该三维细胞培...
- 裴雪涛陈琳谢小燕刘大庆岳文吕洋李思霆王思涵姚海雷贾雅丽
- 文献传递
- 单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究
- 2009年
- 为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示,诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构,并不同程度地表达白蛋白(ALB)、甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白(CK8,CK18)等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明:胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45+细胞,CD45-细胞不具有形成造血细胞克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f+/Sca-1+细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血细胞向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.
- 周军年王韫芳要晖宇贺文艳陈海旭李思霆史岩施双双南雪白慈贤刘兵岳文毛宁裴雪涛
- 关键词：胎肝造血
- 肝癌肿瘤干细胞的分离鉴定及差异性小分子RNA筛选被引量：1
- 2013年
- 旨在分离并鉴定肝癌肿瘤干细胞,并对其异常表达的microRNA进行了初步筛选。首先利用流式细胞术及免疫荧光技术分别在肝癌细胞系及肝癌组织标本中确认了CD90+细胞的存在;随后利用免疫磁珠分选技术从肝癌细胞系MHCC97-H中分离出了CD90+细胞,化疗药物耐药性实验表明,CD90+细胞具有明显的化疗药物耐受能力;两次裸鼠皮下成瘤性实验也表明CD90+细胞具有较强的成瘤能力,而CD90-细胞不具备成瘤能力。上述实验充分说明:CD90+细胞具有肝癌肿瘤干细胞特性。因此利用该细胞模型进行了肝癌肿瘤干细胞CD90+细胞和非肝癌肿瘤干细胞CD90-细胞之间差异表达的microRNA的检测,结果表明,CD90+细胞与CD90-细胞之间共有92个microRNAs的表达存在差异性,其中在CD90+细胞中高表达的microRNAs有52个;在CD90-细胞中高表达的microRNAs有40个。
- 许英晨管利东周军年曾泉袁红丰李思霆管兆轩何丽娟南雪陈琳岳文裴雪涛
- 关键词：肝癌肿瘤干细胞CD90小分子RNA
- 小鼠不同造血位点来源的CD41+造血细胞克隆形成能力比较
- ＜正＞目的:在小鼠胚胎发育过程中,造血位点的研究是造血细胞发生学上一个热点和难点,主要是由于8.5dpc时血液循环的建立给此后的精确研究带来了困难,目前在转基因小鼠中得到的研究结果越来越倾向于主动脉-性腺-中肾（AGM区...
- 周军年李思霆谢一帆陈海旭贺文艳施双双南雪岳文刘兵裴雪涛
- 文献传递
- 过表达微小RNA miR-125b抑制肝癌细胞上皮-间质转换及促进细胞凋亡被引量：2
- 2016年
- 微小RNA 125b(miR-125b)在许多恶性肿瘤的增殖、分化和凋亡等过程中具有很重要的作用,但miR-125b是否涉及肝癌的上皮-间质转换过程(EMT)还有待进一步研究。本研究通过构建过表达miR-125b的肝癌稳转细胞株,初步检测miR-125b对于肝癌的EMT过程和相关的TGF-β信号通路的影响,以及对于肝癌细胞凋亡的影响。以慢病毒载体p HRS-1cla-EGFP构建过表达miR-125b的载体质粒(p HRS-1cla-miR125b-CMV-EGFP),并对上述载体进行NheⅠ、XbaⅠ双酶切和测序鉴定,鉴定正确后,在293T细胞中进行慢病毒包装,浓缩病毒后,对MHCC97-H进行慢病毒感染并采用流式分选GFP阳性的细胞。实时定量PCR检测表明肝癌细胞稳转株MHCC97-H-PHRSmiR-125b-EGFP的miR-125b表达量是空载体转染组的6倍。Western印迹检测发现,与空载体对照组相比,MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中间质细胞标志α-SMA表达显著下调,上皮细胞标志E-cadherin表达显著上调,同样的,用Western印迹检测也发现MHCC97-H-PHRS-miR-125b-EGFP细胞中TGF-β信号通路关键下游分子Smad2和Smad4的表达显著下调,细胞凋亡检测结果表明,与对照组相比,过表达miR-125b的稳转株凋亡率增加到19.66%,加入TGF-β1后,过表达miR-125b的稳转株凋亡率进一步增加到74.7%。同样的,在体内治疗实验中,我们采用商品化的体内核酸转染试剂,在皮下肿瘤组织中过表达miR-125b mimics,结果表明miR-125b的过表达与肿瘤组织的凋亡成正相关性(r=0.83463,P<0.01),且免疫组化结果也表明,miR-125b过表达后,E-cadherin表达显著上调,α-SMA及Smad2和Smad4的表达显著下调。上述结果表明,我们成功构建了过表达miR-125b的肝癌细胞稳转株,并成功建立了肿瘤组织中过表达miR-125b mimics的动物模型,在体内外均观察到过表达miR-125b后对肝癌细胞EMT过程的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。相关研究结果加深了我们对miR-125b在肝癌中抑制肝癌发展作用机制的�
- 张彪曾泉王海洋李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛
- 关键词：肝细胞癌过表达细胞凋亡
- 肝癌细胞上皮-间质转换模型的建立与差异性表达微小RNA分子的高通量筛选被引量：1
- 2016年
- 目的拟利用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导人肝癌细胞发生上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition,EMT）,建立EMT模型。方法在低血清培养条件下,用TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,观察细胞形态变化,采用Western印迹检测EMT典型标志物的表达变化,流式细胞术检测肝癌肿瘤干细胞标志物CD13和Ep CAM的表达变化,并利用微小RNA芯片技术（miRNA chip）筛选和分析TGF-β1处理前后差异表达的miRNA。结果经10 ng/ml TGF-β1诱导2～6 d后,多数细胞形态由上皮样转变为成纤维样,细胞间隙明显增大;Western印迹定量分析结果显示,10 ng/ml TGF-β1处理后,肝癌细胞E-钙黏蛋白（cadherin）表达水平显著性下调;流式细胞术结果显示,CD13和Ep CAM显著性上调;对miRNA芯片结果分析得到35种差异表达比较显著的miRNA,经过生物信息学分析,这些差异表达的miRNA在转录调控中发挥了重要作用。结论在低血清培养条件下,用10 ng/ml TGF-β1处理肝癌细胞2～6 d,细胞发生明显的EMT过程,利用该法可成功建立肝细胞癌的体外EMT细胞模型,在此模型中,可对差异表达的miRNA进行筛选分析和进一步的功能研究。
- 王海洋曾泉张彪李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛
- 关键词：转化生长因子Β1微小RNA
- 主动脉-性腺-中肾区、卵黄囊和循环血来源的CD41^＋细胞分化潜能比较
- 2013年
- 目的比较小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞向造血、间质、内皮细胞分化的潜能。方法取小鼠胚胎孕11d主动脉-性腺-中肾（AGM）区、卵黄囊（YS）和循环血（CB）来源的造血细胞经流式细胞术分选获得CD41^＋细胞，并检测CD41^＋细胞中CD45和c．kit的表达；采用IL-3、骨形态发生蛋白4（BMP-4）预处理半固体培养法评估CD41^＋细胞造血分化潜能的差异；采用荧光免疫法检测CD41^＋细胞α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA，间质细胞标志）的表达；采用向内皮细胞分化诱导的培养条件观察其内皮分化潜能。结果在AGM区、YS、CB来源的CD4l^＋细胞中，CD45^＋细胞比例分别为51．9％、45．8％、22．2％，c-kit^＋细胞比例分别为40．0％、39．6％、36．2％。在IL-3刺激后，与未刺激组相比AGM、YS、CB来源的CD41’细胞总的造血细胞集落形成数量均显著增加[（14．1=k1．9）对（1．2＋0．2）；（32．4士1．1）对（18．4士2．2）；（41．84-0．9）对（10．44-1．8）]（P〈0．01）。BMP-4刺激后，与未刺激组相比：AGM、YS来源的CD41’细胞生成CFU-Mix的数量下降[（0．54-0．6）对（3．2士0．8）；（1．3＋0．7）对（7．4土1．7）]（P〈0．01）；但CB来源的CD41^＋细胞生成CFU．Mix的数量无明显变化[（2．54-0．5）对（3．94-1．5）]（P〉0．01）。AGM、YS来源的CD41^＋细胞高表达α-SMA，但CB来源的CD41^＋细胞低表达d-SMA。结论小鼠胚胎不同造血组织来源的CD41^＋细胞在免疫表型、造血细胞集落形成及细胞因子刺激应答方面存在明显差异。
- 李思霆周军年陈海旭谢一帆贺文艳南雪岳文刘兵裴雪涛
- 关键词：白细胞介素3CD41
- miR-125b在抗肿瘤中的应用
- 本发明涉及miR-125b在抗肿瘤中的应用。更具体地，本发明涉及构建体，抑制肿瘤细胞转移、降低肿瘤细胞耐药性或者诱导肿瘤细胞发生凋亡的方法，该构建体或者miR-125b在制备药物中的用途，以及用于治疗癌症的药物。其中，该...
- 裴雪涛岳文周军年曾泉李思霆谢小燕姚海雷
- 微小分子miR-125b新靶基因的鉴定及其功能初步研究被引量：2
- 2016年
- 目的:利用生物信息学方法预测miR-125b的新靶基因,在肝癌细胞系中进行验证和结合位点的鉴定,为阐明miR-125b在肝癌发生发展中的作用和机制提供新线索。方法:Western印迹分析在肝癌细胞中过表达miR-125b后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白的表达情况;对肝癌患者肿瘤组织及癌旁组织的miR-125b表达差异进行实时定量PCR检测,同时对SNAIL1的表达情况进行免疫组化检测;用生物信息学方法预测miR-125b的新靶基因;利用双萤光素酶报告系统验证miR-125b在预测的新靶基因mRNA的3'非翻译区是否有直接结合位点;构建新靶基因的真核过表达载体,检测新靶基因过表达后对miR-125b表达水平的影响。结果:在肝癌细胞中过表达miR-125b可抑制细胞EMT过程,下调α平滑肌肌动蛋白、神经钙黏素的表达;miR-125b在肝癌患者肿瘤组织中的表达远低于癌旁组织,而SNAIL1作为调控EMT的主要转录因子之一,其在肿瘤组织中的入核比例明显高于癌旁组织;用TargetScan预测到snail1是miR-125b的潜在靶点之一,但双萤光素酶实验表明snail1并非miR-125b的直接靶基因。此外,我们意外发现在肝癌细胞中过表达SNAIL1可上调miR-125b的表达。结论:miR-125b可抑制肝癌EMT过程,但并非直接通过靶向snail1发挥作用,两者在肝癌细胞中存在着复杂的间接调控关系。
- 王海洋曾泉张彪李思霆南雪何丽娟岳文周军年裴雪涛
- 关键词：SNAIL1肝细胞癌
- miR‑125b在抗肿瘤中的应用
- 本发明涉及miR‑125b在抗肿瘤中的应用。更具体地，本发明涉及构建体，抑制肿瘤细胞转移、降低肿瘤细胞耐药性或者诱导肿瘤细胞发生凋亡的方法，该构建体或者miR‑125b在制备药物中的用途，以及用于治疗癌症的药物。其中，该...
- 裴雪涛岳文周军年曾泉李思霆谢小燕姚海雷
- 文献传递
