李程思
- 作品数：21 被引量：163H指数：7
- 供职机构：广东省微生物研究所更多>>
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- 相关领域：轻工技术与工程生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 生物发光法微生物快速检测试剂的性质及其影响因素研究被引量：13
- 2006年
- 研究了ATP生物发光微生物快速检测试剂的反应动力学、反应最适温度、pH以及各种影响因素。在ATP生物发光反应中,测试系统中D-荧光素用量为40～50μg／mL时对反应已经足够;发光脉冲计数CPM值随反应时间的延长不断降低,开始的1min内,其CPM值下降最快,然后下降速度不断减缓;反应的最适温度为24℃-25℃;而体系的最佳pH为7．2—7．4。配制好的发光试剂溶液置于4℃保存45h,可以保持86％的活力,在25℃时保温1h,活力下降较少,随时间的增加,活力逐渐下降,到6．5h时,仅剩53．5％的活力,而在33℃时,随着保温时间的延长,酶活力下降较快,保温1．5h,活力剩下59．1％,因此保存温度对发光试剂活力的影响非常大。各种化学物质如酸、碱、盐及表面活性剂都会抑制ATP发光反应,当NaCl浓度达到1．5g／L时,即可以抑制52．5％的发光,TritonX- 100及酸、碱对系统均有一定的影响,CTAB、SDS及TCA则严重抑制发光反应。
- 张菊梅吴清平李程思吴慧清
- 关键词：生物发光微生物快速检测试剂影响因素
- ATP生物发光法在快速评估消毒剂消杀效果的应用
- 吴清平吴慧清张菊梅李程思
- 本发明涉及ATP生物发光法在快速评估消毒剂消杀效果的应用，首先根据消毒剂消毒效果评估时主要采用的标准菌株制作标准菌悬液，用细胞ATP释放剂Ec进行处理后加入荧光素酶-荧光素试剂，检测发光值(CPM)。同法，将标准菌悬液用...
- 关键词：
- 关键词：ATP生物发光法消毒剂
- 食品微生物安全快速检测与控制技术研究
- 吴清平张菊梅蔡芷荷邓金花吴慧清张淑红寇晓霞郭伟鹏杨小鹃徐晓可卢勉飞阙绍辉陈素云丘万英李程思叶应旺姚琳韦明肯张晓煜刘军义王大鹏陈威周艳红
- 1.通过系统全面地调查中国南方部分省市大宗食品中常见食源性致病菌，以及珠江广州段河涌水及广东省部分地区牡蛎中食源性病毒的污染情况、污染水平以及分布情况，获得了食源性致病菌和病毒在食品、水体及水产品中的分布规律，建立起食源...
- 关键词：
- 关键词：食源性致病菌检测
- 微生物细胞ATP释放条件研究被引量：7
- 2006年
- 在ATP生物发光法微生物细胞ATP释放剂的筛选研究中，发现采用环糊精等环状化合物可以解除表面活性剂类细胞ATP释放剂对发光反应系统的抑制作用，其中，7．5g／L环糊精CD（a）能中和1．5g／L的表面活性剂Ec和Es、Et，可以完全排除Ec、Es、Et对发光反应的抑制作用。通过比较各种细胞ATP释放剂释放ATP效果，筛选、组合出以表面活性剂Ec为代表的微生物细胞ATP释放剂；通过优化实验，发现用0．25～0．50g／L的Ec处理菌液1～2min时，细胞ATP的释放效果最好，从而建立了室温条件下简便、快速的微生物细胞ATP释放方法和ATP释放剂对发光反应系统抑制的消除方法。
- 张菊梅吴清平吴慧清郭伟鹏李程思
- 关键词：微生物生物发光
- 植物精油对微生物的抑菌效果评估研究被引量：46
- 2008年
- 本实验以大肠杆菌(Escherichia coli)8099、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC6538、枯草杆菌黑色变种(Bacillus subtilis)ATCC9372、白色念珠菌(Candida albicans)ATCC10231和黑曲霉(Aspergillus niger ATCC16404)为指示菌,采用纸片法和试管法评估了42种植物精油的抑菌效果,结果显示植物精油对真菌和革兰氏阳性细菌的抑杀效果好,其中有11种精油对5种指示菌的抑杀效果较好,由强至弱的顺序为:肉桂、百里香、柠檬草、香茅、香茅油、雪松、山鸡椒、天竺葵、桂皮油、芫荽、罗勒、山苍子油、欧薄荷、茴香。
- 吴慧清吴清平石立三李程思
- 关键词：植物精油抑菌效果防腐剂杀菌剂
- 食品污染克罗诺杆菌(阪崎肠杆菌)的分离及鉴定被引量：23
- 2013年
- 【目的】对300份奶粉样品和50份非奶粉类食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测,并对分离得到的克罗诺杆菌进行鉴定。【方法】通过分子方法和9管法对奶粉和其他食品中克罗诺杆菌的污染情况做定量检测;通过吲哚产生、丙二酸盐利用、卫矛醇、肌醇、松三糖和松二糖发酵产酸等六种生化试验对分离株进行鉴定;同时对分离株的16S rRNA基因序列进行同源性分析,通过N-J(Neighbour-Joining)法构建系统发育树。【结果】定量检测结果表明,350份样品中有23份样品分离出克罗诺杆菌,共分离到24株克罗诺杆菌,检出率为6.6%;23份受污染样品中有4个样品的克罗诺杆菌大于100 MPN/100g;24株克罗诺杆菌被鉴定到种或亚种,其中19株为阪崎克罗诺杆菌(Cronobacter sakazakii);2株为丙二酸盐克罗诺杆菌(C.malonaticus);2株为都柏林克罗诺杆菌奶粉亚种(C.dublinensis subsp.lactaridi);1株为莫金斯克罗诺杆菌(C.muytjensii)。【结论】分子方法和9管法联用适合污染率低而定量检测要求高的克罗诺杆菌的奶粉调查;采用生化和分子生物学方法将24株分离株鉴定到种或亚种,其中阪崎克罗诺杆菌为优势种;奶粉中克罗诺杆菌的污染问题对婴幼儿安全存在隐患,应引起消费者和有关部门的重视。
- 董晓晖李程思吴清平张菊梅莫树平郭伟鹏杨小鹃徐晓可
- 关键词：RRNA基因系统发育树
- 显色培养基和传统XLD培养基检测沙门菌效果比较被引量：3
- 2013年
- 沙门菌是肠杆菌科的重要致病菌属，也是引起细菌性食物中毒的主要致病菌之一”。因此，寻找一种快速准确鉴定沙门菌的检测方法尤显重要。目前国内沙门菌检测仍以常规分离培养、生化鉴定为主，而生化鉴定的前提就是在选择性平板上挑取可疑单菌落。木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）、沙门菌属显色培养基是食品安全国家标准推荐使用的两种选择性培养基。相对于显色培养基，XLD培养基仅适用于沙门菌选择性分离培养，不能特异性鉴定沙门菌。显色培养基由于添加了特异的显色底物组合，直接观察菌落颜色就可对菌种做出鉴定，特别是能与常规检测方法较好地接轨而越来越受到国内外的关注。为了解显色培养基在实际工作中的应用效果，特以HKM沙门菌显色培养基（简称HKSal）和传统XLD培养基对不同食品样品的分离效果进行比较分析，为显色培养基的广泛应用提供借鉴。
- 杨小鹃吴清平张菊梅王君李程思郭伟鹏
- 关键词：沙门菌
- 食源性阪崎克罗诺杆菌中CRISPR-Cas系统的发现及其特征分析
- [目的]食源性阪崎克罗诺杆菌中CRISPR-Cas系统的分布特征分析[方法]通过基因组二代测序和生物信息学分析获得17株食品源阪崎克罗诺杆菌的全长基因组,采用CRISPRFinder分析CRISPR分子的分布情况,利用所...
- 曾海燕吴清平张菊梅何文静李程思凌娜
- 关键词：CRISPR
- 阪崎肠杆菌α-葡萄糖苷酶的原核表达及其多克隆抗体制备被引量：2
- 2013年
- 以阪崎肠杆菌(ATCC29544)的基因组DNA为模板通过PCR扩增出α-葡萄糖苷酶基因malA,将其克隆入表达载体PET22b(+),构建重组表达质粒pET22b-malA。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),进行优化表达。采用尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过ELISA测定效价,并通过免疫荧光法鉴定与菌体表面结合能力。结果表明克隆的目的基因全长1677bp,与Genebank的malA比较具有100%的同源性。带His标签的融合蛋白以包涵体形式表达,其最优化的表达条件是37℃下用0.8mmol/L IPTG诱导5h。ELISA测定效价为5×105;免疫荧光法鉴定表明多克隆抗体能与阪崎肠杆菌表面结合。本实验为阪崎肠杆菌的免疫磁珠检测奠定了基础。
- 徐晓可吴清平张淑红张菊梅李程思郭伟鹏
- 关键词：阪崎肠杆菌Α-葡萄糖苷酶克隆原核表达多克隆抗体
- 食品微生物质控和生物安全检测新技术研究
- 吴清平张菊梅李晖李志勇黄东东寇晓霞吴慧清柯昌文范宏英王菊芳杨小鹃郭伟鹏李程思阙绍辉黄吉成王志强李春荣
- 1．研究出水样中沙门氏菌、志贺氏菌、绿脓杆菌、肠出血性大肠杆菌O157和副溶血性弧菌等5种食源性致病菌多重PCR检测方法，检测可在一天之内完成，灵敏度为10-100cfu/mL(g)；建立了液体奶中沙门氏菌、志贺氏菌等1...
- 关键词：
- 关键词：PCR检测方法快速检测试剂盒
