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副溶血弧菌VPA1405多克隆抗体制备及应用被引量：3: 2013年; 目的建立副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)的Western印迹方法。方法将VPA1405基因克隆到pET-28a(+)载体,转入大肠杆菌BL21中进行不可溶性表达,在变性条件下纯化得到VPA1405蛋白,制备的包涵体溶液直接免疫兔得到多克隆抗体,进而利用Western印迹检测VPA1405蛋白在野生株(WT)和opaR基因敲除株(ΔopaR)中表达水平的差异。结果成功表达纯化了6个与生物膜相关基因的蛋白;Western印迹结果显示OpaR调控子对VPA1405基因的表达呈正调控,这与表型实验结果相符。结论成功建立了VP的Western印迹实验平台,该平台可用于后续VP生物膜相关基因的调控研究。; 闫小娟张义全王丽刘梦颖杨世亚杨瑞馥周冬生邱景富; 关键词：副溶血弧菌生物膜 WESTERN印迹

肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价: 2013年; 目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。; 刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富; 关键词：克雷伯菌肺炎 DNA芯片比较基因组学

肺炎克雷伯菌CRP对kfuABC操纵子的转录调控机制研究: 2014年; 目的:利用分子生物学实验研究肺炎克雷伯菌环磷酸腺苷受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)对kfuABC操纵子的转录调控机制。方法:设计相关跨基因引物,用Real-time PCR方法验证kfuABC的转录结构。以肺炎克雷伯菌野生株NTUHK2044(wild type,WT)的总RNA为模板,利用引物延伸的方法寻找kfuA的转录起始位点,确定其核心启动子区。构建含kfuA启动子区DNA序列的LacZ重组质粒,并将其转入突变株△crp(肺炎克雷伯菌野生株基因组中crp基因敲除)和WT中,通过测定比较两株菌中β-半乳糖苷酶活性差异来判定CRP调控子对kfuA的调控关系;分别提取△crp和WT的总RNA,进一步采用实时定量Real-time PCR的方法验证CRP对kfuA的调控关系。通过凝胶阻滞实验验证His-CRP是否对kfuA启动子区具有直接的结合作用,进一步采用DNaseⅠ足迹实验确定具体的结合位点。结果:肺炎克雷伯菌kfuA、kfuB和kfuC位于同一个操纵子kfuABC;引物延伸实验结果显示kfuABC只有一个转录起始位点T;CRP能够结合到kfuABC启动子区-204到-171之间的碱基序列上(转录起始位点为+1),抑制其转录表达。结论:CRP能直接结合到kfuABC启动子区抑制其转录表达。; 杨世亚张义全王丽杨瑞馥周冬生李迎丽邱景富; 关键词：肺炎克雷伯菌转录调控

新生儿呼吸机相关性肺炎危险因素的Meta分析被引量：16: 2014年; 目的系统评价中国新生儿呼吸机相关性肺炎(VAP)的危险因素,为临床制订预防策略提供依据。方法检索PubMed、Web of Science、中国知网(CNKI)、中国生物医学文摘数据库(CBM)、重庆维普(VIP)和万方数据库,收集研究中国新生儿VAP危险因素的文献,按照纳入和排除标准筛选文献、提取数据并采用Revman5.1软件进行Meta分析。结果根据纳入排除标准,最终纳入20篇文献,病例1 145例,对照2 610例。影响新生儿发生VAP的危险因素包括机械通气(MV)≥3d、原发性肺部疾病、头部仰卧位、鼻胃管、早产、重插管、低体质量、血制品应用、剖宫产及肠外营养。结论临床上应针对中国新生儿VAP发病的相关危险因素采取针对性预防措施,从而降低VAP的发病率和病死率。; 谭斌张帆黄娅铃张弦杨世亚李迎丽邱景富; 关键词：META分析新生儿

cAMP受体蛋白调控肺炎克雷伯菌kfuABC操纵子的研究: 研究背景：肺炎克雷伯菌(klebsiella pneumoniae，KP)属于革兰氏阴性肠杆菌。近年来成为仅次于大肠杆菌的条件致病菌，主要引起社区获得性和医院内感染，常见的疾病有肝脓肿、肺炎、眼内炎和脑膜炎等。KP的毒力...; 杨世亚; 关键词：肺炎克雷伯菌基因表达操纵子毒力因子

肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附能力及细胞活性的影响被引量：1: 2014年; 目的分析肺炎克雷伯菌临床分离株WT(wild type)、回补株(c-Δcrp)和突变株(Δcrp)对人肺癌上皮细胞A549细胞的粘附能力及细胞活性的影响。方法肺炎克雷伯菌WT株、c-Δcrp株和Δcrp株感染人肺癌上皮细胞A549,经裂解液裂解后平板计数计算粘附的菌量。LDH释放法检测细菌对细胞的毒性,优化感染时间和感染指数。结果 WT株及c-Δcrp株粘附的菌量分别为logCFU=5.145和logCFU=4.915,均高于Δcrp株(logCFU=4.122),差异有统计学意义(F=8.366,P=0.004)。以MOI=1 000(细菌∶细胞=1 000)的菌量感染靶细胞,37℃孵育8 h,加底物液避光显色10 min,离心所得上清稀释10倍进行测定为最佳反应条件。WT株对细胞的毒性百分比(70.69%)明显高于Δcrp株(19.54%),差异有统计学意义(t=8.843,P=0.001)。结论 crp基因敲除后,突变株的细胞毒性和粘附力明显下降,肺炎克雷伯菌转录调控子CRP对菌株粘附力及细胞活性具有正向调控作用。; 谭斌白群华罗美杨世亚薛健周锡鹏李迎丽邱景富; 关键词：肺炎克雷伯菌 A549 粘附力细胞活性

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杨世亚