杨淳
- 作品数：13 被引量：21H指数：3
- 供职机构：广州医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市科技计划项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒及其应用方法
- 本发明涉及检测四种/四种以上侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒及其应用方法，其特征是：在试剂盒内设有含有特异性引物和至少四种念珠菌相对应的荧光探针的荧光定量PCR反应液、至少四种念珠菌的阳性质控品和阴性质控品，根据荧光定量PC...
- 黎毅敏杨淳黄红川刘晓青何为群袁锦屏杨灵邱桂霞张彦峰
- 文献传递
- 检测致病曲霉菌的荧光定量PCR通用引物、检测探针和试剂盒
- 本发明公开了一种曲霉菌的荧光定量PCR检测通用引物，检测探针和检测试剂盒，所述检测试剂盒的包括有碱基组成如SEQ ID.NO：1和SEQ ID.NO：2所示的通用引物；针对烟曲霉菌的检测探针为CY5-TAAAGTTGGG...
- 黎毅敏邱桂霞毛璞杨淳黄红川刘冬冬刘晓青何为群莫红缨
- 文献传递
- 靶向髓样细胞表达的激发受体1基因短发夹RNA真核质粒表达载体的构建及筛选
- 2011年
- 目的 构建编码髓样细胞表达的激发受体1（TREM-1）基因短发夹RNA（shRNA）真核质粒表达载体,并筛选出基因沉默效果最明显的shRNA质粒表达载体.方法 针对TREM-1的靶位点设计含shRNA的靶序列,分别构建pGCsi-TREM-1 shRNA1和pGCsi-TREM-1 shRNA2的质粒表达载体和pGCsi-NegshRNA阴性质粒表达载体,通过酶切及测序进行鉴定.鉴定后以脂质体包裹转染肺泡上皮A549细胞,分为未转染对照组（A组）、转染空质粒载体pGCsi对照组（B组）、转染阴性shRNA质粒表达载体pGCsi-NegshRNA对照组（C组）、转染TREM-1 shRNA1质粒表达载体组（D组）和转染TREM-1shRNA2质粒表达载体组（E组）,48 h后观察转染细胞绿色荧光蛋白表达效果.转染24、48、72 h后,以A组为对照采用MTT法测定B、C、D、E组细胞的存活率.转染48 h后,通过荧光定量PCR检测各组TREM-1 mRNA的表达水平并与转染前相比较.结果 经酶切和测序鉴定证实,目的 TREM-1基因shRNA1和shRNA2片段已被克隆到pGCsi载体中.荧光显微镜下,B、C、D、E组A549细胞有明显的绿色荧光蛋白表达.各时间点B、C、D、E组细胞存活率均达90%以上.A、B、C 3组转染前后TREM-1mRNA的表达水平差异无统计学意义,D、E组转染的重组质粒均能有效抑制A549细胞的TREM-1mRNA的表达（[（1.945±0.252）×105比（1.010±0.194）×105,（1.933±0.216）×105比（1.202±0.171）×105,均P＜0.05],抑制率分别为48.07%和37.82%.结论 成功构建了靶向TREM-1基因的shRNA质粒表达载体,可有效抑制细胞中TREM-1目的 基因的表达,为后续脓毒症的基因治疗提供了依据.
- 莫红缨黎毅敏肖正伦黄红川杨淳何为群刘晓清
- 关键词：短发夹RNA质粒RNA干扰基因表达
- 检测致病曲霉菌的荧光定量PCR通用引物、检测探针和试剂盒
- 本发明公开了一种曲霉菌的荧光定量PCR检测通用引物，检测探针和检测试剂盒，所述检测试剂盒的包括有碱基组成如SEQ ID.NO：1和SEQ ID.NO：2所示的通用引物；针对烟曲霉菌的检测探针为CY5-TAAAGTTGGG...
- 黎毅敏邱桂霞毛璞杨淳黄红川刘冬冬刘晓青何为群莫红缨
- ICU分离的多重耐药鲍曼不动杆菌PFGE分型及Ⅰ型整合子介导的耐药研究被引量：6
- 2012年
- 目的了解某院重症监护室(ICU)分离的多重耐药鲍曼不动杆菌(MDR-AB)Ⅰ型整合子阳性率,并分析MDR-AB的同源性,探讨Ⅰ型整合子参与耐药、传播的分子机制。方法收集2008年1月—2009年12月该ICU分离的40株MDR-AB,采用K-B纸片扩散法检测其耐药性,聚合酶链反应(PCR)进行Ⅰ类整合子可变区扩增、克隆测序,分析Ⅰ类整合子基因结构。应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析MDR-AB的同源性。结果 75.00%(30/40)的菌株Ⅰ类整合子阳性,共检测出两种基因盒,分别为aacA4-catB8-aadA1和aacC1-orfX-orfX-orfX’-aad A1。PF-GE结果表明,40株菌分为4个克隆,其中有26株属于B克隆,为主要流行菌株型。结论Ⅰ类整合子在MDR-AB中广泛存在,可能通过水平传播方式在ICU中传播。携带aacA4-catB8-aadA1整合子的MDR-AB引起了ICU鲍曼不动杆菌的流行。
- 毛璞傅威杨淳邱桂霞叶丹黎毅敏
- 关键词：鲍曼不动杆菌多重耐药脉冲场凝胶电泳
- 荧光定量PCR法检测烟曲霉DNA被引量：4
- 2011年
- 目的建立检测烟曲霉DNA的荧光定量PCR方法,评价其在小鼠侵袭性烟曲霉肺部感染诊断中的意义。方法根据烟曲霉ITS1区域基因组序列,设计合成引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR条件,从特异性、扩增效率、灵敏度及重复性方面进行评价。建立小鼠烟曲霉肺部感染模型,用荧光定量PCR对36只实验小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveo-lar lavage fluid,BALF)进行检测。结果本研究设计的引物和探针特异性扩增烟曲霉DNA,最低检出量为每毫升102个烟曲霉孢子,在103～107拷贝数(Cp)内具有良好的线性关系(R2=0.999)。在0.5×103 Cp/mL与0.5×105 Cp/mL两个浓度时,批内变异系数为0.39%、0.53%,批间变异系数为2.22%、4.58%。结论成功建立了荧光定量PCR检测烟曲霉DNA方法,该法特异性强、灵敏度高、重复性好,将有助于烟曲霉感染的早期诊断和针对性治疗。
- 毛璞余志辉黄红川杨淳黎毅敏
- 关键词：烟曲霉荧光定量聚合酶链反应BALB/C小鼠
- 铜绿假单胞菌相关性肺损伤的蛋白质差异表达研究被引量：2
- 2011年
- 目的利用蛋白质组学方法筛选铜绿假单胞菌急性肺损伤特异相关蛋白质，为鉴别诊断感染与非感染因素引起的急性肺损伤提供理论依据。方法建立感染（铜绿似单胞菌急性肺损伤）与非感染（包括机械通气急性肺损伤、油酸急性肺损伤）大鼠模型，应用双向凝胶电泳技术分离总蛋白。Image Master双向凝胶电泳软件分析差异表达蛋白质点后，应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱获取肽质量指纹图谱并通过NCBI数据库鉴定差异表达的蛋白质，最后Western blot验证差异表达的蛋白质。结果双向凝胶电泳图谱中找到32个表达量有明显差异的蛋白质点，质谱鉴定出18种蛋白质。其中的过氧化物氧化还原酶I（PrxI）、钙网蛋白等11种蛋白质在铜绿假单胞菌急性肺损伤组表达上调，并在Westernblot验证了PrxI的上调，与凝胶电泳结果一致。谷胱甘肽-S-转移酶a4、甲状腺素蛋白等7种蛋白在铜绿假单胞菌急性肺损伤组表达下调。结论应用比较蛋白组学鉴定出18种差异蛋白，11种在铜绿假单胞菌急性肺损伤组表达上调，7种表达下调，分别参与催化代谢、氧化还原、信号转导等凋节。其中PrxI和钙网蛋白可能通过对氧化／抗氧化和免疫应答的调节在细菌感染性急性肺损伤中起着重要作用。本研究为进一步阐明感染相关性急性肺损伤的发病机制提供新的线索。
- 刘冬冬毛璞廖东江余志辉杨淳黄红川刘晓青何为群黎毅敏
- 关键词：急性肺损伤铜绿假单胞菌双向凝胶电泳
- 检测三种/三种以下侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒及其应用方法
- 本发明涉及检测三种/三种以下侵袭性念珠菌的快速诊断试剂盒，包括盒体，其特征是：1)在试剂盒内设荧光定量PCR反应液、1～3种侵袭性念珠菌阳性质控品和阴性质控品；2)荧光定量PCR反应液含有特异性引物和荧光探针；3)阳性质...
- 黎毅敏杨淳黄红川刘晓青何为群袁锦屏杨灵邱桂霞张彦峰
- 文献传递
- 上呼吸道分离鲍曼不动杆菌1型整合子的分离与鉴定(英文)被引量：2
- 2012年
- 【目的】研究I型整合子的结构特征,探讨其与细菌多重耐药之间的相关性。【方法】收集2008年至2009年广州呼吸疾病研究所上呼吸道分离的187株鲍曼不动杆菌,应用K-B纸片扩散法检测耐药性,采用聚合酶链式反应进行I型整合子整合酶基因的检测;扩增整合子的可变区,应用DNA测序技术分析I型整合子基因结构。【结果】I型整合子的阳性率达53.4%。共七种1型整合子基因盒被鉴定,其中首次发现报道一种新的整合子(GenBank:HQ322622)。可变区主要编码氨基糖苷类药物的耐药基因。20种抗菌素耐药的结果均表明携带Ⅰ型整合子的鲍曼不动杆菌耐药率较不携带I型整合子的鲍曼不动杆菌的耐药率明显增高。整合子与鲍曼不动杆菌的多重耐药表型具有密切相关性。【结论】I类整合子相关耐药基因在本院临床分离鲍曼不动杆菌中分布较广泛。整合子在鲍曼不动杆菌耐药性的形成和播散中具有重要作用。
- 毛璞傅威叶丹杨淳单靖岚林美仪李常安刘晓青黎毅敏
- 关键词：多重耐药鲍曼不动杆菌
- 多重荧光定量PCR对三种主要致病性曲霉菌的检测研究
- 2012年
- 目的建立一种能同时鉴定烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌的多重荧光定量PCR诊断方法，并将之应用于侵袭性曲霉菌病的诊断研究。方法构建多重荧光定量PCR方法，对该方法进行实验评价，并将之应用于侵袭性曲霉菌病患者的痰标本检测，初步评价该方法的临床诊断效能。结果建立的多重荧光定量PCR方法，制定标准曲线，R^2。在0．989～0．999之间，斜率分别为-3．117、-3．583、-3．674；只与烟曲、黄曲、黑曲的DNA发生特异性反应，无非特异性扩增；最低检测浓度为1×10^2孢子／ml；重复性检测试验，获得Ct值标准差为0．12～0．20，变异系数为0．37％～0．80％；对分离自26例侵袭性曲霉菌病患者的56份深部痰标本进行检测，敏感率为85．7％（48／56），特异性为92．0％（46／50），阳性预测值为92．3％（48／52），阴性预测值为85．2％（46／54）。结论研究建立的多重荧光定量PCR方法检测侵袭性曲霉菌病患者的深部痰标本有较高的敏感性、特异性和阴、阳性预测值，且快速、简便，将有助于侵袭性曲霉菌病的早期准确诊断。
- 邱桂霞毛璞刘晓青杨淳徐霞黎毅敏
- 关键词：曲霉菌侵袭性曲霉菌病实时荧光定量聚合酶链反应
