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生物信息网络资源在本科生诊断分子生物学教学中的应用初探: 2004年; 目的：探讨在教学中如何利用互联网中丰富的生物信息网络资源，提高诊断分子生物学的教学效果和质量的方法。方法：检验本科生教学过程中利用网络生物资源，结合我室科研方向和已有的条件开设了“人乳腺球蛋白基因的克隆和序列测定”诊断分子生物学综合实验。结果：通过综合实验，参加学员初步掌握了互联网中重要核酸和蛋白质数据。结论：为培养和造就符合新世纪需要的新型医学检验人才做了有益的尝试。; 胡川闽黄松生李鹏潘自铁; 关键词：生物信息学分子生物学网络教学

乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白基因的克隆及原核表达: 2006年; [目的]克隆乳腺癌相关分子人乳腺珠蛋白(humanmammaglobin,hMAM)基因并诱导其表达,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。[方法]从乳腺癌组织提取总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增hMAM基因编码序列,将扩增产物克隆至PGEM-T载体中,DNA测序,用限制性内切酶切下目的基因,与相同酶切的表达载体pQE40连接、筛选、鉴定,构建pQE40-hMAM融合表达质粒,以硫代半乳糖苷(IPTG)诱导在大肠杆菌M15中表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达结果。[结果]琼脂糖凝胶电泳显示聚合酶链反应(PCR)扩增产物的分子量大小与预期相符。对重组质粒分析表明,插入片段的序列与文献报道hMAM基因编码序列一致。在IPTG的诱导下,M15重组菌高效表达出一个相对分子质量约为34kD的产物。[结论]重组表达质粒pQE40-hMAM表达成功。; 刘秀娜王仙园周娟赵力军潘自铁胡川闽; 关键词：珠蛋白基因相关分子原核表达逆转录聚合酶链反应聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳

生物信息网络资源在诊断分子生物学教学中的应用初探被引量：1: 2005年; 在本科生教学过程中利用网络中的生物信息资源,结合第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室的科研方向和已有的条件,对学有余力的检验本科生,开设了"人乳腺球蛋白基因的克隆和序列测定"诊断分子生物学综合实验。通过此综合实验,使学员掌握了科研课题设计的基本理论和方法,为其将来的研究生阶段学习或相关的科研工作打下一定基础。; 胡川闽黄松生李鹏潘自铁; 关键词：网络生物信息生物信息资源分子生物学网络资源生物学教学医学检验系

人乳腺珠蛋白（hMAM）基因的克隆及其原核表达的研究: 人乳腺珠蛋白(human mammaglobin,hMAM)属于子宫珠蛋白(uteroglobin,UG)超家族,是93个氨基酸构成的多肽,分子量为10.5kDa。hMAM的生理功能不明,但UG超家族的成员全都是分泌性、...; 潘自铁; 关键词：人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化突变型; 文献传递

乳腺珠蛋白基因在大肠杆菌中的诱导表达及纯化研究被引量：2: 2005年; 目的克隆乳腺珠蛋白(hum an m amm aglob in,hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础,从而为早期发现乳腺癌提供科学的监测方法。方法自乳腺癌组织提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cDNA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论成功地纯化出hMAM重组蛋白。; 刘秀娜王仙园周娟潘自铁赵力军胡川闽; 关键词：人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化

人乳腺珠蛋白的研究进展被引量：3: 2004年; 人乳腺珠蛋白 (hMAM)为乳腺组织特异性蛋白 ,是一种新的可能具有临床应用前景的乳腺癌标志物。近几年国内外研究者对hMAM在乳腺、淋巴结、外周血和骨髓中的表达及其与乳腺癌的关系做了大量工作 ,结果不尽相同 ,提出了不同的观点。; 潘自铁胡川闽; 关键词：人乳腺珠蛋白 HMAM 乳腺组织恶性肿瘤生物学

人乳腺珠蛋白基因亚型的原核表达及纯化被引量：2: 2006年; 目的:克隆人乳珠蛋白(hMAM)编码全长cDNA,原核表达并纯化蛋白产物,为后期研制乳腺癌早期诊断试剂盒奠定基础。方法:自乳腺癌组织及乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAM cD-NA,构建pQE40-hMAM表达质粒,在大肠杆菌M15中表达,利用镍-亚硝胺乙酸组氨酸(N i-NTA-H is)亲和层析法对重组蛋白进行纯化。结果:乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAM cDNA亚型,即hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270 bp,两者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;表达的融合蛋白以不溶性包涵体形式存在,纯化后得到纯度为97%的目的蛋白。结论:获得hMAM cDNA并发现一个新的hMAM突变体;融合蛋白的表达及纯化成功。; 刘秀娜潘自铁王仙园周娟赵力军胡川闽; 关键词：乳腺癌人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化

两种人乳腺珠蛋白基因亚型cDNA的克隆及其原核表达被引量：1: 2005年; 目的克隆hMAM编码全长cDNA,建立hMAM蛋白原核表达系统及其纯化方法,为进一步研究hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定工作基础。方法自乳腺癌组织和乳腺癌细胞株MD-MB453提取总RNA,通过RT-PCR克隆hMAMcDNA,构建pGEX-KG-hMAM表达质粒,在大肠杆菌BL21中表达,鉴定表达产物的形式后建立目的蛋白的纯化方法。结果乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中发现两种hMAMcDNA亚型:hMAM和hMAM(Isoform),长度分别为279和270bp,二者相差9个连续碱基,其翻译产物相差3个连续氨基酸残基;GST-hMAM蛋白在本原核表达系统中以不溶性包涵体形式存在,通过改良的纯化方案可以获得纯化的复性蛋白。结论获得hMAMcDNA并发现一个新的hMAM突变体;hMAM可在pGEX-KG中与GST融合,实现高效表达;通过本法建立的改良的纯化流程,可获得纯度达96.5%的hMAM的两种融合蛋白,为进一步研究两种亚型hMAM的结构、功能及其在乳腺癌免疫诊断中的应用奠定了工作基础。; 潘自铁李鹏刘秀娜陈安赵力军胡川闽; 关键词：人乳腺珠蛋白原核表达系统蛋白纯化

人源性MIFcDNA的克隆及其原核高效表达的研究被引量：1: 2005年; 目的　克隆人MIFcDNA并构建其高效原核表达载体,表达和纯化得到高纯度的可溶性hMIF蛋白。方法　经RT PCR从人乳腺癌细胞株MDA MB45 3中扩增到hMIFcDNA ,并克隆到原核表达载体pET11b中。测序验证后将其转入大肠杆菌BL2 1中表达,最后经离子交换和疏水层析法纯化hMIF蛋白。结果　克隆到的hMIFcDNA与Genebank已发表的序列完全一致,纯化得到的产物经Westernblotting鉴定证实为hMIF蛋白。结论　应用基因重组技术成功构建了pET11b/hMIF重组质粒,在大肠杆菌中实现了高效表达;纯化到高纯度的可溶性hMIF蛋白,为治疗性抗hMIF抗体的研究创造了条件。; 刘进军李鹏郭鹰潘自铁胡川闽; 关键词：乳腺癌原核表达蛋白纯化

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潘自铁