熊雅念
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室更多>>
- 发文基金：上海市科学技术发展基金国家自然科学基金中国农业科学院院长基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 日本血吸虫dysferlin基因的克隆及重组蛋白免疫原性的分析被引量：1
- 2013年
- 为评估日本血吸虫dysferlin重组蛋白(rSjDF)的免疫原性,利用PCR技术扩增SjDF基因,构建重组表达质粒pET-28a(+)-SjDF,诱导表达重组蛋白rSjDF,并用重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗体。应用间接免疫荧光技术对SjDF进行蛋白组织定位。应用Western-blot、ELISA及Bio-Plex悬液芯片技术检测重组蛋白诱导的免疫反应。间接免疫荧光试验表明SjDF主要分布于血吸虫体被表膜。Western-blot结果显示rSjDF能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有良好的免疫原性。rSjDF能诱导小鼠产生高水平的特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体和IL-2、IL-4、IL-12p70、IL-10、IFN-g等细胞因子。结果表明,制备的重组抗原能刺激小鼠产生较强的免疫反应,为筛选新的血吸虫疫苗候选分子奠定了基础。
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- 关键词：日本血吸虫DYSFERLIN基因克隆免疫应答
- 日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析
- 2013年
- 为解析日本血吸虫精氨酸酶的功能,本研究克隆了SjARG基因、长度为1095 bp,并将该基因克隆一到原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET-28a-SjARG,并在大肠杆菌中成功表达,Western blot显示重组蛋白具有良好的抗原性;通过酶活性分析显示,重组蛋白SjARG在添加Mn2+后活性得到提高,酶活性大小为502 U/mg,Km值为82.7mM。该研究结果为进一步深入研究该基因的表达特性、酶学性质以及候选疫苗分子研究方面提供了基础。
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- 关键词：日本血吸虫精氨酸酶酶活性
- 日本血吸虫章鱼胺受体基因的克隆表达及分析被引量：2
- 2013年
- 为克隆日本血吸虫章鱼胺受体(SjOAR)基因,揭示其表达情况以及表达产物的分布情况,利用PCR方法克隆了SjOAR基因。Blast分析表明,该基因与终末宿主对应的肾上腺素受体基因的同源性较低。利用大肠杆菌表达了受体蛋白的保守区段。Western-blot分析结果表明,重组蛋白能被成虫抗原抗血清识别,其特异性抗体也能识别天然受体蛋白。实时定量RT-PCR分析结果显示,SjOAR基因在血吸虫的童虫和成虫中转录差异不大。免疫组化观察显示,该受体蛋白在日本血吸虫体被下方的肌层和生殖系统中分布较多。结果表明,日本血吸虫章鱼胺受体有作为抗血吸虫药物研究靶标的潜力。
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- 关键词：日本血吸虫转录
- 日本血吸虫精氨酸酶的克隆表达及酶活性分析
- 题组在前期日本血吸虫体被表膜蛋白研究中鉴定到精氨酸酶,为进一步阐明日本血吸虫精氨酸酶(SjARG)的特性和生物学功能,应用PCR克隆了SjARG基因,构建了重组表达质粒pET-28a-SjARG,在大肠杆菌BL21(DE...
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- 关键词：兽医学日本血吸虫精氨酸酶酶活性
- 日本血吸虫表膜蛋白dysferlin和myoferlin的初步研究
- 日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患寄生虫病。除了人以外，还有40多种家畜以及野生动物是日本血吸虫的储存宿主。目前，对血吸虫病的防控主要基于药物治疗受感染的人和家畜，然而，由于重复感染严重，单靠药物治疗并不能阻断血吸虫病...
- 熊雅念
- 关键词：日本血吸虫
- 文献传递
- 日本血吸虫SjIrV1的基因特性及免疫保护效果
- 2013年
- 钙结合蛋白是日本血吸虫生长发育不可缺少的蛋白,具有非常广泛而重要的功能。在课题组日本血吸虫体被表膜蛋白研究基础上,利用PCR技术克隆了中国大陆株日本血吸虫66 kDa钙结合蛋白(SjIrV1)编码基因的cDNA序列,BLAST分析与菲律宾株日本血吸虫SjIrV1 cDNA编码序列一致,荧光定量PCR分析表明该基因在童虫和成虫期不同发育阶段均有表达,其中在35 d和42 d成虫中表达量较高,在42 d雌虫中该基因表达水平远高于42 d雄虫。构建重组表达质粒pET28a(+)-SjIrV1,在大肠杆菌中成功诱导表达,重组蛋白主要以可溶性形式存在,通过高效液相色谱法(RP-HPLC)以及串联质谱法(MS/MS)鉴定所获蛋白为目的蛋白SjIrV1。蛋白质印迹(Western blotting)分析结果显示重组蛋白能被感染日本血吸虫鼠血清和免疫鼠血清所识别,SjIrV1蛋白在虫体各发育阶段中均表达。免疫荧光染色实验观察表明SjIrV1主要分布在日本血吸虫成虫的表膜。应用重组蛋白免疫BALB/c小鼠后,免疫鼠血清中检测到较高水平的特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体。结果表明SjIrV1可能在日本血吸虫的生长发育过程中起着重要作用。
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- 关键词：日本血吸虫钙结合蛋白免疫原性免疫保护
