王丽丽
- 作品数：15 被引量：44H指数：4
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省卫生厅科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- siRNA干扰铜绿假单胞菌MexA-MexB-OprM外排泵mexB基因表达的研究被引量：4
- 2011年
- 目的探讨RNA干扰技术对铜绿假单胞菌MexA—MexB-OprM外排泵mexB基因表达及有关功能的影响。方法设计并合成4条小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）（siRNAl、siRNA2、siRNA3和siRNA4）序列，构建干扰RNA（short hair pin RNA，shRNA）表达载体，将带有siRNA质粒电转入PAOI和临床耐药株PA03。应用E-test方法检测PA01和PA03抗生素MIC的变化。用半定量RT—PCR和定量PCR方法检测mexB的表达变化。结果经酶切鉴定siRNA表达载体构建成功，并明显提高PAO和临床耐药株PA03对抗生素的敏感性。RT-PCR结果显示干扰后的PA01和临床耐药株PA03mexB基因表达明显下降（P〈0．05）。结论siRNA成功干扰MexA－MexB－OprM外排泉mexB基因的表达，提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性，为临床上治疗铜绿假单胞菌感染，降低其耐药性提供了新的思路。
- 龚凤云王丽丽宋莹邢名友宋建新
- 关键词：铜绿假单胞菌
- 穿心莲内酯抑制铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用被引量：16
- 2010年
- 目的:研究穿心莲内酯对铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM的作用及其机制。方法:采用实时荧光定量PCR分别检测PAO1和MexAB-OprM过度表达株Mex1、Mex2、Mex3培养3h及加入穿心莲内酯0,100,200mg·L-1再培养6h的MexB基因表达量。采用Mueller-Hinton倍比稀释法,检测头孢他啶、头孢匹罗、氯霉素、左氧氟沙星、卡那霉素、依米配能、美罗培南对上述菌株的最小抑菌浓度(MIC)。结果:培养9h与3h相比,PAO1、Mex1、Mex2、Mex3的MexB表达量显著升高,P值分别为0.031,0.027,0.030,0.012。穿心莲内酯100,200mg·L-1组与对照组相比,头孢他啶、头孢匹罗、左氧氟沙星、美罗培南对PAO1、Mex1、Mex2、Mex3株菌的MIC分别降低50%,75%,75%和50%～75%,而对PAO1株QS信号分子C4-HSL的分泌差异无显著性。结论:外排泵MexAB-OprM主要在稳定生长期表达,穿心莲内酯对铜绿假单胞菌外排泵MexAB-OprM转录表达的抑制作用使其可恢复部分抗菌药物的敏感性,而这种作用并非通过抑制C4-HSL的分泌而实现。
- 郭威周莹叶露王丽丽吴春明覃慧敏李洪涛宋建新
- 关键词：穿心莲内酯铜绿假单胞菌外排泵密度感应
- 阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵及耐药性的影响被引量：10
- 2012年
- 目的探讨阿奇霉素对铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的影响,为指导临床合理选择抗生素提供依据。方法排泵抑制剂(苯丙氨酸-精氨酸-β-萘酰胺PAβN)干预铜绿假单胞菌后,采用微量肉汤稀释法测定常见药物的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值的变化,筛选主动外排表型阳性菌株。PCR扩增主动外排表型阳性菌株oprM、mexB和mexR;real-time PCR检测主动外排表型阳性菌株mexB的mRNA水平;对主动外排表型阳性菌株进行mexR基因测序分析。在阿奇霉素作用下,观察铜绿假单胞菌的mexB基因表达及对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值变化。结果从20个临床多重耐药的铜绿假单胞菌菌株中筛选出8株主动外排表型阳性菌。检测表明这8株菌oprM、mexB和mexR均呈阳性,mexB的mRNA水平均较PAO1显著增高。对8株MexAB-OprM高表达菌mexR基因进行测序,发现菌株PAO03的mexR基因存在突变。阿奇霉素可显著降低mexR基因未突变MexAB-OprM高表达菌株的mexB基因的表达和对头孢他啶、左氧氟沙星、环丙沙星和美罗培南的MIC值,而对菌株PAO03和nalB突变株(mexR基因突变MexAB-OprM高表达菌株)无显著影响。结论阿奇霉素可抑制铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵的表达,提高铜绿假单胞菌对抗生素的敏感性。
- 夏超谢旭华王丽丽龚凤云宋莹宋建新
- 关键词：铜绿假单胞菌外排泵抑制剂阿奇霉素MEXAB-OPRM
- 金黄色葡萄球菌诱导小肠上皮细胞炎性反应及凋亡作用的观察被引量：3
- 2011年
- 目的观察研究小肠上皮细胞Caco-2细胞对金黄色葡萄球菌感染的反应。方法采用细胞内菌落技术法推算Caco-2细胞内吞金黄色葡萄球菌的能力,采用Realtime-PCR法检测Caco-2细胞NOD2基因在金黄色葡萄球菌感染时的表达情况,采用ELISA、流式细胞术等方法观察Caco-2细胞在金黄色葡萄球菌感染时细胞因子分泌水平,核转录因子(nuclear factorκB,NF-κB)活化水平和细胞凋亡发生率。结果 Caco-2细胞能够内吞金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌感染可引起Caco-2细胞内NOD2表达增高,NF-κB活化水平增高,分泌细胞因子水平升高,Caco-2细胞发生凋亡,且凋亡率随感染后时间延长增高。结论金黄色葡萄球菌能够激活Caco-2细胞的免疫反应,细胞内模式识别受体NOD2在识别细胞内细菌、信号传导、核转录因子激活中发挥关键作用。
- 谢旭华王丽丽龚凤云夏超宋莹申爱霞宋建新
- 关键词：金黄色葡萄球菌CACO-2细胞核转录因子
- NOD2在巨噬细胞对金黄葡萄球菌的炎性反应中的作用研究被引量：4
- 2011年
- 目的 通过观察对比巨噬细胞NOD2基因沉默前后对金黄葡萄球菌感染的免疫应答,了解NOD2基因在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞过程中所起的作用.方法 采用real-time RT-PCR的方法检测巨噬细胞NOD2基因在金黄葡萄球菌感染时的表达情况,合成针对NOD2的siRNA并干扰巨噬细胞.采用ELISA、流式细胞术等方法观察NOD2基因沉默对其在金黄葡萄球菌感染时的吞噬能力、细胞因子分泌水平、核转录因子（NF-κB）活化水平、细胞凋亡的影响.结果 金黄葡萄球菌感染巨噬细胞可引起细胞内NOD2表达增高.巨噬细胞NOD2基因沉默可导致其吞噬金黄葡萄球菌的能力降低,分泌细胞因子水平降低,NF-κB激活不足.金黄葡萄球菌可以引起巨噬细胞发生凋亡,凋亡率随时间延长而升高.结论 在金黄葡萄球菌感染巨噬细胞的过程中,位于细胞内的模式识别受体NOD2在病原体识别、信号转导、NF-κB激活中发挥关键作用.
- 谢旭华王丽丽龚风云夏超宋莹宋建新
- 关键词：金黄葡萄球菌巨噬细胞核转录因子
- siHybrids技术沉默铜绿假单胞菌外排泵mexB基因体外效应的初步研究被引量：1
- 2011年
- 目的初步研究siHybrids技术对铜绿假单胞菌野生菌PA01外排泵mexB基因体外沉默效应。方法针对铜绿假单胞菌野生株PAOI外排泵mexB基因设计并合成3条特异性silly—brids分子和l条阴性对照siHybrids分子。在分子浓度为50nmol／L下，分别以合成的siHybrids分子干扰铜绿假单胞菌野生菌PA01，并设实验组为铜绿假单胞菌野生菌PA01空白对照组，阴性对照组scamble（SC）-001，干预组siHybrids（si）-001、siHybrids（si）-002及siHybrids（si）-003，分别在干预12h及24h后采用real．timePCR法检测各实验组中靶基因mexB基因mRNA的表达水平。进一步采用Mueller-Hinton倍比稀释法检测50nmol／L浓度下，siHybrids分子干预铜绿假单胞菌野生菌PA01前后氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L-OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）的最小抑菌浓度（Mm）值。结果不同siHybrids分子干预PA0112h后，mexB基因mRNA表达量无明显差异性；但干预24h后，mexB基因mRNA表达量：干预组（si-001，si-002，si-003）比空白对照组、阴性对照组（sc-001）有明显下降。对比干预12h、24h后mexB基因mRNA表达量，可以发现空白对照组、阴性对照组（sc-001）mRNA的表达量成上升趋势，而干预组（si-001，si-002，si-003）mexB基因mRNA表达量均呈下降趋势。siHybrids分子在干预铜绿假单胞菌野生菌24h前后的氯霉素（CP）、红霉素（EM）、左氧氟沙星（L—OFLX）、头孢他啶（CAZ）、美洛培南（MER）MIC无明显差异性。结论在mRNA表达水平上，siHybrids分子能体外干预铜绿假单胞菌PA01mexB基因mRNA表达，此种沉默作用呈现时间依赖性，且在24h能有效地发挥干预作用。
- 毛艳陈佳许东邢铭友王丽丽谢旭华龚凤云夏超申爱霞宋莹占伟丽宋建新
- 关键词：RNAI铜绿假单胞菌外排泵REAL-TIME
- pvdQ基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响被引量：2
- 2011年
- 目的观察pvdQ(PA2385)基因对铜绿假单胞菌生物膜形成的影响。方法构建pvdQ基因表达质粒pME6032-pvdQ,鉴定后,采用电穿孔法将其转入PAO1野生株中,构建pvdQ高表达株。同时将空质粒pME6032采用电穿孔法转入PAO1野生株中,构建pME6032空质粒株,采用Real-time PCR检测各株pvdQ mRNA的表达。采用结晶紫染色法,观察PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株培养24、48和72 h时生物膜的生长情况。结果 Real-time PCR证实成功构建pvdQ高表达株。结晶紫染色的结果显示:培养24h时PAO1野生株、pvdQ高表达株和pvdQ突变株形成的生物膜厚度差异无统计学意义(P>0.05);培养48 h和72h时与PAO1野生株比较,pvdQ高表达株生物膜明显变薄(P<0.05),pvdQ突变株生物膜明显增厚(P<0.05)。结论铜绿假单胞菌PAO1野生株、pvdQ突变株和pvdQ高表达株体外形成生物膜的能力有显著性差异,pvdQ基因可能影响铜绿假单胞菌体外形成生物膜的能力。
- 王丽丽龚凤云谢旭华夏超陈佳宋莹申爱霞邢铭友许东宋建新
- 关键词：铜绿假单胞菌群体感应系统生物膜
- 穿心莲对肝炎后肝硬化并发上消化道出血患者血浆内毒素和一氧化氮的干预作用被引量：2
- 2008年
- 陈维华邢铭友赵春华李洪涛叶露王丽丽毛艳宋建新
- 关键词：肝炎后肝硬化上消化道出血血浆内毒素穿心莲片干预作用
- 先天性胆管扩张症误诊为急性戊型肝炎
- 2011年
- 【病例】男，65岁。因皮肤、巩膜黄染2个月，加重1周入院。患者2个月前无明显诱因出现皮肤、巩膜黄染，小便色深，偶感腹胀，于当地医院查抗HEV—IgG阳性，诊断为急性戊型肝炎（戊肝），给予护肝、退黄药物治疗10d，皮肤、巩膜黄染略减轻。
- 陈佳许东宋建新申爱霞王丽丽
- 关键词：胆管扩张症误诊肝炎戊型
- pvdQ基因对铜绿假单胞菌群集运动的作用
- 2011年
- 目的探讨铜绿假单胞菌pvdQ（PA2385）基因对群集运动的作用。方法构建pvdQ基因表达质粒pME6032-pvdQ并鉴定，采用电穿孔法将带有pvdQ基因的质粒转入铜绿假单胞菌野生株PA01中，构建pvdQ-高表达株。同时将空质粒pME6032采用电穿孔法转入PA01中，构建pME6032空质粒株。选择含有反向筛选基因sacB的pEX18Gm质粒作为自杀载体，构建缺失pvdQ基因的铜绿假单胞菌无痕缺失突变株，溶菌肉汤（LB）液过夜培养，观察菌株的直径变化。统计学处理采用单因素方差分析。结果经鉴定，成功构建pvdQ-高表达株和pvdQ突变株，比较4株菌的群集运动直径变化：PAO1为（20．52±1.80）mm，pME6032空质粒株为（19．39±2．10）mm，pvdQ高表达株为（51．20±2．16）mm，pvdQ突变株为（3．30±0．55）mm。pME6032空质粒株与野生株PA01相比，直径无显著变化（t=-0．1493，P〉0．05），pvdQ突变株与野生株PAO1相比，直径减小（t=2．8525，P〈0．05），pvdQ高表达株与野生株PAO1相比，直径增大（t=1．4230，P〈0．05）。结论pvdQ基因参与调控铜绿假单胞菌群集运动，且能促进铜绿假单胞菌群集运动。
- 王丽丽龚凤云叶露宋建新
- 关键词：假单胞菌铜绿突变质粒
