王书平
- 作品数：18 被引量：80H指数：6
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省“13115”科技创新工程重大科技专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 小麦生理型和遗传型雄性不育系及其保持系小花完整叶绿体蛋白质组分比较研究被引量：10
- 2011年
- 采用固相pH梯度SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术,以小麦遗传型雄性不育系ms(S)-1376、杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育系ms(A)-1376,以及对应的保持系(A)-1376(杀雄剂诱导前的正常可育系)所构建的等基因和等生理差异系为试材,比较分析了2种分离纯化完整叶绿体的方法。在确立了一套适用的技术方法的基础上,研究了三者在花粉小孢子萌发单核早期小花完整叶绿体蛋白之间的差异。采用30%、45%和60%的不连续蔗糖密度梯度离心的方法能够获得完整且纯度较高的叶绿体,经TCA-丙酮提取蛋白质后,PDQuest软件分析,在分子量14.4～66.2kD,等电点4～7的线性范围内可分辨出2-DE图谱上239个较为清晰的蛋白质点,对其中的6个差异表达蛋白质点进行MALDI-TOF肽质量指纹图谱分析,从生物信息学数据库检索鉴定出6个差异蛋白质点分别是酰基辅酶A脱氢酶结构域蛋白、钙调结合蛋白磷酸酶、多催化功能肽酶、热休克蛋白60、光受体蛋白2及1个未知功能的表达蛋白质。这些蛋白质在供试小麦叶绿体物质能量代谢、叶绿体防卫抵御机制、叶绿体细胞内信号转导及植物极性生长等生理应答反应中起调控作用,它们能在本研究供试两不育系和对应可育系中差异表达,可能与雄性不育相关。
- 李莉王书平张改生王亮明宋瑜龙张龙雨牛娜马守才
- 关键词：小麦MALDI-TOF-MS
- 小麦小花高纯度线粒体的分离及其蛋白质双向电泳体系建立被引量：3
- 2013年
- 应用差速离心和Percoll不连续密度梯度法分离纯化小麦三核期小花线粒体.在裂解液选择、IPG胶条pH值范围、SDS-PAGE胶浓度及蛋白质上样量等方面对线粒体蛋白质双向电泳体系进行探索和优化,确立了一套适用于小麦小花高纯度完整线粒体的分离方法及其蛋白质双向电泳的技术体系.结果表明,采用20%、24%和40%Percoll密度梯度和28%Percoll自形成密度高速离心体系,获得了有活性、高纯度且较完整的线粒体;经TCA-丙酮法提取蛋白,以7 mol/L尿素,2mol/L硫脲,4%CHAPS(W/V),65 mmol/L DTT,0.5%IPG缓冲液(V/V),0.001%溴酚蓝(W/V)裂解液溶解蛋白,采用17 cm,pH 4～7 IPG胶条和11%SDS-PAGE分离胶,上样量为160μg,硝酸银染色法,更适合小麦小花线粒体蛋白质组双向电泳分离.经PDQuest 2DE 8.0.1软件包统计分析,在2-DE图谱上分辨出约150个蛋白点,蛋白点清晰呈圆形,无横条纹干扰,这为利用双向电泳技术在亚细胞水平对线粒体进行蛋白质组学研究与分析奠定了基础,更为进一步分析研究线粒体与雄性不育的关系提供了理论与技术支撑.
- 陈征王书平张改生宋齐鲁郭佳林车会学
- 关键词：小麦小花密度梯度离心双向电泳
- PEG-6000胁迫对小麦三叶期蛋白表达的影响被引量：11
- 2010年
- 为了探索干旱胁迫下小麦蛋白质表达的变化,选取旱地品种烟D27、陕优225和水地品种新麦18、小偃22、10-31为材料,在小麦三叶期,用18%和35%两种浓度的聚乙二醇(PEG-6000)模拟干旱胁迫,处理待试小麦24 h后,用TCA丙酮法提取叶片全蛋白,通过SDS-PAGE电泳分析小麦在干旱胁迫后的蛋白质带谱,并运用高效液相色谱-质谱联用技术鉴定了新麦18的35.0 kD干旱敏感蛋白条带。结果表明,PEG-6000胁迫后分子量28.0 kD蛋白在水地品种中消失,在旱地品种中正常表达或诱导表达。此外,干旱胁迫使抗旱品种烟D27诱导产生33.0和23.0 kD干旱应答蛋白条带,导致抗旱性弱的水地品种新麦18的35.0 kD蛋白条带消失。对新麦18的35.0 kD蛋白条带进行液相色谱分离结合质谱分析后发现其含有17种与基本生命活动有关的蛋白,这些蛋白与小麦对干旱胁迫的适应性代谢调节有关。
- 马俊会杨华瑞许喜堂邹淑芳刘录祥王书平曹颍妮王成社
- 关键词：小麦三叶期蛋白质表达
- 杀雄剂SQ-1诱导小麦生理型雄性不育小花完整叶绿体差异蛋白质组学研究
- 化学杀雄技术打破了三系育种的束缚,使化控二系育种技术在生产上得到广泛应用。杀雄剂SQ-1是我国自行研制的具有自主知识产权的一种新型小麦杀雄剂,正常发育的小麦经SQ-1处理后,可得到95%-100%的不育株,异花授粉结实率...
- 王书平
- 关键词：小麦完整叶绿体差异蛋白质MALDI-TOF-MS
- 文献传递
- 小麦生理型和遗传型雄性不育系及其保持系小花完整叶绿体蛋白质组分比较研究
- 李莉王书平张改生王亮明宋瑜龙张龙雨
- 关键词：INTACTCHLOROPLASTMALDI-TOF-MS
- 三例小麦细胞质雄性不育系线粒体DNA的扩增片段长度多态性分析被引量：2
- 2013年
- 细胞质雄性不育是小麦杂种优势利用的重要途径,为了鉴定3例小麦雄性不育系的细胞质类型,对其线粒体DNA(mtDNA)进行扩增片段长度多态性(Amplified fragment length polymorphism,AFLP)分析。文中利用差速离心法和不连续蔗糖密度梯度超速离心法提取纯化小麦线粒体。结果表明:通过该提取方法获得的mtDNA,其质量和纯度能够满足PCR反应和遗传学分析。在64对选扩引物中,筛选到了4对特异性引物,其中引物E1/M7在ms(Kots)-90-110不育系扩增出3条特异条带;引物E4/M2在ms(Ven)-90-110不育系扩增出2条特异条带;引物E7/M6在ms(S)-90-110不育系中扩增出2条特异条带;引物E6/M4在ms(Kots)-90-110不育系中扩增出2条特异条带。这些特异引物可以用来作为鉴定具有粘果山羊草Aegilops kotschyi、偏凸山羊草Ae.ventricosa、斯卑尔脱小麦Triticum spelta 3类不育细胞质型小麦雄性不育系的细胞质分子标记,为研究小麦细胞质雄性不育机理奠定了分子基础。
- 朱启迪张新钵Ejaz M张改生车会学王书平宋齐鲁杨书玲张龙雨
- 关键词：小麦细胞质雄性不育线粒体DNA扩增片段长度多态性分子标记
- 小麦生理型雄性不育花药绒毡层和孢粉素变化与RAFTIN1表达的关系被引量：15
- 2011年
- 【目的】研究小麦生理型雄性不育花药绒毡层变化、孢粉素累积与RAFTIN1表达间的关系,为揭示小麦生理型雄性不育的机理奠定基础。【方法】以杀雄剂SQ-1诱导的生理型雄性不育系、质核互作遗传型雄性不育系,正常可育近等基因系为试材,通过石蜡切片、细胞荧光染色和荧光定量PCR技术,研究小孢子不同发育时期花药绒毡层的形态变化、孢粉素的累积及RAFTIN1的表达。【结果】单核期生理型不育系花药绒毡层提前降解,分泌孢粉素的含量降低,RAFTIN1提前高表达,使大量孢粉素转运至花粉壁层;二核期和三核期,生理型不育系绒毡层完全退化,停止分泌孢粉素,RAFTIN1呈现明显的下调表达模式。【结论】杀雄剂SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育其败育机理与绒毡层的提前降解和定向转运孢粉素的RAFTIN1表达高低直接相关。
- 盛英张改生李亚鑫张龙雨王书平赵新亮王亮明宋瑜龙
- 关键词：绒毡层孢粉素实时荧光定量PCR
- 杀雄剂SQ-1诱导的小麦生理型雄性不育系交替氧化酶基因(AOX1)的表达分析被引量：2
- 2011年
- 为了揭示小麦生理型雄性不育败育过程与交替氧化酶(AOX1)基因表达的关系,利用荧光定量技术分析了小麦交替氧化酶基因家族AOX1基因(AOX1a和AOX1c)在K型遗传型不育系[ms(Kots)-90-110]、K型不育系和恢复系杂交后经多代回交选育的可育系(BC5F1)以及杀雄剂SQ-1诱导的BC5F1小麦生理型雄性不育系的旗叶和花药(单核期、二核期、三核期)中的表达情况。结果表明,AOX1a基因在供试可育系(BC5F1)和遗传型不育系[ms(Kots)-90-110]中的表达规律一致,都表现为旗叶中的表达量较少,花药单核期表达量最高,二核期和三核期表达量下降;SQ-1诱导的生理型不育系中AOX1a基因在旗叶中表达量也最少,花药单核期表达量最高,二核期表达量减少,但三核期略呈上升;与其他2个材料相比较,生理型不育系的单核期AOX1a基因的表达量极显著增加,二核期极显著降低。AOX1c基因在3个材料各时期的表达规律一致,都表现为先升后降;但在表达量上,可育系与生理型不育系各时期的表达量两者几乎没有差异,遗传型不育系中的单核期表达量极显著低于可育系和生理型不育系。推测,AOX1a基因在生理型不育系单核期和二核期的异常表达,可能影响了花药发育过程中抗氰呼吸途径,导致呼吸代谢紊乱,引起花药败育;AOX1c基因没有参与生理型不育的代谢调节。
- 李亚鑫盛英张改生宋瑜龙王亮明张龙雨王书平李莉
- 关键词：小麦荧光定量PCR
- 小麦生理型雄性不育花药绒毡层和孢粉素变化与RAFTIN1表达的关系
- 盛英张改生李亚鑫张龙雨王书平赵新亮
- 关键词：WHEATAGENTANTHERTAPETUMSPOROPOLLENIN
- 多子房小麦蛋白质双向电泳体系的建立及优化被引量：3
- 2015年
- 为建立适用于显性多子房小麦细胞质效应的蛋白质双向电泳体系,以显性多子房小麦材料DUOII与特异细胞质材料TeZhiI杂交的F1幼穗为材料,采用TCA-丙酮法提取蛋白质,并在IPG胶条长度和pH范围、SDS-PAGE凝胶浓度及蛋白质上样量等方面,对多子房小麦幼穗蛋白质双向电泳体系进行了探究与优化.结果表明,本文采用的蛋白质定量方法准确度高（R^2=0.9999）,确立了17 cm,pH4-7的IPG胶条,12%SDS-PAGE分离胶,上样量为900μg的双向电泳方法体系,获得了最适合本研究蛋白质组分析的双向电泳图谱.经PDQuest 2DE 8.0.1软件分析,2-DE图谱上可分辨出1444±14个清晰蛋白质点,且重复性较高（95%）,相关系数为0.960.建立了一套适用于显性多子房小麦细胞质效应研究的蛋白质双向电泳体系.
- 郭佳林李政张改生王书平宋齐鲁李影马守才牛娜王军卫
- 关键词：小麦蛋白质组双向电泳
