王劲
- 作品数：4 被引量：13H指数：3
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- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 烟草脱外壁花粉与完整花粉电激导入效果的比较研究
- 1998年
- 利用膜不通透的荧光染料钙黄素作为指示剂，比较了烟草脱外壁花粉与完整的未萌发花粉和萌发花粉电激导入的效果．研究了电激过程中的电场强度、脉冲持续时间、电激液的介质成分和浓度对三者的导入率及电激后花粉萌发率的影响．结果表明，从未萌发花粉、萌发花粉到脱外壁花粉，导入率逐渐升高，证实了脱外壁花粉由于摆脱了外壁的阻碍而有利于外源物质的电激导入．但电激后花粉萌发率的变化规律相反．荧光指示剂的应用便于优化选择适宜电激参数，为外源基因的导入实验提供了参考依据．
- 王劲施华中周嫦杨弘远
- 关键词：烟草
- 烟草脱外壁花粉人工萌发与离体授粉实验系统的建立被引量：7
- 1997年
- 通过花蕾低温处理、花药漂浮培养与花粉短时酶解程序可脱去花粉外壁,分离出烟草(Nicotianatabacum L.)的脱外壁花粉。研究了分离过程中的酶液渗透压、培养基中聚乙二醇(PEG)与蔗糖以及添加水解乳蛋白等因素对脱外壁花粉人工萌发的影响。在含30％PEG-6000与0.1％水解乳蛋白的D_2培养基中,萌发率最高达57.8％;花粉管生长正常,培养24h后一半以上的花粉管中生殖细胞分裂成精子。用微滴和贴滤纸小片的方法将30～40粒脱外壁花粉授予柱头上,近一半能萌发花粉管并在花柱中生长。采取授粉后子房培养方法,获得了种子与幼苗。从而建立了脱外壁花粉离体授粉实验系统。讨论了脱外壁花粉人工萌发与离体授粉实验系统的建立对于研究外壁在花粉萌发中的生物学功能以及开拓新的转基因技术等方面的意义。
- 王劲夏惠君周嫦杨弘远
- 关键词：烟草花粉萌发授粉
- 烟草脱外壁花粉的电激基因转移被引量：4
- 1996年
- 以 β-葡糖苷酸酶 GUS 基因作为报告基因 ,通过瞬间表达的检测 ,比较了烟草 Nicotianatabacum L . 脱外壁花粉、未萌发与萌发花粉的电激导入效果 ,探讨了不同电激条件及启动子对外源基因瞬间表达的影响 .结果表明 :当脉冲时间常数为 13 ms时 ,导致脱外壁花粉和萌发花粉生活力下降约50 %的电场强度分别为 750 V/ cm和 12 50 V/ cm,在此条件下电激 ,二者的导入效果最好 .脱外壁花粉的GUS基因表达水平约为萌发花粉的 5倍、花粉粒的 30倍 .玉米花粉特异启动子 Zm13- 2 60 能启动 GUS基因在脱外壁花粉和萌发花粉中高效表达 ,而 Ca MV
- 施华中王劲杨弘远周嫦陈正华
- 关键词：烟草基因转移
- 用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达被引量：5
- 1998年
- 以β—葡糖苷酸酶（β—ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｓｅ，ＧＵＳ）基因作为报告基因，用基因枪法将其导入烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉，探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表达的影响，比较了二者的转化频率。结果表明：玉米花粉特异启动子能启动ＧＵＳ基因在脱外壁花粉和完整花粉中表达，而ＣａＭＶ３５Ｓ启动子则不能。靶距离越近，着弹率越高，ＧＵＳ基因瞬间表达频率越高；当进气压力为９００ｐｓｉ（ｐｏｕｎｄｓｐｅｒｓｑ．ｉｎ．）、靶距为６ｃｍ时，脱外壁花粉的瞬间表达频率达最高，为０．４５％，约为完整花粉的６倍。表达的蓝色反应花粉经ＤＡＰＩ荧光染色后细胞学观察表明，金粉粒能够打入营养核和生殖核。
- 王劲施华中周嫦周嫦张献龙杨弘远
- 关键词：基因枪GUS基因烟草
