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王慧莲: 作品数：10 被引量：8H指数：2; 供职机构：西安交通大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>

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人过氧化氢酶基因重组腺病毒的构建及其酶活性的测定: 2011年; 目的:构建含人过氧化氢酶(catalase,CAT)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法。方法:从人血中分离白细胞,提取总RNA,利用RT-PCR法获得人CAT的全长cDNA,克隆到pcDNA3.1+中,构建pcDNA3.1+-CAT载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆;利用酶切法把CAT基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-CAT载体;利用LR反应,体外重组pENTR1A-CAT和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-CAT。经测序鉴定,并用Pac I线性化pAd/CMV/V5-DEST-CAT后,与脂质体2 000共转染293A细胞,重组病毒颗粒的包装、扩增和滴度测定。利用免疫印迹和240 nm紫外光吸收法测定重组病毒中CAT蛋白的表达量和CAT的活性。结果:Ad-CAT、(A组)Ad-LacZ(B组)及PBS(C组)感染293A细胞24h,其细胞蛋白提取液在1至4 m in反应中CAT活性的变化经单因素方差分析,三组间差异有统计学意义(F=5.96,P<0.05)。其中,A组4 m in内的酶活性分别比B组和C组高出(63.8±1.54)%和(76.7±1.67)%(P<0.05),而B组与C组比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:本研究成功构建了含人CAT基因的Ad/CMV/V5-DEST-CAT载体,并在293A细胞中包装出高表达及高活性重组腺病毒,为进一步研究人CAT基因在基因治疗中的作用奠定了基础。; 欧阳晓玲李爱玲宁启兰杨旭东许楠王慧莲; 关键词：基因基因疗法

含人谷胱苷肽过氧化物酶基因重组腺病毒的构建被引量：1: 2013年; 目的构建含人谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)基因的重组腺病毒载体,为基因治疗提供一种新的方法。方法从人血中分离出白细胞,提取总RNA,采用RT-PCR法获得人GPx-1和人GPx-2的全长cDNA,克隆到pcD-NA3.1+中,构建pcDNA3.1+GPx-1和pcDNA3.1+GPx-2载体,酶切和基因测序鉴定阳性克隆;采用酶切法把GPx-1和GPx-2基因克隆至入门载体pENTR1A中,构建pENTR1A-GPx-1和pENTR1A-GPx-2载体。采用LR反应,体外重组pENTR1A-GPx-1或pENTR1A-GPx-2和pAd/CMV/V5-DEST,得重组腺病毒表达载体pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2。PCR和序列测定鉴定重组腺病毒载体。293A细胞中包装和扩增GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒。结果获得GSH-Px-1和GSH-Px-2的重组腺病毒载体和重组腺病毒。结论成功构建了pAd/CMV/V5-DEST-GPx-1和pAd/CMV/V5-DEST-GPx-2重组腺病毒载体,并在293A中获得该重组腺病毒,为进一步研究人GSH-Px基因在基因治疗中的作用奠定了基础。; 宁启兰许楠王慧莲; 关键词：重组腺病毒活性氧

KCNE2蛋白在自发性高血压大鼠心脏组织中的分布和表达: 2008年; 目的研究KCNE2蛋白在自发性高血压大鼠(SHR)心脏不同部位的分布和表达差异,及鼠龄对其表达水平的影响。方法提取幼龄和高龄SHR心肌不同部位(心室、室隔膜和心房)组织的膜蛋白,利用Western印迹技术和图象分析方法,比较KCNE2蛋白在样品之间免疫强度差异。结果SHR心肌不同部位组织中均有KCNE2蛋白的分布;同龄大鼠心肌不同部位组织中KCNE2蛋白的表达均无显著性差异;但在高龄大鼠的右心室和室隔膜组织中,KCNE2蛋白的表达显著高于其在幼龄大鼠相同组织中的表达。结论KCNE2蛋白在SHR心脏不同部位均有分布;在高龄大鼠右心室和室隔膜组织中,KCNE2蛋白的表达水平均高于其在幼龄大鼠同一组织中的表达。; 王慧莲吕社民宁启兰韩燕杨旭东钟波Tseng GN; 关键词：自发性高血压大鼠 WESTERN印迹法

让理解与记忆为生物化学学习筑基被引量：3: 2020年; 生物化学是生物学和医学本科生的专业基础课或平台课。如何实现其良好的教学效果一直是生物化学教师努力的目标。生物化学内容庞杂,从静态的生物分子到动态的代谢途径,都是生物机体中的客观存在,在理解的基础上大量记忆才能更好地掌握。引导、督促学生在思考、理解的基础上,通过端正学习态度、转述所学内容、牢记生物化学核心知识点,尝试用理论知识解释、分析相对简单的生物学现象,是学好生物化学的有效途径。; 李冬民杨旭东王慧莲武丽涛李红民; 关键词：本科生长时记忆知识内化

微信与微课结合在医学生物化学教学中的应用被引量：3: 2018年; 目的:如何改变传统的医学生化教学模式,开展最有效的教学实践活动,培养既有创新思维能力又有实际应用能力和基本科研素质的新型人才。方法:通过将微信平台和微课应用到生物化学的教学中,进行教师与学生之间多层次、全方位的信息沟通与互动。结果:强化学生对理论知识的理解和记忆,拓宽学生的知识面,培养学生科学研究的思维能力。结论:微信平台与微课相结合提高了课堂效率和质量。; 王慧莲李冬民; 关键词：生物化学教学

利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因: 2009年; 目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因。方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息。结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个。结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因。; 钟波王慧莲Muhammad Shahzad宁启兰韩燕杨旭东张富军吕社民; 关键词：抑制性消减杂交 CDNA文库

G蛋白偶联的内整流型钾通道在哮喘模型大鼠肺组织的表达: 2015年; 目的检测G蛋白偶联的内整流钾通道（G protein-coupled inwardly rectifying potassium channels,GIRK）在哮喘模型中的表达改变,并寻找调节其表达变化的因素。方法用卵清蛋白和铝佐剂致敏E3大鼠14d后,用卵清蛋白进行攻击以诱导哮喘模型,用磷酸盐缓冲液致敏并攻击的大鼠作为对照,通过观察肺组织病变、总IgE水平的改变等手段评价哮喘模型。用RT-PCR检测GIRK亚基1-4的mRNA水平,用Western blot等手段检测大鼠肺组织中GIRK1和GIRK3的蛋白水平,并用免疫组化确定肺组织中GIRK表达的解剖部位。根据免疫组化的结果,选用A549细胞株作为模型,用IL-4刺激,用PCR、Western blot等手段检测IL-4对GIRK表达的影响。结果与对照组相比,哮喘模型组肺组织中GIRK的mRNA水平下降,哮喘模型组肺组织中GIRK蛋白水平也下降。免疫组化结果显示,GIRK在大鼠主要表达于气道上皮。随IL-4浓度的升高,在A549细胞中GIRK的所有的亚基的表达均呈剂量依赖性下降趋势;选择50ng/mL IL-4刺激A549细胞,GIRK的所有的亚基的表达均呈刺激时间依赖性的下降。结论在E3大鼠哮喘模型中,IL-4下调气道上皮中GIRK的表达。; 杨旭东宁启兰蒋晓刚孙青竹刘莉韩燕张富军王慧莲; 关键词：哮喘 IL-4

定点突变法显示在高龄SHR大鼠心脏组织中KCNE2第98位氨基酸可能存在磷酸化修饰: 2007年; 目的:探究在高龄SHR大鼠心室膜蛋白中,KCNE2蛋白是否发生了磷酸化修饰。方法:用碱性磷酸酶处理高龄SHR大鼠心室膜蛋白,以抗KCNE2的抗体(Ab2)为一抗进行免疫印迹;将在蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,分别以Ab2和抗c-myc的抗体为一抗的免疫印迹;以及一系列的c-myc-hKCNE2的单点(KCNE2Y96F和KCNE2S98A)和双点突变(KCNE2Y96F/S98A)实验。结果:高龄SHR大鼠心室膜蛋白样品经碱性磷酸酶处理后,极大地减弱了Ab2对KCNE2蛋白的识别能力;另外,蛋白离体系统中翻译出的含c-myc的KCNE2融合蛋白经碱性磷酸酶处理后,虽然极大地减弱了Ab2对其融合蛋白的识别能力,却没有影响抗c-myc抗体对KCNE2融合蛋白的识别能力。定点突变的结果显示,虽然以抗c-myc抗体为一抗的免疫印迹结果显示,蛋白质离体翻译系统成功地翻译出了单突变子KCNE2S96A及双突变子KCNE2Y96F/S98A蛋白,但不论样品被碱性磷酸酶处理与否,Ab2在这些样品中均检测出很弱的KCNE2蛋白免疫条带。结论:在高龄SHR大鼠心室组织中,KCNE2第98位丝氨酸可能发生了磷酸化修饰。然而该位点的磷酸化修饰是否会通过影响心脏的电生理,而在SHR大鼠心脏病变过程中起着一定的作用,有待于从电生理的水平上进一步研究。; 王慧莲吕社民宁启兰杨旭东韩燕钟波Gea-Ny TSENG; 关键词：磷酸化点突变心脏钾通道

表达含hCAT基因重组腺病毒载体及其重组腺病毒: 本发明公开了含人过氧化氢酶基因重组腺病毒载体、重组腺病毒。是先将hCAT基因克隆到pcDNA3.1+中，酶切和基因测序鉴定阳性克隆；再利用酶切法把hCAT基因克隆至入门载体pENTR1A中。利用体外重组p ENTR1A-...; 王慧莲宁启兰吕社民杨旭东许楠李爱玲; 文献传递

生物化学腾讯会议与Workshop相结合教学模式的设计被引量：1: 2021年; 探索高效的生物化学教学方式对医学生职业技能的提升至关重要。文章以生物化学期中考试总结为题材,设计腾讯会议与Workshop相结合的教学模式,其目的就是通过教师与学生之间、学生与学生之间的协作互助,一方面提高学生自主学习能力和综合学习能力,另一方面促进教师授课水平的提高。该教学模式也适于医学其他基础课的教学,为基础课程教学方法的研究提供了新思路。; 王慧莲杨旭东武丽涛李冬民; 关键词：生物化学教学改革 WORKSHOP

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