王海平
- 作品数：26 被引量：43H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院野战输血研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SEN病毒中国分离株基因克隆及序列分析
- 2003年
- 目的 :测定SENV_D亚型中国分离株的基因组序列 ,并对其进行初步分析。方法 :根据国外已发表的SEN病毒基因序列设计特异性引物 ,应用套式PCR方法从一份非甲_非戊型 (non_A_E)肝炎患者血清中 ,分段扩增了包括SENV_D型所有编码区 (ORFs)长 3175bp的DNA片段 ,将其克隆到T载体后测序。结果 :测序结果经BLAST软件分析 ,与国外发表的 3株D型SEN病毒SENV_D(AX0 2 5 730 ) ,SENV_D(AB0 5 935 2 ) ,TTV(AB0 2 86 6 8)的核苷酸序列同源性分别为 90 % ,88%和 91% ;与 2株D型SEN病毒SENV_D(AX0 2 5 730 ) ,TTV(AB0 2 86 6 8)ORF1所编码蛋白的氨基酸同源性分别为 93%和 92 %。ORF1蛋白中含有Rep蛋白 (在病毒复制中起作用的一种蛋白 )的两个保守基序 ,此外还有一个保守的ATP GTP结合基序 (P_loop)以及若干个高度保守的蛋白激酶磷酸化位点。结论 :测定得到了SENV_D亚型中国分离株的基因组序列 ,有助于其检测方法及致病性的研究 ,并为研究SEN病毒的进化地位提供方便。
- 杜娟王海平孟庆华李娅詹林盛王全立
- 关键词：基因组病毒SEN病毒聚合酶链反应
- Ⅱ类抗原提呈的分子机制及分子伴侣Ii研究进展被引量：7
- 2004年
- 本文综述MHCⅡ抗原提呈的分子机制,并着重对MHCⅡ抗原提呈通路中的分子伴侣恒定链(Invariantchain,Ii)的结构、功能研究的近期进展作了回顾,对近年来开展起来的利用Ii链作为内源性靶向载体,将目的抗原表位内源性靶向MHCⅡ抗原结合凹槽的研究进行了简单的综述,内源性靶向为疫苗设计提供了很好的思路,可以应用于病原微生物、肿瘤和变态反应性疾病的治疗和预防中。
- 高明王海平王全立
- 关键词：抗原提呈内源性
- 一种嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白及其制备方法与应用
- 本发明公开了一种嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白及其制备方法与应用，目的是提供一种通用、高效的嵌合型病毒样颗粒疫苗载体蛋白以及以该载体蛋白为基础的疫苗。本发明所提供的载体蛋白，按如下方法得到：1)将包含酶切位点的连接子序列编...
- 王海平王全立甘慧周勇高明吕丽萍付秋霞王怡
- 文献传递
- 人LDLR基因的克隆及在Hepa1-6细胞中的表达
- 2004年
- 目的 :从能感染HCV的人肝癌细胞HepG2中克隆出人LDLR基因 ,构建其真核表达质粒 ,并在小鼠肝癌细胞Hepa1 6中进行表达。方法 :从HepG2中提取总RNA ,采取逆转录PCR(RT PCR)方法得到人LDLR的cDNA。将获得的人LDLR基因克隆到真核表达载体pcDNA3中 ,进行酶切和序列鉴定。将重组质粒pcDNA3 hLDLR和空载体转入Hepa1 6 ,G4 18筛选 ,并用RT PCR和FACS检测人LDLR基因转录和蛋白的表达。结果 :人LDLR的cDNA已插入载体pcDNA3构建成真核表达质粒pcDNA3 hLDLR ,双酶切和测序表明 ,克隆的人LDLR与已登录GenBank的序列存在核苷酸多态性 ,但编码的氨基酸序列完全一致 ,该序列的GenBank登录号为gi|2 16 2 96 4 7|gb|AY114 15 5 .1,并且真核表达质粒的构建正确。用脂质体介导的方法转入Hepa1 6后 ,用RT PCR和FACS检测表明 ,细胞可表达人LDLR。结论 :成功地构建了真核表达质粒pcDNA3 hLDLR ,为进一步研究HCV和人LDLR的相互作用 ,以及建立可能的HCV细胞感染模型奠定了基础。
- 吕丽萍贾帅争王海平詹林盛王全立
- 关键词：克隆基因表达质粒
- BALB/c小鼠I-A^dαβ链编码基因真核双顺反子载体的构建及表达被引量：1
- 2006年
- 目的:为了获取BALB/c小鼠I-Adα、β链编码基因,构建真核双顺反子表达载体并在NIH3T3细胞中表达,建立BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈细胞研究模型。方法:采用Trizol提取BALB/c小鼠脾细胞总RNA,RT-PCR获取I-Adαβ链 cDNA,连接pGEMT载体测序,正确后亚克隆至pIRES真核双顺反子表达载体;用Lipofectamine2000转染NIH3T3细胞,G418 筛选转染克隆株。RT-PCR鉴定外源基因在mRNA水平的表达;流式细胞术(FCM)鉴定外源基因在蛋白质水平的表达以及在细胞表面展示的水平。结果:建立了BALB/c小鼠I-Adαβ链编码基因真核双顺反子表达载体pIRES-I-Adαβ;pIRES-I-Adαβ转染NIH3T3细胞。在G418筛选下可获得高达72％的转染细胞;转染细胞总RNA RT-PCR显示外源基因在mRNA水平得到表达;FCM显示外源基因编码的蛋白高水平表达并定位于细胞表面。结论:为进一步研究BALB/c小鼠MHC-Ⅱ抗原递呈的分子机制奠定了基础。
- 高明王海平周勇王全立
- 关键词：BALB/C小鼠转染NIH3T3细胞
- 小鼠Ii分子的克隆表达及在COS-7细胞中的亚细胞定位被引量：1
- 2006年
- 目的获取BALB／c小鼠Ii链编码基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达。方法RT-PCR获取BALB／c小鼠Ii链编码基因,插入pEGFP真核表达载体,脂质体转染COS-7细胞,荧光显微镜和激光共聚焦观察外源基因的表达。结果外源基因在COS-7细胞中得到高效表达,激光共聚焦的结果显示,外源基因定位在细胞的内膜系统,并能够和I-Ad分子形成聚集体。结论Ii链在真核细胞中表达后定位在细胞的内膜系统并能和I-Ad分子形成聚集体。
- 高明王海平卢媛周勇王燕宁孙红琰王全立
- 关键词：BALB/C小鼠真核表达
- 基因表达系列分析技术研究进展被引量：3
- 2004年
- 基因表达系列分析技术(SAGE)是一种新的基因表达分析技术,它可以大量获取全基因组范围基因表达的类别并量化分析。由于其克服了基因丰度的影响,SAGE在新基因的发现中具有独特的优点。同时,SAGE技术被成功应用于特异组织或细胞的转录组研究、mRNA群体间的全局化比较以及差异表达基因染色体分布的分析。文章主要述及了SAGE技术的原理、特点及其在应用上的最新进展。
- 王怡王海平王全立
- 关键词：基因表达系列分析新基因表达谱
- 乙型肝炎病毒多表位嵌合蛋白的表达、纯化和鉴定被引量：7
- 2003年
- 目的 :构建含乙肝病毒表面抗原前S1,S2 (HBVpreS1,preS2 )优势B细胞表位与乙肝病毒核心抗原 (HBcAg)的嵌合蛋白 ,探索其作为兼具预防和治疗HBV感染作用的新型疫苗的可能性。方法 :利用分子克隆技术先后将HBVpreS1(2 1～ 4 7AA .) ,preS2 (133～ 14 5AA .)表位基因插入HBcAg基因中 ,得到HBVC14 4 ,CS1,CS1S2融合基因 ,分别克隆到原核表达载体pQE_30中 ,在大肠杆菌 (E .coli)M15中进行表达 ,用Ni2 + 固相化的螯合SepharoseFastFlow亲和层析纯化重组蛋白 ,最后进行抗原性的鉴定。结果 :构建了HBV嵌合型颗粒蛋白表达载体 ,并在E .coli中高效表达出可溶性病毒样颗粒蛋白C14 4 ,CS1,CS1S2 ,经Ni_NTA亲和层析纯化后 ,蛋白纯度达 80 % ,Western印迹及ELISA证明蛋白各表位都具有抗原性。结论
- 甘慧王海平周勇王全立
- 关键词：乙型肝炎病毒主动免疫疗法疫苗病毒样颗粒
- 小鼠白蛋白启动子的组织特异性功能研究被引量：1
- 2003年
- 以绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因,通过对比小鼠白蛋白启动子在不同来源细胞系中启动GFP基因的转录活性,对小鼠白蛋白启动子的组织特异性进行了研究。结果发现,小鼠白蛋白启动子在小鼠肝癌细胞系Hepa1-6和人肝癌细胞系HepG2均有很强的转录起始功能,荧光显微镜下可以观察到GFP表达。Hepa1-6细胞在转染早期的48h内,CMV的启动子和增强子序列是小鼠白蛋白启动子转录活性的4倍。G418加压筛选2周后,CMV的启动子的转录活性下降到只有小鼠白蛋白启动子活性的1/2。转染人肝癌细胞系HepG22周后,荧光显微镜下可以观察到GFP表达。其他的细胞如中华仓鼠卵巢细胞系CHO和人肺癌细胞系PLA801中转染的小鼠白蛋白启动子不能启动GFP的表达,而对照CMV启动子控制下的GFP基因可在CHO和PLA801中表达。以上结果说明,小鼠白蛋白启动子仅在肝脏来源的细胞中可以起始下游基因的转录,在其他组织来源的细胞中不能起始转录,这表明小鼠白蛋白启动子具有肝脏组织特异的转录活性,但没有种属特异性。
- 贾帅争吕丽萍刘敏霞詹林盛王海平王全立
- 关键词：小鼠白蛋白启动子组织特异性绿色荧光蛋白
- BALB/c小鼠I-A^dαβ链RFP融合双顺反子表达载体的构建及其在COS-7中的表达被引量：4
- 2004年
- 构建了在β链C端融合红色荧光蛋白(RFP)标签的BALB/c小鼠I-Adαβ链真核双顺反子表达载体pRed-IRES-I-Ad,使用LipofectAMINE2000转染COS-7细胞,用激光共聚焦显微镜观察外源蛋白在细胞中的表达与定位。I-Adαβ分子在COS-7细胞中能够以较高的效率表达,并且在COS细胞中能形成聚集状态。与通常的真核翻译帽子结构起始相比,IRES启动真核翻译系统的效率低于前者;与空质粒对比,IRES介导的真核翻译起始,RFP的表达量较低。
- 高明王海平王燕宁周勇王全立
- 关键词：IRESRFPBALB/C小鼠
