王焕芹
- 作品数：12 被引量：9H指数：2
- 供职机构：潍坊医学院基础医学院山东省高校免疫学重点实验室更多>>
- 发文基金：山东省科技攻关计划国家自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- IL-1β对Hepa1-6细胞增殖、迁移及IFN应答的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:构建应用于小鼠肝脏内表达和研究的IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其对小鼠Hepa1-6细胞体外增殖活性、迁移能力及干扰素增殖抑制效应等体外生物学行为的影响。方法:由C57BL/6小鼠腹腔液巨噬细胞扩增IL-1β基因,构建肝脏特异性pLIVE-IL-1β重组表达载体。利用transIT-LT1将鉴定后的pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR及双抗体夹心ELISA法分析转染前后IL-1表达水平,MTT法分析IL-1对细胞体外增殖活性的影响;利用细胞划痕实验分析对其迁移能力的影响,并确定对IFN-α诱导的细胞增殖抑制效应的作用。结果:重组载体经限制性酶谱分析酶解出822bp的条带,其序列与GenBank登录的小鼠IL-1β基因一致;转染后的Hepa1-6细胞培养上清中IL-1β的表达明显增高,细胞体外增殖速度明显加快;给予IFN-α作用后,IL-1β的表达使细胞对干扰素的抵抗性明显增强。结论:小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β能够在小鼠肝癌细胞中高效表达IL-1β,并能够显著促进肿瘤的体外增殖和迁移能力,削弱IFN-α对Hepa1-6细胞的增殖抑制作用。
- 林志娟梁淑娟王焕芹李艳平肖伟玲
- 关键词：IL-1Β肝癌NK细胞促炎性细胞因子干扰素
- 小鼠分泌型IL-1β真核表达载体的构建及其表达
- 2011年
- 目的:构建小鼠经典分泌途径IL-1β真核表达载体,转染至Hepa1-6细胞,并测定其分泌表达水平。方法:引物延伸获得小鼠AFP信号肽序列(sAFP),RT-PCR扩增获得小鼠IL-1β成熟蛋白基因序列(mIL-1β),SOE方法将两段序列拼接形成融合基因,与pIRES2-EGFP质粒重组构建分泌型真核表达载体pIRES2-EGFP-smIL-1β,并将其转染至Hepa1-6细胞,RT-PCR检测融合基因的表达水平,Western blot检测细胞内mIL-1β蛋白的表达,ELISA法测定培养上清及细胞裂解液中mIL-1β水平。结果:经SOE法拼接获得的融合基因与GenBank中登录的序列一致,RT-PCR检测显示该载体能够在Hepa1-6细胞中表达融合基因mRNA,细胞培养上清中mIL-1β的分泌水平明显上升,而胞质中的mIL-1β无明显变化。结论:成功地构建了经典途径分泌的mIL-1β重组表达载体,该载体可以在Hepa1-6细胞培养上清中有效分泌具有生物活性的mIL-1β。
- 肖伟玲王雪净牟东珍林志娟王焕芹梁淑娟
- 关键词：信号肽分泌表达
- AFP启动子调控的IL-1β表达对肝癌细胞生物学行为的影响
- 目的建立能够在肿瘤细胞中特异性表达高水平促炎性细胞因子IL-1β的真核表达载体,转染小鼠肝癌细胞建立皮下荷瘤模型,研究IL-1β对肝癌发生发展的影响,从而为肝脏肿瘤免疫逃逸机理的研究提供实验依据。
- 李青春梁淑娟刘艳艳王焕芹肖伟玲张素华
- 文献传递
- pLIVE-IL-1β表达载体的构建及在Hepa1-6细胞的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-PA1-6细胞中的表达水平。方法分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定。利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepa1-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平。结果从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到一822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经XhoⅠ和NheⅠ双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒XhoⅠ+NheⅠ限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致。将该载体转染Hepa1-6细胞,RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高。结论成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体pLIVE-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β。
- 王焕芹梁淑娟刘艳艳李青春肖伟玲李若葆
- 关键词：肝癌IL-1Β促炎性细胞因子
- IL-1β反义RNA肝癌特异性表达载体对肝癌恶性生物学行为的影响
- 目的:构建小鼠IL-1β反义RNA表达载体,探讨靶向阻断IL-1β后对肝癌细胞浸润与生长行为的影响及分子机制。方法:RT-PCR分别扩增小鼠IL-1β1(264bp)和IL-1β2(284bp)基因片段,首先经
- 刘艳艳梁淑娟肖伟玲王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- pLIVE-mIL-1β在小鼠肝癌细胞中的稳定表达对
- 目的:利用可以在实验动物肝脏中达到高效、持续、特异性表达的载体系统pLIVE Vector,构建小鼠IL-1β真核表达载体pLIVE-mIL-1β,转染小鼠Hepa1-6肝癌细胞,观察目的基因的稳定表达及对细胞增殖和NK...
- 王焕芹梁淑娟肖伟玲刘艳艳李青春张素华
- 文献传递
- IL-1β对NK细胞干扰素应答效率的调控作用及机制研究
- 目的:探讨促炎性因子IL-1β在肿瘤局部微环境中的表达,对NK细胞杀伤活性及其干扰素应答效率的影响和主要的分子机制。方法:构建人和小鼠的IL-1β真核表达载体和反义表达载体.将其转染人和小鼠肝癌
- 梁淑娟肖伟玲刘艳艳王焕芹李青春张素华
- 文献传递
- 肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA对小鼠移植肝癌的抑制被引量：5
- 2009年
- 目的:构建肝癌细胞特异性小鼠IL-1β反义RNA表达载体,观察其对H22肝癌细胞小鼠移植瘤生长的影响及其相关机制。方法:构建由AFP最小启动子和CMV增强子嵌合序列调控的携IL-1β反义RNA表达载体pafpIRES2-antiIL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定进行鉴定。反义RNA表达载体转染小鼠H22肝癌细胞,分H22/mock组、H22/antiIL-1β1组、H22/antiIL-1β2三组,RT-PCR检测IL-1β的表达水平。以转染后的H22细胞皮下接种建立荷肝癌小鼠模型,观察移植瘤体积和重量,MTT法检测荷瘤小鼠脾脏中分离的NK细胞对H22细胞的杀伤活性。结果:经质粒PCR、限制性酶谱分析、序列测定证实成功构建能够在肝癌细胞中特异性表达IL-1β反义RNA的表达载体pafpIRES2-anti-IL-1β1和pafpIRES2-antiIL-1β2,转染H22细胞后细胞中IL-1β表达水平明显下降,以pafpIRES2-antiIL-1β2更为显著。成功建立荷肝癌小鼠模型,与H22/mock组小鼠相比,H22/antiIL-1β2组小鼠移植瘤体积较小,生长显著减慢(P<0.05)。H22/anti-IL-1β1、H22/antiIL-1β2组荷瘤小鼠的NK细胞对H22细胞的杀伤活性明显增强(P<0.05或P<0.01)。结论:成功构建的肝癌细胞特异性IL-1β反义RNA表达载体可有效抑制小鼠移植肝癌的生长,其机制与靶向阻断IL-1β表达、上调NK细胞的杀伤活性有关。
- 刘艳艳梁淑娟王焕芹张素华肖伟玲吴慧娜
- 关键词：肝癌白细胞介素1Β反义RNANK细胞
- 利用增强型绿色荧光蛋白基因作筛选标记克隆载体的构建及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的构建以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记的新型pUC18筛选载体。方法将EGFP基因克隆至pUC18载体的PstI/HindⅢ位点,构建筛选载体pUC18-EGFP,并验证pUC18-EGFP能否利用EG-FP的荧光特性筛选出含基因重组体的阳性克隆。结果经酶切和基因测序鉴定pUC18-EGFP载体构建正确;在外源基因插入该载体后,对LB氨苄平板上的绿色菌落进行酶切和基因测序鉴定,结果证明LB平板上的绿色菌落即为含有重组质粒的克隆。结论成功构建pUC18-EGFP筛选载体,利用EGFP的绿色荧光可筛选出阳性克隆。
- 唐金宝陈永梁淑娟王焕芹李青春
- 关键词：增强型绿色荧光蛋白大肠杆菌阳性克隆
- AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组载体的构建及其在肝癌H22细胞中的表达被引量：3
- 2009年
- 目的:构建小鼠甲胎蛋白(AFP)启动子调控的小鼠IL-1β(mIL-1β)重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,并检测其在真核细胞内的表达。方法:重叠延伸PCR技术(SOE-PCR)获得含小鼠AFP最小启动子及巨细胞病毒(CMV)增强子区(ECMV)的嵌合基因,将其克隆至pIRES2-EGFP载体,构建肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。RT-PCR扩增小鼠IL-1β基因,克隆至pafpIRES2-EGFP,进行酶谱分析及DNA序列测定。利用jetPEI法将其分别转染H22细胞和YAC-1细胞,倒置相差荧光显微镜下观察,RT-PCR分析mIL-1β表达水平的变化。结果:SOE-PCR方法获得长度为537bp的AFP和ECMV嵌合基因,克隆后经限制性酶切和DNA序列分析确认成功构建了小鼠肝癌细胞特异性表达载体pafpIRES2-EGFP。PCR扩增小鼠IL-1β基因后将其克隆至pafpIRES2-EGFP,获得AFP启动子调控的小鼠IL-1β重组真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,细胞转染分析证实,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性高效表达,RT-PCR检测可见转染细胞中mIL-1β水平明显升高。结论:成功构建真核表达载体pafpIRES2-EGFP-mIL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中特异性表达IL-1β。
- 李青春梁淑娟王雪净刘艳艳王焕芹张素华
- 关键词：IL-1ΒAFP启动子组织特异性肝癌
