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王蓓蓓: 作品数：16 被引量：29H指数：3; 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>; 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家杰出青年科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生更多>>

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雌、孕激素受体表达与子宫内膜样癌复发的相关性研究被引量：1: 2022年; 目的:探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)表达与子宫内膜样癌复发的相关性。方法:分析比较859例不同雌、孕激素状态的子宫内膜样癌患者基线特征以及预后信息。运用Kaplan-Meier曲线以及Cox比例风险模型探索影响子宫内膜样癌患者无进展生存期(progression-free survival,PFS)的危险因素。采用倾向评分匹配(propensity score matching,PSM),匹配因素包括年龄、手术病理分期以及组织学分级在内的高危因素,分析雌、孕激素受体表达对于子宫内膜样癌复发的影响。结果:患者不同雌、孕激素状态在不同年龄、组织学分级、手术病理分期以及子宫内膜样癌复发中的差异具有统计学意义(P<0.001)。PSM分析提示PR阴性是影响子宫内膜样癌复发的独立危险因素。Kaplan-Meier曲线提示,PR阴性患者的PFS更短。结论:激素受体阴性影响子宫内膜样癌预后,PR阴性是子宫内膜样癌患者复发的独立危险因素,它促进复发并大大缩短子宫内膜样癌患者的PFS。; 游丽鑫刘静波付裕王蓓蓓孙朝阳张青宋坤陈刚; 关键词：子宫内膜样癌雌激素受体孕激素受体复发

环孢素A延长腺病毒基因治疗载体体内存在时间的研究被引量：1: 2006年; 目的研究重组腺病毒载体在免疫抑制疗法应用中的安全性并探讨环孢素A对该载体在体内清除的影响。方法采取腹膜后注射纯化重组腺病毒建立动物模型,连续给予环孢素A 14 d,取不同时间点大鼠样本,HE染色观察各主要脏器病理反应,免疫组化方法检测肝、脾、肺、肾、肌肉及淋巴结腺病毒的表达情况。结果①HE染色切片,各脏器呈现一过性可逆性轻微炎性反应。②免疫组化检测,对照组中重组腺病毒逐渐减弱至阴性,实验组中重组腺病毒存在时相性明显延长(P<0.05)。③腺病毒分布呈现肝脾肺高表达而其它组织表达相对较低。结论重组腺病毒作为基因治疗载体在免疫抑制疗法应用中具有一定的安全性,环孢素A能够部分抑制实验动物体内的免疫反应从而延长重组腺病毒在体内存在的时间。; 夏曦王蓓蓓陈刚吴鹏罗丹枫李辅军郉辉王金韬卢运萍周剑锋马丁; 关键词：环孢素A 腺病毒基因治疗载体免疫抑制疗法

端粒酶逆转录酶在脐静脉内皮细胞耐受曲古抑菌素A诱导凋亡中的作用: 2007年; 目的观察曲古抑菌素A（TSA）对脐静脉内皮细胞及官颈癌细胞凋亡、端粒酶逆转录酶（hTERT）表达的影响,并探讨hTERT在脐静脉内皮细胞耐受TSA中的作用。方法磺酰罗丹明B （RSB）法检测药物动力学特征;流式细胞仪检测周期改变和凋亡;RT-PCR检测hTERT和p21^Waf1基因表达变化;免疫荧光结合流式细胞术检测hTERT蛋白表达变化;转染hTERT质粒后,PCR-TRAP- ELISA法检测转染细胞端粒酶活性;AnnexinV／PI检测转染细胞在TSA作用下的早期凋亡。结果在大剂量TSA作用脐静脉内皮细胞后,增殖抑制、周期阻滞,但凋亡并不显著;HeLa细胞在相同剂量的TSA作用下凋亡明显。脐静脉内皮细胞经TSA诱导后,hTERT表达上调,p21^Waf1则无明显变化;而HeLa细胞p21^Waf1表达上升,hTERT表达下降。转染显性负突变hTERT的脐静脉内皮细胞,其端粒酶活性显著低于对照组。TSA作用转染不同质粒的脐静脉内皮细胞的凋亡率与对照组差异有统计学意义。结论脐静脉内皮细胞可以耐受大剂量TSA诱导的凋亡,hTERT表达上调可能是脐静脉内皮细胞耐受TSA诱导凋亡的重要机制之一。; 吴鹏奚玲陈刚王蓓蓓罗丹枫卢运萍周剑锋马丁; 关键词：曲古抑菌素A 凋亡端粒酶逆转录酶 P21^WAF1

丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡反义cDNA文库的构建和初步鉴定被引量：1: 2006年; 目的构建丁酸钠诱导MCF-7细胞凋亡过程的反义cDNA文库，以分离丁酸钠抗肿瘤效应基因。方法收集经2．5mmol／L丁酸钠处理0、12、18、24、36、48、72h的人乳腺癌MCF-7细胞，提取poly（A）＋RNA。逆转录合成eDNA第一链和第二链，双链cDNA修平末端后连上EeoRⅠ／HindⅢ接头。分别用EcoR Ⅰ／Hind Ⅲ酶切消化后，反向连上载体pcDNA 3．1，连接产物转化大肠杆菌得一反义cDNA文库，随机挑取40个克隆子进行酶切鉴定。结果构建的反义cDNA文库含1×10^6重组子，重组效率为90％，插入子平均长度为1．5kb。结论构建的文库容量较大，质量较高，为进一步分离丁酸钠抗肿瘤效应基因奠定了基础。; 奚玲陈刚吴鹏王蓓蓓周剑锋马丁; 关键词：脱噬作用 CDNA文库丁酸钠

乳腺癌相关成纤维细胞的分离培养及鉴定: 2011年; 目的:分离培养和鉴定乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,并初步探讨两者生物学性状的差异。方法:用胶原酶消化法获得原代乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,通过显微镜观察细胞形态,免疫荧光观测上皮细胞和成纤维细胞标记,MTT及Western检测两者之间生物学性状差异。结果:分离得到乳腺癌相关成纤维细胞及其与之配对的正常乳腺成纤维细胞,两者均高表达Vimentin低表达cytokeratin,且两者在形态及生物学性状有一定差异。结论:与配对成纤维细胞相比,乳腺癌相关成纤维细胞高表达α-SMA,且增殖能力增强。; 陈平波墨青青王蓓蓓翁丹卉吴鹏陈刚; 关键词：乳腺肿瘤成纤维细胞

H2B-RFP融合蛋白在观测肿瘤活细胞有丝分裂中的应用被引量：1: 2011年; 目的:肿瘤细胞染色体分裂异常是导致肿瘤基因组不稳定的根本原因,这种不稳定性促进了肿瘤的进展和恶化。本文旨在探讨H2B-RFP融合蛋白能够更好地观测肿瘤活细胞有丝分裂过程。方法:将携带H2B-RFP融合基因的质粒瞬时转染人宫颈癌细胞系Hela并利用抗性药物筛选得到阳性细胞克隆,利用激光共聚焦显微镜活细胞培养系统记录稳定筛选Hela细胞的细胞周期。结果:得到稳定表达H2B-RFP的Hela细胞且其与亲本Hela细胞相比对细胞周期的运行没有影响,并且可以展示Hela细胞有丝分裂的进程。结论:H2B-RFP融合蛋白可以非常敏感地显示肿瘤细胞的染色体并跟踪活体状态下肿瘤细胞有丝分裂过程。; 陈平波墨青青王蓓蓓翁丹卉吴鹏陈刚; 关键词：红色荧光蛋白有丝分裂

HDAC抑制剂TSA增强卵巢癌细胞株A2780对腺病毒基因转染效率的体外研究被引量：9: 2005年; 背景与目的:腺病毒感染依赖于靶细胞表面柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)的表达,肿瘤细胞CAR表达的缺失和下调是造成腺病毒为载体基因治疗效果不佳的根本原因。本研究通过观察组氨酸去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂TrichostatinA(TSA)对卵巢癌细胞株A2780CAR表达水平的影响,探讨HDAC抑制剂在腺病毒载体基因治疗中应用的可能性。方法:分别在TSA作用A2780细胞前后检测CARmRNA和蛋白水平的表达,同时采用流式细胞术测定病毒转染效率,MTT实验评价腺病毒携带的胸苷激酶(ADV/TK)的体外抗瘤效应。结果:TSA处理后,A2780细胞内CARmRNA和蛋白表达明显增高。通过流式细胞仪分析GFP/ADV转染后GFP的表达发现,未处理组细胞转染率为(1.24±0.14)%;5nmol/L和100nmol/LTSA处理48h后,细胞的转染效率分别为(7.58±0.32)%和(7.94±0.28)%。MTT结果表明,ADV/TK介导的体外杀伤作用在5nmol/L和100nmol/LTSA处理组较未处理组增强了4～10倍。结论:TSA可以增强针对卵巢癌细胞的腺病毒基因转染效率,为增强卵巢癌基因治疗效果提供可能的方法。; 陈刚王蓓蓓李辅军刘德艳周剑锋卢运萍马丁; 关键词：TRICHOSTATIN 体外实验

柯萨奇-腺病毒受体在宫颈癌组织中的表达及意义被引量：1: 2011年; 目的:研究柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在宫颈癌组织中的表达及意义,探讨其在宫颈癌形成和演进过程中的作用。方法:采用免疫组织化学方法检测10例正常宫颈组织、72例宫颈原位癌以及浸润癌组织中CAR表达水平,分析评价其临床意义,预测CAR表达与宫颈癌发生发展的关系。结果:与正常宫颈组织相比,宫颈癌组织普遍存在CAR表达下调(P<0.001),CAR的表达与宫颈癌的临床分期、组织学分级和淋巴结转移无关(P>0.05);CAR的表达在宫颈癌组织病理类型中的差异有统计学意义,即宫颈腺癌组织中CAR表达明显高于鳞癌(P<0.05)。结论:在绝大多数宫颈癌组织中存在CAR表达下调;CAR表达变化与宫颈癌灶的组织类型相关,可以作为宫颈癌发生、发展及临床转移的重要生物学指标,其具体作用机制值得进一步研究。; 范良生王鸿雁王蓓蓓李飞何泓陈刚; 关键词：宫颈癌柯萨奇-腺病毒受体免疫组织化学

CAR抑制卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的研究被引量：3: 2005年; 背景与目的:柯萨奇-腺病毒受体(coxsackieandadenovirusreceptor,CAR)最早作为2,5型腺病毒的受体而被人们发现和认识,近年的研究发现它还是粘附分子家族的一员,并参与肿瘤恶性表型改变。本研究通过转染真核表达载体,探讨其对卵巢癌细胞株SKOV3侵袭转移表型的影响。方法:利用Westernblot和RT-PCR检测4株卵巢癌细胞CAR的表达;脂质体介导转染含有全长CAR基因的真核表达质粒至SKOV3细胞,经G418筛选出稳定表达的阳性细胞克隆;体外粘附实验及软琼脂克隆形成实验验证CAR对SKOV3侵袭转移表型的影响。结果:4株卵巢癌细胞中,CAR表达水平不同程度下调,其中SKOV3细胞CAR表达缺失。转染后,SKOV3细胞CARmRNA和蛋白质水平表达均明显增高;细胞间粘附力明显增强;软琼脂克隆实验显示转染细胞每孔克隆形成数(25.3±8.9)明显低于未转染组(88.8±14.0)和转染空质粒组(82.5±19.4)。结论:外源性CAR基因的导入可以增强卵巢癌细胞SKOV3间的粘附性,从而抑制肿瘤细胞的侵袭转移表型。; 王蓓蓓陈刚李辅军周剑锋卢运萍马丁; 关键词：SKOV3细胞株柯萨奇-腺病毒受体

曲古霉素A诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡反义cDNA文库的构建和效应基因的初步筛选被引量：2: 2009年; 目的构建曲占霉素A诱导人乳腺癌细胞凋亡反义cDNA文库，以筛选曲古霉素A抗肿瘤的效应基因。方法收集经曲古霉素A处理不同时间点的人乳腺癌细胞MCF-7，提取poly（A）^＋RNA，将逆转录合成的cDNA反向插入载体PCEP4中以构建反义cDNA文库。文库DNA随机转入人宫颈癌细胞HeLa中，以转染PCEP4空载体细胞为对照组，用200nmol／L曲古霉素A和200μg／ml潮霉素同时筛选，至对照组细胞全部死亡，文库组仍有存活细胞时停止曲古霉素A筛选。存活克隆扩增后提取Hirt DNA并转化感受态细胞，获得的转化克隆扩增后进行酶切鉴定并测序，得到多个EST片段，经生物信息学分析后选择感兴趣的EST片段进行初步功能验证。结果构建的反义cDNA文库含有2×10^6重组子，重组效率〉90％；经DNA测序和生物信息学分析提示第27号存活克隆是锌转运蛋白LIV1，该克隆在功能验证时表现出对曲古霉素A非常显著的抵抗效应。结论构建的反cDNA文库容量较大，质量较高；基因LIV1可能是曲古霉素A抗肿瘤的效应基因之一。; 马晓黎王蓓蓓吴鹏卢运萍周剑锋马丁; 关键词：乳腺肿瘤反义核酸技术 CDNA文库曲古霉素A

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