王迎春
- 作品数：33 被引量：73H指数：5
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 抗vWF与GPIb-IX结合部位的噬菌体呈现型单链抗体制备及功能研究
- 2005年
- 目的:为了研制新型特异性抗血栓制剂。方法:利用噬菌体展示文库技术筛选与vWF- A1区有高亲合力单链抗体(ScFv) ;基因重组的方法构建高效表达载体pET 2 0b(+) ScFv ,在大肠杆菌中诱导表达;夹心ELISA方法鉴定此单抗的抗原结合活性;瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集试验(RIPA)测定ScFv对血小板聚集的抑制作用。结果:噬菌体展示技术筛选的ScFv在大肠杆菌中成功地诱导表达,表达的ScFv占菌体总蛋白的4 1% ,以包涵体形式存在;经纯化复性的ScFv可以与vWF、rvWF- A1、rvWF- A1 A3结合,但不与rvWF A3、BSA反应;ScFv具有抑制RIPA功能,抑制率为73. 7%。结论:在大肠杆菌中高效表达的噬菌体展示技术筛选的抗vWF A1区ScFv可特异性与vWF- A1区结合,而抑制瑞斯脱霉素诱导的血小板聚集,显示出很好的应用前景,为研制新型抗栓药物奠定基础。
- 祝怀平王迎春季顺东江淼白霞阮长耿
- 关键词：VWF
- 血小板及其它遗传性出血性疾病分子生物学与临床研究
- 阮长耿王兆钺王迎春顾建明白霞李振宇赵小娟张子彦张敬宇
- 巨血小板综合征：在国内首次对该病进行了实验与基因研究，在国际上报道了GPIX穿膜区丙氨酸139→苏氨酸的一种新的基因突变，并提出GPIb与GPIX是通过穿膜区连接为复合物的假说。纤溶酶原活化剂抑制物(PAI-1)缺乏是一...
- 关键词：
- 关键词：遗传性出血性疾病血小板纤维蛋白溶解
- 抗vWF与GPIb-IX结合部位的单链抗体制备及功能研究
- 血栓性疾病严重威胁着人类健康的常见疾病之一,血栓形成是其主要成因。血小板的粘附、聚集和活化是血栓形成的早期环节,在此过程中von Willebrand因子(vWF)发挥着重要作用,它通过A1、A3区分别与血小板膜糖蛋白(...
- 祝怀平王迎春季顺东江淼白霞阮长耿
- 文献传递
- 人vW因子A3区基因在大肠杆菌中表达及其生物学活性的研究被引量：3
- 2004年
- 血管性血友病因子 (vWF)是介导血小板粘附到细胞外基质的桥梁 ,在血栓形成过程中发挥重要作用 ,可通过阻断vWF与细胞外基质的结合而阻断血小板的粘附。本研究目的是研究一种抗血栓形成的新疗法。应用RT PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vWFA3区基因并在大肠杆菌中表达 ;应用胶原结合试验及竞争抑制实验分析rvWF A3蛋白的生物学活性。结果表明 :表达的重组蛋白量占菌体总蛋白的 4 6 % ,包涵体经过变性、纯化和复性 ,获得重组蛋白 (rvWF A3) ;rvWF A3具有很好的胶原结合活性 ,且能竞争性抑制野生型vWF与胶原结合。结论 :大肠杆菌中高效表达的rvWF A3具有良好的生物学功能 ,可作为阻断剂用于干预vWF介导的血小板黏附过程 。
- 祝怀平王迎春季顺东白霞江淼阮长耿
- 关键词：VWF胶原
- 血小板膜糖蛋白和血管性血友病因子基因多态性及其与血栓性疾病关系的研究
- 阮长耿施菊妹戴克胜高维强王迎春白霞
- 1999年1月1日～2001年12月31日，由国家自然科学基金资助，进行了研究。一、血小板膜糖蛋白(GP)基因多态及其与血栓病的关系：用聚合酶链反应-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)和脱氧核糖核酸(DNA)序列分析...
- 关键词：
- 关键词：血小板膜糖蛋白血友病基因多态性血栓形成
- 网织血小板检测及影响因素的探讨
- 2004年
- 目的 :建立流式细胞术检测网织血小板的方法 ,探讨网织血小板的影响因素。方法 :(1)用流式细胞术双标法 ,Cellquest软件 ,CD4 1a/ SSC设门 ,检测健康人 2 6名 ,特发性血小板减少性紫癜 (ITP) 16例 ,重型再生障碍性贫血(SAA) 6例 ,慢性肝病 7例 ,骨髓增生异常综合征 (MDS) 10例的外周血网织血小板 ,并对部分病例用 RNAase处理实验进行验证。 (2 )以不同噻唑橙 (TO)浓度、TO孵育时间及实验温度条件对 10例正常人外周血网织血小板进行检测 ,探讨这些因素对实验结果的影响。结果 :(1) TO浓度 ,TO的孵育时间及温度等超过一定范围对结果均有影响。 (2 )确定了把TO的量控制在 2 0 0 μl、孵育温度在 2 0℃左右、时间为 30 min。结论 :要严格控制影响因素 。
- 陆伟丁润生王迎春
- 关键词：网织血小板流式细胞术
- 人vWF-A1多肽的融合表达及生物学活性鉴定
- 2003年
- 血管性血友病因子 (vWF)通过与血小板膜糖蛋白结合介导血小板的粘附和聚集 ,在血栓形成过程中发挥重要作用 .通过阻断血小板与vWF的结合可抑制血栓形成 .应用RT PCR方法从人脐带内皮细胞中克隆vWF A1区基因并在原核细胞内进行表达 ,经过纯化、复性 ,获得重组蛋白(rvWF A1) .用流式细胞术检测rvWF A1与转染了糖蛋白Ib(GPⅠb)的CHO K1细胞和血小板GPⅠb的结合能力 ,血小板聚集仪测定rvWF A1对瑞斯托霉素 (ristocetin)诱导的血小板聚集作用的影响 .重组表达载体pET 2 0b(+ ) vWF A1在大肠杆菌BL2 1(DE3)plus中得到有效表达 ,表达的重组蛋白量占菌体总蛋白 30 % .次氮基三乙酸镍琼脂糖 (Ni NTAagarose)柱纯化后 ,其纯度为 95 % .经复性的rvWF A1蛋白具有良好的生物学活性 ,它可与转染了GPⅠb的CHO K1细胞和血小板结合 ,阳性率分别为 96 90 %与 78 6 0 % ,且可以抑制ristocetin诱导的血小板聚集 ,其抑制效应呈剂量依赖性 .IC50 的rvWF A1浓度为 0 5 6 μmol L ,当浓度为 1 4 μmol L时抑制率最高达 84 70 % .结果表明 ,在原核细胞中表达人rvWF A1区蛋白可抑制血浆中野生型vWF与血小板的结合 。
- 祝怀平王迎春赵小娟季顺东白霞阮长耿
- 关键词：生物学活性血管性血友病因子
- 人vW因子A3区基因的克隆及其序列分析被引量：1
- 2003年
- 目的 克隆人血管性血友病因子（von Willeberand Factor,vWF)A3区基因并进行序列分析。方法 应用Trizol一步法从原代培养的人脐静脉内皮细胞中抽提总RNA，应用RT-PCR扩增vWFA3区基因。并与pUCmT载体连接构建成重组克隆载体pUCmT-vWF-A3，全自动测序仪测量目的基因DNA序列。结果 RT-PCR从内皮细胞中扩增出约600bp的DNA片段，酶切鉴定插入目的基因片段的大小与理论计算一致。重组克隆载体pUCmT-vWF-A3经测序其结果完全正确。结论 本法可成功地克隆入vWFA3区基因片段，为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
- 祝怀平王迎春等
- 关键词：VWF血栓血小板
- von Willebrand因子胶原结合试验的建立及其临床应用被引量：7
- 2003年
- 目的 建立了一种新的检测vonWillebrand因子 (vWF)功能的方法。 方法 用ELISA法检测血浆中vWF与胶原的结合能力。 结果 该法敏感性为 0 0 0 1U/ml,批内和批间变异为3 34%和 6 70 %。 2 0名正常人血浆的胶原结合试验 (vWF :CBA)值为 (90 2 4± 2 2 87) %。 5 4例初步诊断为血管性血友病 (vWD)患者vWF :CBA值为 (31 94± 2 7 36 ) % ,10例 1型vWD为 (35 2 2± 2 0 0 2 ) % ,10例 2A型vWD为 (8 74± 6 38) % ,6例 3型vWD为 (0 70± 0 5 8) % ,以上各组值均低于正常值 (P <0 0 1) ;2A型vWD患者vWF :CBA值小于 1型vWD(P <0 0 1)。 结论 vWF胶原结合试验是一项简单易行、准确反映vWF功能的实验 ,为研究血管性血友病 (vWD)和血栓性疾病提供了一种新的方法 ,可向临床推广。
- 施文瑜王迎春白霞陆德炎阮长耿
- 关键词：VONWILLEBRAND因子血管性血友病
- 缺血性脑血管病患者血浆vWF与胶原结合功能的研究
- 目的:探讨vWF功能的改变与ICVD发病之间的关系。方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA) 法测定了36例脑梗死(C1)急性期患者和15例短暂脑缺血发作(TIA)患者血浆中vWF的含量和功能(vWF:CBA),分析了常...
- 施文瑜王迎春黄石兵
- 文献传递
