肖谷田
- 作品数：8 被引量：32H指数：3
- 供职机构：复旦大学生命科学学院遗传工程国家重点实验室更多>>
- 发文基金：上海市青年科技启明星计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 基因多位点定点突变法机理的探讨被引量：1
- 1997年
- 用多个化学合成的寡聚脱氧核苷酸作为诱变引物,对枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E或APr E)基因进行体外突变,借此系统地探讨了基因多位点定点突变中引物的类型和数量、引物的分布、引物间的相互位置、引物与模板DNA间摩尔数比等因素对突变效果的影响。
- 肖谷田谢毅王顺德林卿叶韫辉吴小舟
- 关键词：定点突变蛋白质基因工程突变
- 恶性疟原虫(海南株)cDNA表达文库的构建及初步鉴定被引量：16
- 1997年
- 目的 :构建恶性疟原虫 c DNA表达文库。方法 :采用“一步法”提取红内期恶性疟原虫12 2 4 μg RNA,经 Oligo( d T)纤维素柱纯化得到 35.84 μg poly ( A) +m RNA。取 10 μg m RNA反转录得到 1.75μg平端双链 c DNA,与含 Eco RI,Not I,Sal I酶切位点的衔接头连接后 ,经分级分离柱纯化回收到 2 0 0 ng大小主要在 50 0 bp- 7kb左右的 c DNA片段。取 50 ng c DNA与λgt11噬菌体臂连接后体外包装 ,完成建库。并采用 PCR方法初步鉴定该文库。结果 :已构建一个含 10 6个重组子的 c DNA表达文库。结论 :文库容量及插入 c DNA片段的大小适合于进一步研究。
- 王燕妮肖谷田毕惠祥李明金丽娟李英杰谢毅
- 关键词：恶性疟原虫CDNA表达文库
- 猪ZP3α和ZP3βcDNA 5′端非编码顺序的甄别
- 1996年
- 透明带(Zona Pellucida,ZP)是哺乳动物卵子外一层丝状体酸性糖蛋白,在精卵识别、结合、穿透和阻止多精入卵等一系列受精过程中起着十分重要的作用.现已证实猪ZP包含ZP1、ZP3α(55kDa)和ZP3β(55kDa)等糖蛋白组分,并克隆了编码这些蛋白质的基因.猪ZP3α和ZP3β蛋白质的多克隆抗体都能在体外阻断人精卵结合,所以作为免疫避孕的潜在免疫原,近年来它们一直受到相关科研人员的普遍关注.由于用常规生化方法提取猪ZP3α和ZP3β蛋白质步骤多得率低,而且产物纯度难以完全排除相互之间的交叉等缺陷,所以在已获得这些ZP基因克隆的今天,用遗传工程方法拓展猪ZP蛋白质组分的新来源极具吸引力.
- 徐万祥谢毅肖谷田
- 关键词：透明带DNA
- 免疫筛选恶性疟原虫cDNA克隆被引量：8
- 1997年
- 目的 :获取恶性疟原虫 (海南株 )抗原的 c DNA克隆并进行初步鉴定。方法 :采用 dot-EL ISA,以兔免疫血清对恶性疟原虫 c DNA表达文库约 80万个重组噬斑进行筛选 ,并用 2 0株单克隆抗体和恶性疟患者血清对强阳性克隆进行再筛选。 PCR初步鉴定 17个强阳性克隆。结果 :兔免疫血清确定了 17个强阳性克隆 ,患者血清检测到 11个阳性克隆 (含 8个强阳性 ) ,11株单抗与 9个 c DNA克隆呈阳性反应。 17个强阳性克隆均能扩增出大小在 30 0 bp- 2 .5kb左右的条带。结论 :已筛选到能与抗恶性疟原虫兔血清、单克隆抗体及患者血清产生特异性免疫反应的 c DNA克隆。
- 王燕妮谢毅肖谷田李明毕惠祥巢穗王萍李英杰
- 关键词：恶性疟原虫CDNA克隆抗体
- 人18周胎儿脑cDNA文库的构建及鉴定被引量：2
- 1997年
- 许多脑基因的特异性表达对人脑的发育、分化有着重要的作用．为了研究这些基因的结构和功能，构建了一个人18周胎儿脑cDNA文库．抽提总mRNA后，经过一系列的酶促反应合成cDNA．分级分离柱除去小片段后克隆到λgt10载体中．转染宿主菌C600hfl后文库包装效率为4．6×106pfu／μg，cDNA平均插入片段大于1．2kbp．根据已知序列设计引物，从cDNA文库中扩增出神经生长因子（NGF）的全长编码基因．
- 林卿杨岐生殷明金丽娟肖谷田叶蕴辉刘建平王玮谢毅
- 关键词：胎儿胚胎学基因人类遗传学
- 猪卵透明带—3βcDNA在大肠杆菌中的表达
- 1997年
- 猪卵透明带（PZP）是包绕在卵母细胞外的由ZPI、ZP3a和ZP35组成的一层丝状体酸性糖蛋白。其中的猪ZP39蛋白（分子量55kD，完全去糖基后为32kD）jfl当于小鼠精子受体ZP3和人ZP3蛋白，PZP35在受精过程中起何作用？特别是其抗体与猪精子受体PZP3a抗体一样也能在体外试验中阻断人精卵受精，所以长期以来PZP印也一直是生殖生物学和免疫避孕科研人员关注的研究对象。过去分离该蛋白组分是通过繁琐的生化提纯技术，随着分子生物学技术的广泛应用，以相对简便价廉的遗传工程方法大量制备无卵巢因子混杂的ZP目的蛋白已是势在必行。本文首次报道了PZP35基因在大肠杆菌中的表达，为以后制备相应的单克隆抗体，鉴别抗原决定簇进而研究ZP耿避孕疫苗打下了基础。一、目的基因的DNA测序为选择表达载体构建符合pZP30CDNA阅读框的融合基因，先用T。引物对pZ57质粒中PZP30基因的5’端重新作了DNA测序分析，结果发现已报道的该基因5’端非编码区漏读了二个碱基（T、G）。二、表达载体PWR450-2／ZP那的构建质粒PWR450-2带有裁短的LacZ’基因（编码6一半乳糖背酶N端461个氨基酸残基），外源基因插入LacZ’基因下游多聚克隆部位形成融合基因，以异丙基一p-Dwt代半乳糖着（IPTG）诱导上游的强启动子比c即产生高水平表达。
- 徐万祥林渊王健谢毅肖谷田顾少华
- 关键词：猪卵透明带CDNA大肠杆菌
- 寡聚脱氧核苷酸介导的体外多点定位突变——五点定位突变法改造枯草杆菌蛋白酶E基因被引量：6
- 1997年
- 用５个化学合成的寡聚脱氧核苷酸片段作为诱变引物，对枯草杆菌蛋白酶Ｅ基因（ＡｐｒＥ）同时进行体外诱变．转化子经打点杂交及温度梯度洗膜法筛选出了若干在５个预定位点同时突变了的突变子，其突变效率达到５０％．同时还得到了１个四点突变的突变子．突变子经ＤＮＡ测序分析。
- 谢毅肖谷田王顺德王顺德张婕徐万祥吴小舟
- 关键词：定点突变枯草杆菌蛋白酶寡聚脱氧核苷酸诱变
- 枯草杆菌蛋白酶E基因多位点定点突变库的构建及其筛选被引量：1
- 1997年
- 利用化学合成的15个寡聚核苷酸片段作为诱变引物,同时对枯草杆菌蛋白酶E(Subtilisin E或Apr E)基因进行体外突变,获得了合全部突变位点各种随机组合突变的突变库,通过点杂交法和DNA序列分析肯定了该突变库的可靠性.从突变库中选择一单点突变(Met222Ala)和3点突变(Asn76Asp/Asn109Ser/Ile205Cys)的基因进行克隆、表达和产物的酶学性质研究,发现其抗氧化性和热稳定性分别比野生型的有显著提高,与文献报道的一致.表明了该突变库在枯草杆菌蛋白酶工程研究中的应用价值.
- 谢毅肖谷田张婕孙筱清吴小舟王启松陈小央
- 关键词：蛋白质工程枯草杆菌
