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piggyBac转座系统的改造及其介导的牛核移植转基因供体细胞生产: 转座子(transposon)是一类能够在宿主基因组中跳跃移动的遗传因子，哺乳动物中具有活性的转座子很少。piggyBac (PB)转座子是一种能够在哺乳动物中高效转座的基因转移和功能基因筛选工具，有报道证实PB转座子不...; 胡广东; 关键词：人溶菌酶基因人乳铁蛋白基因体细胞核移植 CRE/LOXP系统; 文献传递

一种通用型PiggyBac转座子转基因载体及其制备方法: 本发明公开了一种通用型PiggyBac转座子转基因载体及其制备方法，包括供体载体和辅助载体；所述的供体载体包括PiggyBac转座子5’重复末端序列5’TR和3’重复末端序列3’TR，在5’TR和3’TR之间设有两个绝缘...; 胡广东张涌王静余源高元鹏; 文献传递

一种通用型piggyBac转座子诱导细胞永生化载体的构建及其基本功能验证被引量：5: 2014年; 为了构建一种高效、通用的细胞永生化载体pTP-hTERT,通过人工合成、PCR、酶切连接等方法,对传统piggyBac(PB)转座子系统进行改造。改造后的载体含有转座必需元件、PB转座酶(PBase)表达框、共表达筛选元件和人端粒逆转录酶(hTERT)基因表达框。其中筛选元件中绿色荧光蛋白(EGFP)基因和嘌呤霉素抗性(Puror)基因以猪捷申病毒2A自我剪切肽相连,以实现共表达。为验证载体元件功能,使用该载体转染HEK 293细胞,并对筛选出的阳性细胞进行RT-PCR、Western blotting(WB)、热不对称PCR(Tail-PCR)和细胞克隆亚甲蓝染色与统计分析。载体测序鉴定与细胞培养结果表明,通用型永生化载体pTP-hTERT构建成功,转染HEK293细胞后能筛选出抗嘌呤霉素细胞单克隆;WB结果显示P2A可高效切割EGFP和Puror融合蛋白,证明筛选标记基因功能正常;Tail-PCR结果表明该载体以转座整合插入宿主基因组;亚甲蓝染色统计结果显示由pTP-hTERT引发的细胞阳性克隆数与对照组相比显著提高(P<0.01)。PB转座子永生化载体pTP-hTERT的构建为永生化细胞系的建立提供了工具,同时也为其他真核载体的构建和改造提供了参考。; 黄惠胡广东康健卿素珠张涌; 关键词：HTERT

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胡广东