许锡振
- 作品数：3 被引量：15H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院第一附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用SNPs技术确定C．elegans形成异常习惯化的基因位置
- 2009年
- 目的应用SNPs技术确定影响C．elegans的习惯化形成异常基因hab-1（cn308）的准确基因位置。方法（1）在C．elegans基因库里，检索连锁于第一常染色体上CB4856的Y71A12B的SNP标记（22．330MU）和C37A5的SNP标记（23．410MU），其基因型设为YC／YC，hab-1（cn308）的基因型为h／h。（2）把虫子进行同步化处理，同一虫子的大小。（3）野生型的雄性CB4856与雌雄同体cn308进行三因子杂交。对F1进行Tap测试，同时记录虫子的反应距离，统计处理，筛选习惯化和维持正常的杂合子（YC／h），传代至F2。（4）对F2代再进行Tap测试，筛选习惯化形成缓慢、习惯化维持时间短的虫子，进行PCR，用限制性内切酶消化，2％琼脂糖凝胶电泳分离目的片段。结果（1）第1次Tap测试结束后野生型的习惯化形成明显快于cn308[对Tap刺激形成习惯化均数（移动距离均数，单位：mm），野生型为（0．414±0．049）mm，cn308为（0．777±0．062）mm，t=10．08，P〈0．01]，1h后习惯化维持测试中，发现野生型的习惯化维持时间明显长于cn308（习惯化维持均数，野生型为（0．307±0．041）mm，cn308为（0．815±0．054）mm，t=11．54，P〈0．001）。（2）分析SNPs片段，统计Y71A12B的SNP标记与hab-1、C37A5的SNP标记与hab-1之间的基因重组数，观察HnonC的表现型，即Ch／h：20，Yh／h：6，测算重组比例可知hab-1离Y71A12B的SNP标记距离是0．831MU，hab-1离C37A5的SNP标记距离是0．249MU，所以确定hab-1位于Y71A12B的SNP标记和C37A5的SNP标记之间。结论影响C．elegans对无伤害性Tap重复刺激形成异常习惯化的hab-1基因位置是23．161MU。
- 许锡振张桂芳赵彦濮瀑乐卫东
- 关键词：习惯化SNPS
- C．elegans的学习记忆异常基因及其功能的研究被引量：1
- 2009年
- 目的探索学习记忆异常基因hab—1（cn308）的功能。方法1．在hab-1领域有Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8等三个YAC克隆。在基因库里检索Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的cDNA序列，用DNASIS—Mac v3．6软件处理并设计引物，进行PCR。把PCR产物插入pMD^TM18-TVector载体，并培养提取Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的目的DNA，纯化DNA。2．进行rescue实验：把三种YAC克隆（clone）Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8的DNA分别与GFP蛋白连接配制融合蛋白。应用OLYMPUS Axiovert S100共聚焦倒置显微镜操作系统，在心大小的C．elegans生殖腺（gonad）内分别把三种GFP融合蛋白溶液显微注射，发育传代至F1。在F1代选择带有GFP荧光的C．elegans，观察基因的表达部位，并进行Tap测试，通过观察在哪个YAC克隆把hab—1（cn308）的表现型恢复为野生型来确定hab-1的等位基因。3．DNA测序和同源性检索：hah-1的等位基因确定以后对cn308进行DNA测序。根据cn308的测序结果与已知的等位基因DNA序列进行Homology search，分析cn308的基因结构，并进行BLSTP homologic search，和其他物种比较目的基因的功能来阐明hab—1的基因功能。结果对Y63D3A．6、Y63D3A．7和Y63D3A．8等三种基因表达率进行χ^2检验结果表示差异有显著性（χ^2=26．84，P〈0．05）。表明Y63D3A．6、Y63D3A．7、Y63D3A．8等三种基因虽然连锁于第一常染色体上邻近的位置，但在C．elegans的头部表达率无关联性，并有显著性差异.同时可见Y63D3A．7强表达于C．elegans的头部，Tap测试证明Y63D3A．7把hab-1的表现型恢复野生型。DNA测序结果表明hab-1（cn308）是GAG错义突变为GGG，即Glu→Gly的突变体。BLSTP homologic search结果表明Y63D3A．7是调节线粒体complexⅠ的活性，就是说明hab-1基因与线粒体complexⅠ的功能有关。结论Y63D3A．7是hab-1的等位基因，主要表达于中枢神经系统。C．elegans的学习�
- 许锡振吴利标罗信国赵彦濮瀑朱旭新
- 关键词：学习记忆
- 大鼠钙化血管尾加压素Ⅱ及其受体上调被引量：14
- 2010年
- 目的观察血管钙化大鼠主动脉和心肌尾加压素Ⅱ及其受体表达的变化。方法采用维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化模型,以Von Konsa染色检测血管钙化,以原子吸收法和磷酸苯二钠法测定血管钙含量和碱性磷酸酶活性,放射免疫法检测血浆、主动脉和心肌尾加压素Ⅱ含量,免疫组织化学法检测血管尾加压素Ⅱ的表达,RT-PCR法检测主动脉和心肌尾加压素受体mRNA水平。结果维生素D3和尼古丁能够诱导大鼠典型血管钙化形成。Von Kossa染色可见血管钙化大鼠主动脉有大量黑色颗粒沉淀,血管钙含量、碱性磷酸酶活性明显升高,主动脉尾加压素Ⅱ含量、主动脉和心肌尾加压素受体基因表达明显上调。精氨酸饮食能减轻血管钙化,血管钙含量、尾加压素Ⅱ水平及尾加压素受体mRNA表达与单纯钙化组相比轻度下降,但无统计学意义。蛋氨酸饮食能加重血管钙化,增加钙含量,上调尾加压素Ⅱ表达,降低碱性磷酸酶活性。各组之间血浆尾加压素Ⅱ水平差异无统计学意义。结论大鼠钙化血管尾加压素Ⅱ表达上调,提示尾加压素Ⅱ可能参与了血管钙化的发展过程。
- 张勇刚张旭升魏睿宏吴利标陈新胜李军许锡振
- 关键词：血管钙化
