贺子建
- 作品数：7 被引量：7H指数：2
- 供职机构：上海交通大学瑞金医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- NF2基因突变体真核表达载体的构建和表达被引量：1
- 2010年
- 目的构建NF2突变体真核表达载体，并观察其在人胚肾细胞HEK293中的表达。方法采用分子生物学方法构建NF2突变体，将突变体克隆入真核表达载体pEGFP—N1中，进行筛选和鉴定，然后在脂质体介导下，将重组载体转染至真核细胞HEK293中，应用Western blot法检测蛋白的表达。结果通过使用重叠延伸PCR法定位突变，从野生型NF2基因cDNA模板中扩增得到预期大小的NF2突变体条带，DNA测序证实NF2突变体序列的正确性。重组载体转染HEK293后能产生merlin蛋白。结论本研究成功构建重组载体pEGFP—N1-NF2突变体，其转染HEK293后，能有效表达于HEK293中。
- 林亦海卞留贯薛跃华孙青芳贺子建贺华赵卫国沈建康
- 关键词：基因增强型绿色荧光蛋白真核表达
- NF_2基因对细胞增殖和细胞周期的影响被引量：1
- 2008年
- 目的观察Ⅱ型神经纤维瘤(neurofibromatosisⅡ,NF2)基因对细胞增殖和细胞周期的影响。方法采用脂质体介导法将携带野生型NF2的真核表达载体导入大鼠神经鞘瘤RT4细胞,质粒转染成功后实验细胞分为pEGFP-N1组、pEGFP-NF2组和对照组(未转染质粒组),以Western blot分析目的基因的表达,并采用MTT法和流式细胞仪检测细胞增殖和细胞周期。结果pEGFP-NF2组细胞merlin蛋白出现明显高表达。pEGFP-NF2组细胞生长的抑制率高达37.7%,与对照组相比较,差异具有统计学意义(P<0.05);而pEGFP-N1组细胞生长的抑制率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。流式细胞仪检测显示NF2可以阻断细胞周期,使其处于G1-G0期。结论野生型NF2可抑制大鼠神经鞘瘤RT4细胞的增殖,阻断细胞周期,使其处于G1-G0期。
- 贺华彭彪卞留贯孙青芳沈建康林亦海贺子建
- 关键词：神经纤维瘤病2型基因肿瘤抑制细胞周期
- Merlin蛋白结构及与其他分子的相互作用被引量：1
- 2007年
- NF2基因是一个重要的肿瘤抑制因子,其表达产物Merlin是至今被发现的第一种具有肿瘤抑制作用的蛋白质,通过与其他蛋白质直接或间接的相互作用,调控细胞运动和增殖等细胞活动。
- 贺华刘志刚贺子建卞留贯孙青芳
- 关键词：MERLIN蛋白相互作用
- 野生型NF2基因质粒的构建及其在真核细胞中的表达
- 目的：II型多发神经纤维瘤病(NF2)基因是听神经瘤的肿瘤抑制基因，目前NF2基因编码的蛋白merlin的抑瘤作用机制仍不清楚。近年来研究提示肝细胞生长因子(HGF)调节的酪氨酸激酶底物(HRS)是merlin的效应蛋白...
- 贺子建
- 关键词：真核细胞听神经瘤蛋白表达
- 文献传递
- NF2基因及其蛋白merlin的生物学研究进展被引量：4
- 2006年
- NF2基因是一种瘤抑制基因,其失活可导致蛋白质的变性并可诱导肿瘤的发生。其编码的merlin蛋白与细胞的运动和增殖有着较密切的关系,磷酸化使merlin蛋白丧失了抑制肿瘤生长的能力。通过对NF2及merlin蛋白的研究,为研制抗肿瘤药物或干预的靶点提供其理论基础。
- 贺子建王晓强卞留贯孙青芳
- 关键词：NF2MERLIN蛋白磷酸化水平NF2基因
- 抑癌基因NF2突变子真核表达载体的构建与表达
- 2008年
- 目的:分别构建抑癌基因NF2的42位和47位点突变的2种真核表达载体。并在大鼠神经鞘瘤细胞RT4-D6P2T中诱导表达。方法:用定点突变法分别将pcDNA3.1-NF2第42位赖氨酸(Lys)突变为脯氨酸(Pro).第47位苯丙氨酸(Phe)突变为亮氨酸(Leu)构建2种NF2突变子(pcDNA3.1-NF2^(ΔLyn42Pro)和pcDNA3.1-NF2^(ΔPhe47Leu),将3种NF2质粒用脂质体法分别转染RT4细胞.RT—PCR和Western印迹法分析NF2基因及蛋白表达,MTT法检测转染后RT4细胞的增殖情况。结果:测序证实定点突变成功。构建的重组真核表达载体pcDNA3.1-NF2^(ΔLys42Pro)和pcDNA3.1-NF2^(ΔPhe47Leu)均能表达相应的蛋白和mRNA.这2种NF2突变体对RT4细胞抑制率明显低于野生型NF2组。差异有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建了2种能够在RT4中表达的单个点突变的NF2基因真核表达载体。
- 贺华彭彪卞留贯孙青芳沈建康贺子建林亦海
- 关键词：NF2点突变真核表达载体
- 野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因Ⅱ亚型真核表达载体的构建及其功能被引量：2
- 2007年
- 目的构建野生型Ⅱ型神经纤维瘤病基因(NF2)Ⅱ亚型的真核表达载体,观察其在人胚胎肾细胞293(HEK293)中的表达并检测其转染神经鞘瘤细胞(RT4)后的功能。方法以人胎脑cDNA文库中的NF2Ⅱ亚型基因为模板,应用聚合酶链反应技术扩增野生型NF2Ⅱ亚型基因,并定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1质粒中;经鉴定正确的重组质粒pEGFP-NF2Ⅱ亚型,用Lipofectamine 2000脂质体导入人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting法观察基因表达水平;随后转染大鼠神经鞘瘤细胞,利用水溶性四氮唑法观察野生型NF2Ⅱ亚型基因对大鼠神经鞘瘤细胞增殖的影响。结果经序列分析证实,克隆的NF2Ⅱ亚型基因与Genebank中的序列完全一致。DNA琼脂糖凝胶电泳检测显示,经双酶切后的质粒pEGFP cDNA片段大小约为4700bp;NF2Ⅱ亚型基因cDNA片段大小为1770bp,NF2Ⅱ亚型基因的真核表达载体可瞬时转染人胚胎肾细胞293,通过荧光显微镜和Western Blotting方法得到证实;水溶性四氮唑法检测显示,转染pEGFP-NF2Ⅱ亚型并表达NF2Ⅱ亚型编码蛋白的293细胞与对照组293细胞的增殖指数相同。结论所构建的野生型NF2Ⅱ亚型基因真核表达载体可在人胚胎肾细胞293中表达,且不具有抑制肿瘤细胞增殖的特性。
- 贺子建卞留贯贺华孙青芳赵卫国沈建康
- 关键词：基因神经纤维瘤病2型转染
