赵向绒
- 作品数：31 被引量：120H指数：6
- 供职机构：陕西省人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省中医药管理局科研基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程农业科学更多>>
- 三聚氰胺偶联抗原制备及其免疫原性分析被引量：1
- 2015年
- 探讨以2-氯-4,6-二胺-1,3,5-三嗪(CAAT)作为起始物,与6-氨基己酸(ACS)连接转化得到半抗原MelACS,再将其与牛血清白蛋白(BSA)偶联形成具有连接手臂的抗原BSA-ACS-Mel,用于单克隆抗体(m Ab)制备。经过液相色谱、Western blot及ELISA等抗原特性分析,证明半抗原Mel-ACS的转化效率达到了85.9%,且针对Mel特异性单抗获得率达到了42.9%,抗原BSA-ACS-Mel免疫原性较好,完全可以适用于三聚氰胺分子的特异性检测需要。这对其余小分子抗原的合成也起到一定的指导作用。
- 赵彭花张海祥李涛王鑫宋卫刘海静谢毅霍雪萍赵向绒梁导艳李元胡军
- 关键词：三聚氰胺抗原免疫原性
- 活血胶囊抑制H_(2)O_(2)诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞衰老的研究
- 2022年
- 目的研究活血胶囊对H_(2)O_(2)诱导的小鼠主动脉平滑肌细胞(mASMC)衰老的抑制作用及分子机制。方法①实验分为对照组、活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组、活血胶囊750μg/mL组,WST-1法检测各组细胞活力。②实验分为对照组、H_(2)O_(2)组、活血胶囊+H_(2)O_(2)组,采用SA-β-gal染色法观察细胞衰老情况,采用qRT-PCR法检测细胞衰老相关基因p21和衰老相关分泌因子细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-6(IL-6)及沉默信息调节蛋白1(SIRT1)mRNA表达量,ELISA法检测细胞培养上清中ICAM-1、IL-8、IL-6水平,流式细胞仪分析细胞周期变化。结果活血胶囊150μg/mL组、活血胶囊300μg/mL组细胞活力与对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05),活血胶囊750μg/mL组明显高于对照组(P<0.05)。SA-β-gal染色显示,H_(2)O_(2)组衰老细胞明显增多,活血胶囊+H_(2)O_(2)组衰老细胞明显较H_(2)O_(2)组少。H_(2)O_(2)组p21、ICAM-1、IL-8、IL-6 mRNA相对表达量均明显高于对照组(P均<0.05),且活血胶囊+H_(2)O_(2)组p21、ICAM-1、IL-6 mRNA相对表达量均明显低于H_(2)O_(2)组(P均<0.05)。H_(2)O_(2)5 h组SIRT1 mRNA相对表达量明显低于对照组(P<0.05),活血胶囊+H_(2)O_(2)组明显高于H_(2)O_(2)5 h组(P<0.05)。H_(2)O_(2)组细胞周期停滞在G1期,G1期细胞比例明显高于对照组(P<0.05),S期细胞比例明显低于对照组(P<0.05);活血胶囊+H_(2)O_(2)组G1期细胞比例明显低于H_(2)O_(2)组(P<0.05),S期细胞比例明显高于H_(2)O_(2)组(P<0.05)。结论活血胶囊可抑制H_(2)O_(2)诱导的mASMC衰老,其作用与促进细胞中SIRT1表达、抑制ICAM-1和IL-6表达有关。
- 霍雪萍曹情雯王海芳赵向绒王晶董静马运峰
- 关键词：活血胶囊小鼠细胞衰老
- 甲型流感病毒纯化及病毒生物学特征分析被引量：4
- 2016年
- 目的评价蔗糖密度梯度离心纯化甲型流感病毒的方法,并对纯化的病毒颗粒特征和免疫原性进行分析。方法接种鸡胚培养病毒,收获尿囊液,超速离心浓缩,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,用血凝试验、蛋白定量、透射电镜和SDS-PAGE鉴定病毒颗粒。取病毒纯化产物以0.03mg/只和0.005mg/只分组免疫小鼠,采集小鼠血清,利用血凝抑制试验测定血清血凝抑制滴度。结果成功利用蔗糖密度梯度离心法纯化出流感病毒,病毒原液经纯化后被分离成L、M、H三个病毒带,其中M病毒带的吸光度、蛋白浓度及血凝滴度最高,蛋白浓度可达1.2mg/mL,血凝滴度高达1×49。电镜观察显示,L区带为具有血凝活性的质膜和结构疏松的病毒组成,M区带病毒颗粒呈球形、丝状或棒状。同时,有大量空心病毒颗粒存在。H区带与M区带类似,但未发现空心病毒颗粒。纯化的病毒免疫小鼠后可产生具有较高血凝抑制活性的抗体。结论蔗糖密度梯度离心技术可用于流感病毒抗原的制备,且不影响病毒的免疫原性。因此,密度梯度离心法可为流感病毒的基础研究及疫苗开发提供技术支持。
- 刘杨赵向绒郭春艳胡军余鹏博
- 关键词：甲型流感病毒免疫原性
- H1N1型流感病毒小鼠杂交瘤单克隆抗体的制备和鉴定
- 2017年
- 目的纯化H1N1流感病毒作为抗原免疫小鼠制备单克隆抗体(mAb),并以mAb为工具分析病毒对宿主细胞的感染情况。方法鸡胚培养A/PR/8(H1N1),收获尿囊液,蔗糖密度梯度离心纯化病毒,透射电镜鉴定病毒颗粒,甲醛灭活病毒后免疫小鼠,评价抗原免疫效果,取鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合制备mAb。用ELISA、免疫荧光细胞化学染色、Western blot法、血凝抑制试验和微量中和试验对mAb特性进行鉴定。依据流式细胞术用血凝素mAb分析流感病毒感染MDCK细胞后血凝素蛋白在宿主细胞膜上展示特征和病毒感染对细胞凋亡的影响。利用血凝素mAb建立基于细胞的ELISA(Cell-based ELISA)并对病毒增殖和感染动态进行分析。结果纯化出的A/PR/8病毒在电镜下呈圆形、椭圆形和棒状,免疫小鼠血清中流感病毒IgG滴度动态增长,免疫6周后IgG滴度达106。免疫小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合制备出6株流感病毒mAb,其中PR8-10mAb血凝抑制活性和中和活性均最高,分别为1∶2048和1∶640。免疫荧光细胞化学染色和Western blot结果表明该mAb可与血凝素结合。流式细胞术显示PR8-10也可识别细胞膜上的血凝素,同时发现病毒感染细胞后会引起细胞凋亡。依据PR8-10可识别细胞膜上的血凝素原理建立的Cell-based ELISA可分析病毒增殖情况。结论纯化出完整病毒颗粒免疫小鼠可刺激产生抗病毒IgG,并制备出高亲和活性和中和活性的H1N1病毒mAb,该mAb可分析病毒感染特征以及病毒对细胞的影响。
- 刘杨赵向绒郭春艳李研王光华梁导艳余鹏博李元胡军
- 关键词：流感病毒单克隆抗体血凝素病毒感染
- His标签单克隆抗体的制备及交叉抗原的表位分析被引量：6
- 2016年
- 目的研究His标签对重组蛋白在疫苗、免疫和致病等方面的影响。方法制备His标签的单克隆抗体(m Ab),通过ELISA、Western blot法及免疫组织化学染色方法研究其生物学特性、免疫反应特性以及与人体组织的反应性。结果 His标签m Ab和抗原的结合与空间构型有关,多数抗His标签m Ab可以与血红蛋白结合,亦可与人体多种正常组织反应。结论带His标签的重组蛋白进行体内实验时可刺激机体产生抗His标签的抗体,该抗体可与血红蛋白及人体正常组织结合而影响重组蛋白的后期研究。
- 赵向绒张海祥刘杨王鑫王光华齐宗利李元胡军
- 关键词：重组蛋白单克隆抗体空间构型
- 白芍总苷对小鼠成骨细胞增殖、分化和矿化的影响被引量：9
- 2019年
- 目的研究白芍总苷(TGP)对小鼠成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、分化和矿化的影响。方法采用MTT法和流式细胞术检测TGP对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响;诱导MC3T3-E1成骨分化,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性和RT-PCR法检测人类相关转录因子2(Runx2)基因表达,分析TGP对成骨分化的影响,采用茜素红染色分析TGP对矿化的影响。结果 3、10 μg/L TGP均能促进MC3T3-E1细胞增殖(P<0.05, P<0.01);10 μg/L TGP可使G1期细胞的比例减少,S+ G2期细胞的比例增加(P<0.05);与对照组比较,TGP处理组细胞的ALP活性和Runx2表达水平显著升高(P<0.05, P<0.01),且矿化结节量明显增加。结论 TGP具有促进MC3T3-E1细胞增殖和分化成熟的能力,为炎性骨质疏松的治疗策略提供了实验依据和治疗思路。
- 赵向绒王海芳刘杨霍雪萍梁导艳孙晶莹胡军武敏
- 关键词：白芍总苷成骨细胞细胞增殖成骨分化矿化
- RNA质量对内参基因选择和qRT-PCR结果评价的影响被引量：4
- 2018年
- 目的:研究RNA质量对内参基因选择和实时定量PCR(qRT-PCR)分析肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导基因表达结果评价的影响。方法:用TNFα刺激体外培养的小鼠血管内皮细胞,采用qRT-PCR技术,以2种常用的管家基因β-actin和GAPDH为内参,检测细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因的表达,探讨RNA纯度对TNFα下游基因表达检测结果的影响。结果:当提取的总RNA纯度很高(D260nm/D230nm>2.0)时,以β-actin和GAPDH为内参基因检测ICAM-1基因表达的结果相近;当总RNA可能被盐及小分子污染(D260nm/D230nm<2.0)时,以β-actin为内参基因检测的ICAM-1基因相对表达量显著高于以GAPDH为内参所得结果。结论:RNA质量显著影响荧光定量PCR对基因表达的检测结果,因此在RNA质量较低时应选择2个或以上内参基因进行校正,以减少实验结果误差,得到准确结果。
- 霍雪萍张琳萍赵向绒刘勤社王海芳
- 关键词：实时荧光定量PCR内参基因肿瘤坏死因子Α
- 柯萨奇病毒A16型VP1基因和病毒生物物理学分析被引量：4
- 2015年
- 目的分析柯萨奇病毒A组16型（CoxA16）西安分离株VP1基因序列,探讨西安分离株基因亚型以及病毒颗粒的生物学特性。方法采集临床诊断为手足口病患儿的粪便标本,RTPCR方法检测粪便标本,CoxA16核酸检测阳性的粪便标本经处理后接种于RD细胞分离病毒。扩增CoxA16分离株VP1基因序列并测序。利用DNA Man、ClustalX 1.83和MEGA 4.0软件分析VP1基因和氨基酸序列。纯化CoxA16病毒颗粒,福尔马林灭活后电镜观察病毒颗粒的形状。结果成功从粪便标本中分离CoxA16病毒株,并获得CoxA16分离株VP1基因序列,该核苷酸编码区序列长度为891 bp,编码297个氨基酸序列;VP1基因比对显示,该分离株与其他不同地区的代表株核苷酸和氨基酸同源性分别为76.76%-97.57%和92.16%-100.0%;种系进化分析显示分离株属于B1a基因亚型的一个分支,与BJ10-03同属一个分支。透射电镜下病毒颗粒为20面体立体对称,病毒颗粒大小均匀,直径为20-30nm。结论西安CoxA16分离株属于B1a基因亚型,分离株在形态上与其他肠道病毒相似。
- 刘杨郭春艳张西嫔郑利茹赵向绒郭华胡军
- 关键词：手足口病
- 一种免疫抑制剂、鉴定方法及应用
- 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种免疫抑制剂、鉴定方法及应用，通过较青藤碱和柚皮素在小鼠骨髓干细胞诱导不成熟树突状细胞效率及诱导的imDC在小鼠皮肤移植模型发挥免疫抑制作用的差异，在用小鼠骨髓干细胞诱导imDC过程中...
- 黄晓燕徐翠香赵向绒封青冯杨萌
- 中药活性成分对oxLDL诱导血管平滑肌细胞泡沫化的影响被引量：8
- 2017年
- 目的探讨中药活性成分黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASIV)、羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)和芍药苷(paeoniflorin,PAE)对小鼠主动脉平滑肌细胞(ASMCs)泡沫化过程的影响,并探讨其可能的分子机制。方法体外培养小鼠ASMCs,并利用免疫荧光染色对其进行鉴定。利用氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)和肿瘤坏死因α(TNFα)诱导ASMCs泡沫化,并应用ASIV、HSYA和PAE进行干预,观察其对泡沫细胞形成的影响,应用油红O染色检测细胞形态学改变、酶促比色法测定细胞内胆固醇含量变化;应用RT-PCR和Western blot方法检测凝集素样氧化型低密度脂蛋白1(LOX-1)表达的变化。结果 oxLDL(80μg/m L)和TNFα(30 ng/mL)联用72 h可诱导ASMCs泡沫化,细胞内脂质颗粒明显增多,细胞内胆固醇含量增加,LOX-1表达上调;ASIV、HSYA和PAE显著抑制上述各过程。结论 ASIV、HSYA和PAE能够抑制ASMCs泡沫化,抑制oxLDL诱导的LOX-1表达可能是其作用机制之一。
- 赵苗苗王海芳曹情雯赵向绒霍雪萍孙晶莹王光华胡军刘勤社
- 关键词：主动脉平滑肌细胞氧化型低密度脂蛋白羟基红花黄色素A
