赵秀娟
- 作品数：18 被引量：38H指数：3
- 供职机构：天津医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市高等学校科技发展基金计划项目天津市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 低碘膳食对大鼠脑组织中同源盒基因NKX-2.2表达的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-2.2表达的影响,揭示低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法:雌性Wistar大鼠随机分为2组:低碘组和正常对照组,均饲以低碘饲料,分别饮用去离子水和碘酸钾溶液,3个月后分别取材于孕16天、新生及20日鼠龄低碘及正常仔鼠,实时荧光定量PCR检测其脑组织中Nkx-2.2 mRNA含量。结果:低碘组血清甲状腺激素水平明显低于对照组(P<0.05或P<0.01),建立缺碘Wistar大鼠动物模型。低碘及正常各年龄组的表达水平随着年龄增加表达趋势不一致,但均有明显差别(F=573.68、120.82,P<0.01)。各年龄组低碘及正常大鼠比较,孕16天正常鼠Nkx-2.2表达水平明显高于低碘鼠(t=6.86,P<0.01),而新生及20日龄低碘鼠Nkx-2.2表达水平明显高于正常鼠(t=15.85、10.61,P<0.01)。结论:同源盒基因Nkx-2.2表达差异与低碘导致脑发育迟滞密切相关。
- 张瑞戈海泽赵秀娟李媛郭刚
- 关键词：低碘同源盒基因实时荧光定量PCR脑发育
- 利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统构建HeLa细胞SND1基因敲除稳定株被引量：2
- 2015年
- 目的:利用改良的CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除He La细胞中SND1基因,构建He La细胞SND1基因敲除稳定株。方法:设计一对特异性识别SND1基因第二个启动子的上下游sg RNA,以PX462质粒为载体,构建出一对重组真核表达质粒。酶切和测序鉴定后,将一对重组质粒共同转染进入He La细胞中,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,挑取单克隆细胞进行培养。最后用Western Blot鉴定敲除效果。结果:sg RNA正确插入到PX462质粒载体中,转染并筛选单克隆后的细胞中没有SND1蛋白的表达。结论:成功构建出He La细胞SND1基因敲除稳定株。
- 刘郁莹崔晓腾高星杰赵秀娟付雪葛林苏超杨洁
- 关键词：基因敲除HELA细胞
- CRISPR/Cas9系统介导的EZH2基因定点敲入Hut78细胞系的构建被引量：1
- 2017年
- 目的利用CRISPR/Cas9系统构建定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。方法构建EZH2表达载体pMD-18T-EZH2和单向导RNA(sg RNA)表达载体pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA,将两个载体共转染Hut78细胞,通过qPCR检测EZH2 mRNA的表达情况,通过Western Blot检测EZH2和H3K27me3蛋白的表达情况。结果测序结果显示,构建的pMD-18T-EZH2和pSpCas9(BB)-2A-Puro-sg RNA表达载体插入序列完全正确。将构建的两个质粒共转染Hut78细胞,qPCR结果显示EZH2基因在RNA水平上表达显著上调;Western blot结果显示EZH2和H3K27me3蛋白表达水平显著提高。结论通过CRISPR/Cas9系统成功构建了定点敲入EZH2基因的Hut78细胞系。
- 鲁卓林熊显佳吴云丹周慧贾军王双林武莉莉刘艺洁乔阳杨冰赵秀娟王青松韩春勇张玲孙琰
- 关键词：甲基化EZH2基因
- 低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响被引量：1
- 2009年
- 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因nkx2．1表达的影响。方法雌性Wistar大鼠40只，按体质量随机分为低碘组和对照组，均饲以含碘量为13．66ug／kg的低碘饲料，分别饮用去离子水和200ug／L碘酸钾溶液，3个月后用化学发光免疫分析方法测定大鼠血清甲状腺激素（TT3、TT4、FT3、FT4），再将两组大鼠与健康雄鼠进行交配，在孕16d、新生及20日龄时，取胎鼠或仔鼠脑组织，用实时荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测脑组织nkx2．1 mRNA表达。结果大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平，低碘组[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L、（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol／L、（4．83±0.33）、（26．99±4．48）pmol／L；t值分别为2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。对照组孕16d、新生及20日龄大鼠脑组织nkx2．1 mRNA表达分别为（5．60±0．30）×10^-3、（1．20±0．29）×10^-3、（0．18±0．06）×10^-3，低碘组同日龄大鼠nkx2．1 mRNA表达分别为（3．00±0．55）×10^-3、（1．90±0．21）×10^-3、（0．69±0．15）×10^-3。对照组、低碘组各日龄胎、仔鼠之间nkx2．1 mRNA表达水平比较，差异有统计学意义（F值分别为2102．07、162．40，P均〈0．01），对照组、低碘组新生仔鼠nkx2．1 mRNA的表达比孕16d胎鼠低（P均〈0．01），20日龄仔鼠nkx2．1 mRNA表达比孕16d和新生降低（P均〈0．01）；低碘组与同日龄对照组比较，对照组孕16d胎鼠nkx2．1 mRNA表达明显高于低碘组胎鼠（t=16．073，P〈0．01），而新生及20日低碘组明显高于对照组（t值分别为7．537、12．227．P均〈0．01）。结论低碘导致的脑发育迟滞与nkx2．1在脑组织中的差异表达密切相关。
- 赵秀娟张瑞戈海泽舒剑波郭刚
- 关键词：碘缺乏症基因同源盒基因表达
- LSD1过表达及去甲基化作用缺失质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2018年
- 目的 评估赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1（LSD1）过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在人胚肾细胞HEK293T中的表达水平。方法 采用PCR扩增LSD1片段，重叠PCR扩增LSD1去甲基化作用缺失片段，构建大鼠特异性LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒，并经琼脂糖凝胶电泳和测序进行验证。将验证后的两种重组质粒与空白载体分别进行包病毒，感染HEK293T后用嘌呤霉素筛选稳定表达的细胞，再用Western Blot和实时定量PCR检测稳定表达的HEK293T细胞内LSD1的表达情况。结果 琼脂糖凝胶电泳和测序结果表明，LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒构建成功。Western Blot和实时定量PCR检测结果显示，与空白对照组相比，LSD1过表达组和LSD1去甲基化片段缺失组HEK293T细胞中LSD1蛋白及mRNA的相对表达量均上调，差异均具有统计学意义（均P〈0.01）。结论 构建的LSD1过表达质粒和LSD1去甲基化片段缺失质粒在HEK293T细胞中实现了LSD1基因的过表达，为进一步研究LSD1基因与相关疾病的关系以及LSD1去甲基化作用奠定了基础。
- 武莉莉刘艺洁曹冰雁费乔曼赵秀娟李倩韩雅婷曹磊杨冰张玲
- 关键词：去甲基化重组质粒
- 大鼠EZH2基因过表达质粒以及催化亚基缺失质粒构建及鉴定
- 2016年
- 目的 构建特异性的大鼠EZH2过表达质粒以及EZH2催化亚基SET domain缺失质粒，并在293T细胞中评估其表达水平。 方法 提取大鼠心脏组织RNA，逆转录为cDNA，重叠PCR扩增催化亚基SET domain缺失的EZH2的cDNA，以其为模板进行PCR扩增，将PCR产物和载体双酶切，切胶回收目的片段，经T4连接酶连接，连接产物转入感受态细胞，涂板挑取单克隆摇菌测序，提取质粒，采用脂质体转染法转染293T细胞。 结果 Western Blot 法和RT-PCR法检测结果表明，质粒在293T细胞中实现EZH2基因的过表达。 结论 构建的2种质粒为进一步研究EZH2基因与心肌肥厚的关系及EZH2催化亚基的作用奠定了基础。
- 熊显佳杨冰赵秀娟孙琰赵建松武莉莉刘艺洁张玲
- 关键词：EZH2催化亚基重组质粒心肌肥厚
- 低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1和Nkx-6．2 mRNA表达的影响被引量：3
- 2009年
- 目的研究低碘膳食对大鼠脑组织同源盒基因Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA表达的影响，探讨低碘导致脑发育迟滞的可能分子作用机制。方法20只雌性Wistar大鼠按体质量随机分为2组：低碘组和对照组，均饲以低碘饲料（含碘量为13．66μg／kg），分别饮用去离子水和含碘200μg／L的碘酸钾溶液，3个月时采用化学发光免疫分析法检测大鼠血清甲状腺激素水平，然后将雌鼠与正常饲养的Wistar雄鼠进行交配，分别取孕16d、新生期及生后20日龄仔鼠脑组织，采用实时荧光定量PCR检测Nkx-6．1、Nkx-6．2 mRNA的表达。结果①低碘组大鼠血清TT3、TT4、FT3、FT4水平[（0．89±0．20）、（0．32±0．16）nmol／L，（3．33±0．61）、（3．28±0．80）pmol／L]均明显低于对照组[（1．04±0．06）、（39．42±14．68）nmol/L，（4．83±0．33）、（26．99±4．48）pmol，t=2．71、6．52、5．70、12．89，P〈0．05或〈0．01]。②对照组孕16d、新生期及20日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1 mRNA表达水平分别为（1．90±0．23）×10^-3、（1．86±0．40）×10^-4、（1．11±0．27）×10^-4，各日龄间比较差异有统计学意义（F=827．58．P〈0．01），随着日龄增加Nkx-6．1mRNA表达水平明显下降．两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．01）；低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．1mRNA表达水平分别为（1．16±0．16）×10^-3、（3．44±0．49）×10^-4、（3．58±0．64）×10^-4，差异有统计学意义（F=297．25，P〈0．01），但变化趋势与对照组不同，孕16d表达水平最高，与新生期及20日龄比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；低碘组与对照组比较，孕16d明显降低（t=10．14，P〈0．01），而新生期及20日龄则明显增高（t值分别为9．69、13．81，P均〈0．01）。③对照组和低碘组各日龄仔鼠脑组织Nkx-6．2 mRNA表达水平分别为（1．03±0．19）×10^-2、（1．33±0.10）×10^-3、（8�
- 张瑞戈海泽赵秀娟李媛郭刚
- 关键词：聚合酶链反应
- EZH2基因RNAi慢病毒载体的包装及鉴定
- 2014年
- 目的 外周T细胞淋巴瘤（PTCL）源于成熟的胸腺后淋巴细胞,是一类少见的生物学行为及临床表现均高度异质性的疾病,且预后差.包装zeste基因增强子同源物2（EZH2）RNA干扰（RNAi）慢病毒载体,可为今后相关实验研究奠定基础.方法 靶向EZH2基因的短发夹RNA（EZH2-shRNA）质粒转化感受态细菌,筛选阳性克隆,经测序鉴定正确后通过脂质体将慢病毒三质粒系统共转染293T细胞,进行慢病毒包装.病毒载体感染Hut78细胞后,观察感染效率,并用反转录定量PCR（RT-qPCR）和Western Blot检测EZH2mRNA和蛋白表达水平.结果 成功包装了慢病毒表达载体,对Hut78细胞的感染效率在95％以上.RT-qPCR和Western Blot检测结果显示,EZH2基因在靶细胞中的表达水平降低.结论 成功包装并鉴定了EZH2基因RNAi慢病毒表达载体.
- 陈青青杨冰赵秀娟马芹刘超梁绍平闵琦吴少华孟歆怿王玺王华庆张会来
- 关键词：外周T细胞淋巴瘤慢病毒载体RNA干扰
- 肿瘤发生的表观遗传学:进展与临床意义被引量：13
- 2012年
- 表观遗传（epigenetics）指所有不通过DNA序列改变就能影响基因表达（从而决定细胞乃至个体表型）的、可遗传的（即可伴随细胞分裂传递下去）调控方式,包括DNA甲基化、组蛋白修饰、染色质重塑、miRNA、朊病毒等。表观遗传调控在干细胞自我更新、定向分化、器官发育等生命过程中起着至关重要的作用：
- 王先火赵秀娟邱立华王华庆王玺
- 关键词：表观遗传肿瘤DNA甲基化组蛋白修饰
- 应用CRISPR/Cas9系统在G401细胞株中敲除p21基因被引量：1
- 2016年
- 目的运用CRISPR/Cas9基因编辑技术,在人恶性横纹肌样瘤细胞株G401中敲除p21基因。方法通过反转录定量PCR(RT-q PCR)及Western blot检测各瘤细胞株中p21的表达,针对p21基因作用的功能域,设计了靶向人p21基因第3个外显子的向导RNA(sg RNA),克隆入lenti CRISPR v2载体。将测序及酶切鉴定正确的重组质粒在293T工具细胞中制备慢病毒颗粒并感染G401细胞,使用嘌呤霉素进行阳性细胞筛选,显微镜下挑取单克隆细胞团并继续培养获得G401单克隆细胞株。提取单克隆细胞株RNA及蛋白,利用RT-q PCR及Western blot方法检测细胞株中p21的敲除效果。结果 p21在人横纹肌样瘤细胞中高表达。成功构建靶向p21基因的lenti CRISPRv2-sg RNA重组慢病毒质粒。与对照组相比,筛选得到的G401亚克隆细胞系中p21蛋白表达缺失。结论针对难转染的G401细胞,应用CRISPR/Cas9系统成功构建了p21基因敲除的稳定株,为后续深入研究p21在人恶性横纹肌样瘤中的作用机制奠定了基础。
- 赵秀娟陈万标张沛涛张娜楚晓文白向阳杨冰吴旭东王玺
- 关键词：横纹肌瘤P21基因敲除慢病毒
