邵昱昊
- 作品数：65 被引量：173H指数：8
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“十一五”国家科技支撑计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一株鸭坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列分析被引量：9
- 2013年
- 2010年我国爆发了使蛋鸭产蛋量急剧下降、由一种鸭黄病毒引起的疾病,通过对来自山东某发病鸭场的病料进行分离,得到实验室分离株Du/CH/LSD/110128。对其进行全基因组序列测定分析,确定该株病毒全基因组含有一个开放阅读框,编码一个由3 426个氨基酸组成的多聚蛋白。将试验测得株Du/CH/LSD/110128株与黄热病毒(Yellow fever virus)、登革热病毒(Dengue virus)、伊利乌斯脑炎病毒(Ilheus virus)、西尼罗病毒(West Nilevirus)、巴格扎病毒(Bagaza virus)和其他一些已公布序列的坦布苏病毒进行核酸同源性比较和遗传进化树分析,发现Du/CH/LSD/110128株与巴格扎病毒亲缘关系较近但介于病毒种的水平上,与其他株坦布苏病毒核酸同源性在87%以上,可以确定Du/CH/LSD/110128株属于新型鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus)。
- 刘胜旺张玥刘晓丽李云霞韩宗玺邵昱昊孔宪刚
- 关键词：基因组
- 几种中国鸡传染性支气管炎致弱毒株对流行毒株CK/CH/LDL/97Ⅰ保护作用的评价被引量：1
- 2009年
- 选择2株鸡传染性支气管炎异种致弱毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110、tl/CH/LDT3/03 F120和1株同种毒株CK/CH/LDL97ⅠF115,研究其对中国流行强毒株CK/CH/LDL97Ⅰ的保护效果。首先对不同毒株及参考毒株的S1基因进行比较和系统进化树分析,研究了CK/CH/LDL97Ⅰ与其他病毒的基因型关系。结果显示,CK/CH/LDL97Ⅰ属于有别于其他IBV毒株的一个独立的基因群。在此基础上,通过血清抗体检测、攻毒后发病率、死亡率、临床症状、病理变化观察以及气管和肾脏中病毒分离等方面研究了同种致弱毒株和异种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ的免疫效力。结果显示,同种致弱毒株对CK/CH/LDL97Ⅰ强毒的攻击可提供100%的临床和病毒分泌的保护性。异种毒株tl/CH/LDT3/03 F120可提供100%的临床保护,但呼吸道病毒检出率达50%,表明对呼吸系统的保护效果不好。异种毒株CK/CH/LHLJ/04ⅤF110免疫组临床发病率为50%,气管样品病毒检出率为100%,可见临床和对病毒分泌的保护效果均较差。
- 张晓楠王滨李成仁王钰刘乔然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因异种
- 鸭β-防御素16的分离、鉴定及其抗病毒机制被引量：1
- 2012年
- 【研究目的】旨在克隆与表达鸭β-防御素16(AvBD16)基因及测定其生物学特性,监测了鸭肝炎病毒感染后麻鸭不同组织AvBD16与TLR-7的动态变化。【方法】采用RT-PCR方法,从鸭骨髓组织中扩增到鸭AvBD16,并将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对其重组和合成蛋白进行生物学活性测定。采用荧光定量PCR方法,分别检测了鸭肝炎病毒对鸭AvBD16和TLR-7在不同组织中表达量的影响。【结果】鸭AvBD16 cDNA大小为155bp,编码50个氨基酸残基,与鸡AvBD3氨基酸同源性最高,为62%。重组和合成鸭AvBD16蛋白对12种细菌均有不同程度的抑制作用,高盐浓度对其抗菌活性有一定影响,且溶血活性极低。重组AvBD16蛋白具有体外抗病毒活性。经鸭肝炎病毒诱导后,鸭AvBD16在肝脏及其他组织中被诱导表达或表达量显著上调,且与TLR7的表达量呈正相关。【结论】成功克隆并表达了鸭AvBD16基因,重组和合成AvBD16蛋白具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。重组AvBD16蛋白具有抗鸭肝炎病毒的活性,体内抗病毒作用可能受TLR-7通路调节。
- 张可心张名岳辛胜男韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：抗菌活性抗病毒活性信号传导
- 中国2000-2004年鸡传染性支气管炎病毒地方分离株核蛋白基因的遗传变异分析被引量：12
- 2006年
- 对2000-2004年从中国9个省市分离到的13株IBV的核蛋白基因片段进行序列测定及分析的结果表明,13株IBV分离株核蛋白基因均含有一个长1230bp的ORF,但存在基因突变现象。与GenBank中的42株参考毒株核蛋白基因序列进行比较和分析,系统进化关系显示55株IBV毒株分属于9个群。第Ⅰ-Ⅲ群主要包括美国、日本、荷兰等国家以及中国的部分IBV分离株和疫苗株。其中本研究中的CK/CH/LHN/00I可能为一株分离的疫苗毒,CK/CH/LSD/03I、CK/CH/LDL/01I可能为重组毒。而中国近十年来分离的IBV毒株主要分布在第Ⅵ-Ⅷ群中,此3群内IBV毒株之间N蛋白推导氨基酸同源性为88.3%～100%,与其他各群之间同源性为62.3%～95.1%。因此,此基因型的IBV毒株可能在中国已有较长时期的存在且发生了较大程度的变异。其中第Ⅵ群中两株韩国分离株与中国IBV分离株具有较近的亲缘关系。以上结果表明,中国大多数IBV分离株在N基因进化关系上较为独立,与国外毒株相比,和韩国毒株进化关系密切。此外,中国IBV毒株基因重组现象更加普遍,尤其是疫苗毒和野毒之间的重组。
- 张庆霞韩宗玺邵昱昊陈建飞荣骏弓刘胜旺孔宪刚
- 关键词：传染性支气管炎病毒核蛋白基因
- 应用PCR检测鸭肠炎病毒弱毒在鸡胚体内的分布被引量：7
- 2007年
- 根据GenBank已发表的鸭肠炎病毒(DEV)UL6基因的部分核苷酸序列,设计并合成一对引物,以鸭肠炎病毒中国商品化疫苗毒蚀斑纯化株(DEVClone-03)DNA为模板,经PCR扩增出预期516bp的目的片段。将此片段插入克隆载体质粒pMD18-T,并进行序列测定,序列比较结果显示,此段序列与参考序列完全一致。用PCR检测DEVClone-03在鸡胚体内的分布情况显示,接毒死亡鸡胚的尿囊膜、心、肝、脾、肺、肾和肌肉皮肤内均存在病毒。PCR敏感试验表明此方法可以检测到100μL尿囊液中提取的10-3稀释的病毒DNA,相当于0.2个EID50病毒量的DNA。
- 陈淑红刘怀然韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚
- 关键词：鸭肠炎病毒PCR
- 鹅β-防御素10基因的分离、鉴定与表达被引量：2
- 2012年
- 【目的】从鹅的组织中克隆鹅β-防御素10(avianβ-defensin 10,AvBD10)基因,通过大肠杆菌进行原核表达,检测重组鹅AvBD10蛋白的生物学特性。【方法】采用RT-PCR方法,从鹅的肾脏组织中扩增鹅AvBD10基因。根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素的氨基酸序列构建系统进化树,进行遗传进化分析;并应用荧光定量的方法对该基因的组织表达水平进行鉴定。将该基因克隆到原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,并对该重组蛋白进行纯化,测定体外生物学活性。【结果】从鹅肾脏组织中克隆出了鹅AvBD10基因,该基因的cDNA大小为207 bp,编码68个氨基酸。经遗传进化分析表明,该基因推导的氨基酸序列与鸭AvBD10的同源性最高,达92.7%。通过对重组蛋白抗菌活性的检测发现,该蛋白对12种致病性细菌均具有较强抑菌作用,但在高盐离子浓度下活性减弱。并且重组蛋白不具有溶血的特性。【结论】成功克隆并表达了鹅AvBD10基因,原核表达产物具有广谱的抗菌活性且不具有溶血特性。
- 周财源张名岳韩宗玺邵昱昊刘胜旺马得莹
- 关键词：克隆遗传进化分析抗菌活性
- 山羊痘基因工程标记疫苗的初步研究被引量：4
- 2007年
- 为了有效地预防和根除山羊痘,研制能够区分自然感染和疫苗免疫的标记疫苗。本研究在山羊痘病毒(goat pox virus,GPV)疫苗株AV41胸苷激酶(thymidine kinase,TK)基因克隆、鉴定的基础上,构建转移载体。将痘苗病毒(Vaccinia Virus,VV)晚期启动子P11和大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因(LacZ)报告基因片段插入含有TK片段同源臂的载体pTK的KpnI酶切位点,经酶切、PCR鉴定出,命名为pTK-LacZ。用脂质体法转染感染了GPVAV41株的犊牛睾丸(bovine testes,BT)细胞,待出现80%以上的细胞病变时收获病毒,经过连续9代蓝色蚀斑筛选、纯化和PCR鉴定,获得纯化的表达LacZ基因、TK功能缺失的重组病毒,命名为rGPV-LacZ。生物学特性研究显示,LacZ基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,其毒力、生长特性与亲本株相似,保持原有疫苗株的生长特性,而且在BT细胞和羔羊睾丸(lamb testes,LT)细胞连续传20代遗传性状很稳定。本研究筛选、纯化的重组病毒rGPV-LacZ可以区分自然感染和疫苗免疫动物,为进一步研制山羊痘病毒基因工程标记疫苗奠定了基础。
- 王芳刘胜旺邵昱昊陈洪岩
- 关键词：重组山羊痘病毒标记疫苗
- 果子狸源呼肠孤病毒的分离鉴定
- 在广东省采集的果子狸样品共192份，处理后接种Vero-E6细胞，从中分离到1株病毒。该病毒在Vero-E6细胞上盲传至第4代开始出现细胞病变，表现为细胞内颗粒增多，细胞收缩、变圆，最后细胞从瓶壁脱落。经电镜观察发现，病...
- 邵昱昊韩宗玺陈露菲孔宪刚刘胜旺
- 关键词：果子狸呼肠孤病毒聚合酶链反应
- 抗鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体的制备及抗原表位鉴定被引量：3
- 2010年
- 为鉴定鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗原表位,本研究将IBV tl/CH/LDT3/03株免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经克隆筛选,得到两株针对IBV核(N)蛋白的单克隆抗体(MAb)6H3和6F9,其染色体数目分别为90条和102条,MAb亚类鉴定分别属于IgG1和IgG2b,轻链均为κ链。对MAb6H3和6F9的抗原表位进行初步鉴定,将N基因分成8个片段克隆于pGEX-6p-1载体中,转化BL21(DE3)内诱导表达。经western blot分析,MAb6H3表位的初步定位在aa80～aa99,而MAb6F9表位的初步定位在aa64～aa82。而且MAb6F9还能特异性识别其他5株IBV的天然N蛋白,推测它们含有一个相同的B细胞表位。
- 徐佳邵昱昊韩宗玺李慧昕孔宪刚刘胜旺
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒核蛋白单克隆抗体
- 鸭坦布苏病毒鸭胚成纤维细胞适应病毒编码基因序列测定及分析被引量：2
- 2013年
- 为研究鸭坦布苏病毒(DTMUV)Du/CH/LSD/110128在鸭胚成纤维细胞(DEF)的适应性及变异情况,本研究将Du/CH/LSD/110128接种DEF,测定各代病毒的TCID50,表明DTMUV分离株已适应DEF,并在72 h产生明显的细胞病变(CPE),自F8代起病毒适应DEF,其F10代病毒滴度为104.4TCID50/0.1 mL左右。对细胞适应毒F10代的DTMUV进行编码区基因测序并分析,结果表明Du/CH/LSD/110128细胞适应毒与DTMUV参考病毒株同源性在98%以上;其推导氨基酸序列与亲本病毒氨基酸序列差异不显著,仅存在10个氨基酸差异位点,主要在NS1和NS3蛋白,与鸡源、鸭源及鸽源病毒分别具有21个、14个、16个差异位点,这些差异位点主要存在于E蛋白、NS1蛋白和NS5蛋白。
- 李云霞刘晓丽张玥韩宗玺邵昱昊刘胜旺孔宪刚
