目的探索UHRF1基因与结直肠癌(CRC)患者临床病理特性的关系,慢病毒转染过表达和敲减UHRF1对CRC细胞增殖、侵袭及迁移的影响及可能的信号通路。方法免疫组织化学和RT-PCR法检测112例CRC癌组织与癌旁组织UHRF1的表达。构建慢病毒转染过表达和敲减UHRF1载体,分别转染SW480和HCT116细胞株,RT-PCR和Western blot检测转染前后及IWP-2(WNT拮抗剂)和HLY78(WNT活化剂)干预前后的UHRF1、WNT信号通路关键分子和MMP9的表达。EDU检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。结果(1)TCGA数据库和临床数据中,癌组织中UHRF1 m RNA和蛋白表达均高于正常组织。UHRF1表达量与TNM分期、N和M分期密切相关。TCGA中UHRF1低表达患者有更长的5年OS和疾病相关存活时间(DSS),UHRF1预测1、3和5年OS的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.634、0.652和0.771;在临床数据中3年OS也有相同生存获益,UHRF1高表达是CRC不良预后因素。(2)过表达UHRF1后,SW480中WNT3a、GSK3β和MMP9分子表达明显升高,p-β-catenin表达下降(P<0.05);敲减UHRF1后,HCT116细胞中WNT3a、GSK3β、MMP9表达下降,而p-β-catenin表达升高(P<0.05);分别用IWP-2和HLY78进行“拯救”实验,能够获得一致结果。(3)过表达组细胞增殖、迁移和侵袭能力明显高于对照组;IWP-2处理后,细胞增殖、迁移及侵袭能力则受到抑制。敲减实验呈现与过表达实验相反的结果。结论UHRF1在CRC发生发展中可能具有重要作用,UHRF1高表达可能是CRC不良预后因素,UHRF1可能通过WNT/MMP9信号通路来影响CRC的增殖、迁移和侵袭。
