郭庆华
- 作品数：8 被引量：78H指数：4
- 供职机构：第二军医大学药学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 基于SRAP技术的与红花苞叶刺紧密相关基因的筛选及克隆
- 重要农艺性状基因紧密连锁标记的获得，对于进行性状分子标记辅助选择，提高育种的选择效率与预见性，加快新品种的选育进程具有重要意义。红花(Carthamus tinctorius L.)是为菊科1-2年生草本植物，在我国，多...
- 郭庆华
- 关键词：分子标记基因克隆CDNA末端快速扩增生物信息学
- 文献传递
- 红花总RNA的快速提取方法被引量：4
- 2008年
- 目的：建立从红花组织中快速分离总RNA的方法，为进行反转录PCR（RT—PCR）、快速扩增cDNA末端（RACE）、蛋白质印迹法及其他分子生物学实验奠定基础。方法：采用改良Trizol法提取红花苞叶总RNA时，加入DNaseⅠ消化残留DNA，并加入RNase抑制剂，利用琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度法进行纯度和浓度检测。RT—PCR后，进行cDNA-序列相关扩增多态性（SRAP）分析。结果：抽提的RNA经电泳检测，可见28S、18S、5S RNA三条带，带的亮度强，且28S的宽度是18S的2倍左右。紫外吸光度D260／D280为1．8～2．0，D260／D230为2．0～2．3。总RNA产物进行cDNA-SRAP扩增，出现清晰的条带。结论：改良Trizol法所提取的RNA纯度高，质量好，完整性好，可成功进行cDNA-SRAP扩增。
- 郭庆华郭美丽唐洁
- 关键词：红花RNATRIZOL法逆转录聚合酶链反应
- 与红花苞叶刺性状紧密连锁的SRAP分子标记研究被引量：26
- 2007年
- 利用相关序列扩增多态性(SRAP)技术研究与红花苞叶刺性状紧密连锁的基因,为研究与红花重要性状相关的遗传基础及红花的分子标记辅助育种提供实验依据。采用分离体分组混合分析法(BSA),以杂交F2代红花个体苞叶刺多而长以及苞叶无刺的极端性状为依据,分别构建有刺与无刺两个近等基因池。利用SRAP标记技术,在两亲本及基因池间筛选45对引物,通过单株验证,获得与红花苞叶刺性状连锁的1个SRAP标记(M3E3)。从聚丙烯酰胺凝胶上回收和克隆SRAP片段(M3E3),并测序。该标记在苞叶有刺的20个单株中,有16株扩增出该特异性条带,4株未扩增出该条带。苞叶无刺的15个单株均无该条带。经计算,该标记和有刺红花基因之间的交换值为11.4%,说明两者之间紧密连锁。该片段的精确长度为349bp,其碱基组成为A+T=41.08%。与红花苞叶刺性状紧密连锁的SRAP标记M3E3可作为无刺红花品种选育的辅助分子标记。
- 郭庆华郭美丽
- 关键词：红花SRAP苞叶
- 中草药体外杀精子抗生育作用的研究进展被引量：7
- 1999年
- 综述了单味中草药以及中草药有效成分（包括皂甙、生物碱、萜类、酚酸和脂肪酸类及其他成分）体外杀精子抗生育作用的国内外研究进展。
- 秦路平郭志学郭庆华
- 关键词：中草药杀精剂抗生育
- 全文增补中
- 基于cDNA-SRAP技术筛选的ATP合成酶CF_1-α亚单位基因(CTL-spn)与红花刺性状紧密连锁（英文）被引量：1
- 2015年
- 红花的花是传统的活血化瘀中药,但因其花序周围苞叶有刺非常不利于人工采摘。本研究采用cDNA-SRAP技术分析了与红花苞叶刺性状紧密连锁的基因。在分别建立红花F2代c DNA无刺池和有刺池的基础上,利用60对引物筛选与苞叶刺连锁的基因片段,获得6条与红花刺性状连锁的基因片段,其中基因GPY-1和GPY-2重组率低,与苞叶刺紧密连锁并成功测序。采用RACE技术,克隆了GPY-2 c DNA全长,命名为CTL-spn,生物信息学分析显示:CTL-spn全长1 679 bp,具有1 524 bp的开放阅读框,编码508个氨基酸。同源比对发现:CTL-spn表达蛋白与其他物种的ATP合成酶CF1-α亚基具有很高的同源性(97%)。半定量RT-PCR分析结果显示:GPY-1和GPY-2仅在有刺F2代单株中表达。因此,红花ATP合成酶CF1-α亚基基因(CTL-spn)可能直接参与了红花刺性状的形成从而提高了有刺红花的抗逆性,这一发现为红花无刺品种的选育提供了重要思路。
- 郭丹丹郭庆华高越郭美丽
- 关键词：红花ATP合成酶
- 青葙SRAP体系的建立和优化被引量：7
- 2008年
- 目的探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质间的亲缘关系奠定基础。方法用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L)8水平单因素试验。在25μL体系中加入模板DNA20ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果建立了适合青葙的SRAP体系,在25μL体系中,DNA为20ng,Taq酶浓度为0.04U/μL,dNTP浓度为0.30mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究。为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础。
- 郭庆华郭美丽薛芊冯娜张汉明
- 关键词：青葙SRAP
- 红花SRAP扩增体系的建立和优化被引量：33
- 2006年
- 目的:探讨影响红花SRAP扩增的各种因素,建立能够稳定扩增红花基因组的体系,为研究红花重要性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础。方法:用CTAB法提取红花DNA,设计Taq酶浓度(0.02、0.040、.06 U/μl)、dNTP浓度(0.15、0.25、0.30 mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3因素3水平27次实验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mmol/L)8水平单因素实验。在25μl体系中加入模板DNA 20 ng。对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果:本研究建立了适合红花的SRAP体系,Taq酶浓度为0.02 U/μl,dNTP浓度为0.25 mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+的浓度为3.0 mmol/L,优化后的体系目标条带增多,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论:本研究建立的反应体系适合红花SRAP的研究。
- 彭飒郭美丽陈跃华郭庆华
- 关键词：红花相关序列扩增多态性核酸扩增技术
