陈秀英
- 作品数：45 被引量：116H指数：7
- 供职机构：南京医科大学基础医学院动脉粥样硬化研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金霍英东青年教师基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 重组腺相关病毒载体介导的人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在肌源性细胞C2C12中的表达
- 2005年
- 目的 以重组2型腺相关病毒为载体介导人载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano在小鼠肌源性细胞C2C12中的表达,探索一种崭新的预防、治疗动脉粥样硬化性疾病的途径。方法 以正常人肝组织中抽提的RNA为模板,用逆转录聚合酶链反应获得人载脂蛋白AⅠcDNA ,点突变制备载脂蛋白AⅠMilanocDNA。分别将载脂蛋白AⅠ、载脂蛋白AⅠMilano的cDNA插入重组2型腺相关病毒载体质粒,并与辅助质粒共转染包装细胞2 93T获得编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒载体,粗提后以冰乙醇法进行浓缩。斑点杂交检测重组2型腺相关病毒载体滴度,十二烷基磺酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其纯度。分别用含载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠMilanocDNA的编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒对小鼠肌源性细胞C2C12进行感染,酶联免疫吸附法检测蛋白表达情况。结果 聚合酶链反应产物序列正确,点突变成功。编码人载脂蛋白AⅠ和载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒的滴度均在2×10 14 个/L左右。重组2型腺相关病毒纯度良好。载脂蛋白AⅠ及载脂蛋白AⅠMilano分别获得0 .39±0 .0 4mg/L和0 .31±0 .0 3mg/L的表达水平。结论 成功制备表达载脂蛋白AⅠ或载脂蛋白AⅠMilano的重组腺相关病毒载体,并在C2C12细胞中获得有效?
- 王志广桂鸣蒋莉陈秀英黄峻陈琪范乐明
- 关键词：腺相关病毒
- β淀粉样多肽人源性抗体的筛选与鉴定被引量：6
- 2004年
- 目的:制备β淀粉样多肽(Aβ)人源性抗体并进行鉴定。方法:以Aβ1-42为抗原,利用噬菌体抗体库技术,通过“吸附-洗脱-扩增”的富集反应,筛选出阳性克隆,进行ELISA检测。将单克隆噬菌粒转化大肠杆菌HB2151,诱导表达可溶性单链抗体(scFv)。结果:经过4轮筛选,获得56个能与AB结合的ELISA阳性克隆。经蛋白印迹检测(Western blot),表达的可溶性seFv抗体片段能够特异性地与Aβ1-42结合,而与牛血清白蛋白(BSA)没有交叉反应。结论:该技术便捷有效,可不经免疫制备出高特异性的人源性抗体,为开展阿尔茨海默病的免疫疗法奠定了基础。
- 夏骏李晓宇陈秀英范乐明陈琪
- 关键词：噬菌体抗体库AΒ1-42人单克隆抗体
- 重组逆转录病毒介导的人载脂蛋白AI基因在肌源细胞中的表达被引量：1
- 2000年
- 目的 探索一种安全有效的载脂蛋白 AI基因表达系统。方法 构建含人载脂蛋白 AI c DNA的双顺反子逆转录病毒载体 p L AEN,用其转化小鼠原代肌母细胞及肌源性细胞 C2 C12 ,EL ISA法检测细胞液中人载脂蛋白 AI的含量。结果 转化后的小鼠原代肌母细胞及 C2 C12细胞在分化为肌管细胞后均获得异源表达人载脂蛋白 AI的能力 ;而且经 G418筛选也获得稳定转化的 C2 C12细胞株 ,30天后仍保持有效表达人载脂蛋白 AI的能力。结论 提示肌源性细胞在体外 ,以含人载脂蛋白 AI c DNA的逆转录病毒载体进行基因修饰后再移植回骨骼肌 。
- 于书真范乐明王南陈秀英陈琪魏恩会
- 关键词：载脂蛋白AI逆转录病毒基因转移
- 人胚肝脂代谢相关基因的表达谱被引量：3
- 2003年
- 运用cDNA微阵列结合荧光半定量聚合酶链反应技术 ,首次大规模分析人胚发育过程中肝脏脂代谢相关基因的表达情况 ,比较孕早、晚期人胚肝脂代谢相关基因的表达谱。抽提孕早、晚期胎儿肝脏组织总RNA ,取等量mRNA逆转录标记 33P ,制成cDNA探针后与人类全基因cDNA微阵列芯片杂交 ,用相应软件分析杂交信号扫描结果。有差异表达的基因再用实时荧光半定量PCR方法进一步确认。在进入研究的可信基因中 ,与脂代谢相关的基因共有 135条 ,其中 2 8条有差异表达 (2倍以上 ) ,随胎龄增长 ,脂肪酸分解的相关基因呈现上调趋势 ,脂肪酸和胆固醇合成的相关基因呈现下调趋势 ,差异范围从 0 .4 3～ 8.3倍。检测 15例胚肝组织的脂质含量 ,发现胆固醇和甘油三酯水平随胎龄增长而逐渐下降。人类胚胎肝脏的胆固醇和甘油三酯的合成率及含量可能随着发育成熟呈现下降趋势。
- 唐震李晓宇何龙陈秀英范乐明陈琪
- 关键词：病理生理学CDNA微阵列
- A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失对功能的影响被引量：5
- 2005年
- 目的确定A类清道夫受体胞浆域中的信号序列,探讨其对于受体功能的影响。方法构建A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的表达质粒,并将其经脂质体介导瞬时转染入CHO细胞中。用Westernblot检测A类清道夫受体在细胞中的表达,并用流式细胞仪定量检测转染后的蛋白表达效率。用DiI标记的乙酰化低密度脂蛋白与转染的细胞共孵育,激光共聚焦显微镜下观察乙酰化低密度脂蛋白在细胞内的分布,并进行荧光定量分析。结果A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体可大量表达于转染细胞膜和细胞浆。在高浓度乙酰化低密度脂蛋白刺激下,A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体的细胞内定位发生变化,也可存在于转染细胞核内。A类清道夫受体N端第1～27位氨基酸胞浆结构域缺失体摄取DiI标记乙酰化低密度脂蛋白的能力较全长相比下降约60%,细胞粘附能力较全长A类清道夫受体相比则下降约8.9%。结论A类清道夫受体的N端第1～27位氨基酸结构对于A类清道夫受体在细胞内的定位表达、结合和摄取配体以及调节细胞粘附的功能具有重要的作用。
- 陈耀宇管晓翔王晓花乐珅柏惠陈秀英季勇范乐明陈琪
- 关键词：病理学与病理生理学A类清道夫受体粘附
- 人主动脉粥样硬化病变中修饰脂蛋白的研究被引量：7
- 1998年
- 目的研究人粥样硬化病变主动脉中丙二醛（ＭＤＡ）和４羟基壬烯醛（ＨＮＥ）修饰载脂蛋白Ｂ（ａｐｏＢ）的分布特点、含量和理化特性，并与脂蛋白（ａ）［Ｌｐ（ａ）］和ａｐｏＢ的分布进行比较。方法应用免疫组织化学、电镜、免疫电镜以及生物化学等方法进行定性或定量分析。结果ＭＤＡ和ＨＮＥ－ａｐｏＢ在细胞外基质中的分布与Ｌｐ（ａ）和ａｐｏＢ一致，但在泡沫细胞内则有不同。ＭＤＡ－ａｐｏＢ和ＨＮＥ－ａｐｏＢ在泡沫细胞内呈环状、孔状分布，与蜡样色素相似。病变动脉内膜低密度脂蛋白的超微结构、化学成分及电泳行为均与体外修饰脂蛋白相似，其醛类修饰ａｐｏＢ含量明显高于无病变者。结论脂蛋白的氧化性修饰是动脉粥样硬化发生的必要条件。
- 汪晓松陈琪朱清於庄一义魏恩会陈秀英魏恩会GuntherJurgens
- 关键词：动脉粥样硬化脂蛋白丙二醛主动脉
- 银菊降脂茶调节大鼠血脂作用的实验研究被引量：2
- 1999年
- 用实验性高脂血症大鼠研究了银菊降脂茶调节血脂的作用。结果显示：银菊降脂茶低、中、高剂量组大鼠血中胆固醇含量分别降低 １４３％ 、１８１０％ 、２６０ ０％ ，且呈剂量—效应关系，表明银菊降脂茶具有调节血脂的作用。
- 王南陈琪魏恩会陈秀英
- 关键词：胆固醇高脂血症中药药理学
- 冻干蜂王浆延缓衰老的实验研究被引量：3
- 2001年
- 王南范乐明陈秀英魏恩会
- 关键词：蜂王浆过氧化脂质延缓衰老
- 卡波济肉瘤相关疱疹病毒编码IL-6基因的分离克隆及在NIH3T3细胞中的表达研究被引量：8
- 2006年
- 目的:分离克隆卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)编码IL-6基因(vIL-6),并导入NIH3T3细胞中进行真核表达。方法:根据KSHV编码IL-6基因核苷酸序列设计一对引物,在引物的5′端分别引入BamHⅠ、HindⅢ酶切位点,以原发性渗出性淋巴瘤(PEL)细胞系BCBL-1细胞总DNA为模板,PCR扩增vIL-6基因,PCR产物经双酶切克隆进真核载体pcDNA3.1(+)。进一步在原有的下游引物5′端加上一段flag序列,以经过序列测定正确的重组质粒为模板,PCR扩增vIL-6-flag融合基因,构建含vIL-6-flag的重组质粒。将该质粒转染NIH3T3细胞,经G418筛选获细胞抗性克隆。最后用抗flagM2单克隆抗体进行Westernblot检测vIL-6在NIH3T3细胞中的表达。结果:获得vIL-6-flag融合基因,全长671bp,其中vIL-6基因核苷酸序列与GenBank中所登记的KSHVvIL-6基因呈现100%同源性。Westernblot结果显示,在约25ku位置有目的条带,与预期的重组vIL-6-flag融合蛋白大小一致。结论:KSHVvIL-6编码基因在NIH3T3细胞中初步获得表达。
- 陈秀英卢春程林曾怡姚水洪秦娣
- 关键词：卡波济肉瘤相关疱疹病毒真核表达
- 高脂血症敏感兔肝组织差减cDNA文库的构建被引量：1
- 2002年
- 目的:构建高脂血症敏感兔肝组织差异表达基因的抑制差减cDNA文库。方法:分别从兔高脂血症敏感组和非敏感组肝组织分离mRNA,合成双链cDNA,酶切后将敏感组cDNA分成两组,分别与不同的接头连接,再通过两轮差减杂交和两次抑制性PCR得到两者之间差异表达的cDNA。将PCR产物与T/A载体连接构建差减cDNA文库。挑取克隆进行PCR扩增鉴定。结果:构建的差减cDNA文库包含500个克隆,其中463个有插入片段,大小范围在250～700bp之间。结论:用抑制性差减杂交及T/A克隆技术成功构建了高脂血症敏感兔差异表达基因差减cDNA文库。
- 李晓宇唐震何龙嵇曙强陈秀英陈琪
- 关键词：高脂血症肝组织CDNA文库抑制性差减杂交
