颜春晓
- 作品数：5 被引量：10H指数：2
- 供职机构：山东省医药生物技术研究中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 子宫内膜癌血管生成相关因子研究进展被引量：2
- 2012年
- 子宫内膜癌的发生、发展、侵袭及转移与血管生成密切相关。近年来对子宫内膜癌血管生成相关因子进行了大量研究，研究表明子宫内膜癌血管生成是多因子参与的复杂过程。
- 颜春晓盛修贵
- 关键词：子宫内膜肿瘤血管内皮生长因子类血管生成抑制剂
- 人子宫内膜癌血管内皮细胞的分离鉴定及生物学特性检测被引量：3
- 2012年
- 目的建立人子宫内膜癌血管内皮细胞分离纯化及体外培养方法，观察所分离的人子宫内膜癌血管内皮细胞的生物学特性。方法采用优化的CD31单克隆抗体交联免疫磁珠法，对子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织标本进行血管内皮细胞分选、鉴定、纯度检测及体外培养。应用四甲基偶氮唑蓝（MTY）法、划痕实验、Transwell侵袭小室模型、Matrigel胶体外管腔形成实验，比较人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的增殖、迁移、侵袭和管腔形成能力。结果分选获得的两种血管内皮细胞纯度均〉95％，体外培养呈现典型的内皮细胞形态特征，表面均表达特异性标志物CD31和vW因子。MTT法检测结果显示，人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的增殖水平差异无统计学意义（P=0．173）。人子宫内膜癌血管内皮细胞和正常子宫内膜血管内皮细胞的划痕修复面积百分比分别为（37．54±5．63）％和（16．37±2．88）％，穿膜细胞数分别为（189±31）个／高倍视野和（131±22）个／高倍视野，形成的血管管腔样结构分别为（62±16）个和（35±11）个。与正常子宫内膜血管内皮细胞比较，人子宫内膜癌血管内皮细胞的划痕修复面积明显增加（P=0．006），穿膜细胞数显著增多（P=0．033），形成的血管管腔样结构明显增加（P=0．029）。结论采用优化的免疫磁珠分选法可高纯度地分离纯化出子宫内膜癌和正常子宫内膜组织中的血管内皮细胞。与正常子宫内膜血管内皮细胞比较，人子宫内膜癌血管内皮细胞的迁移、侵袭和血管生成能力明显增强。
- 杜雪莲盛修贵颜春晓刘婷路春华王聪于浩李庆水
- 关键词：子宫内膜肿瘤内皮细胞免疫磁珠新生血管化病理性
- 子宫内膜癌组织HEEC中肿瘤血管生成相关的差异表达基因的筛选及验证被引量：2
- 2012年
- 目的筛选并验证子宫内膜癌和正常子宫内膜组织人子宫内膜血管内皮细胞（HEEC）中肿瘤血管生成相关的差异表达基因。方法（1）选取山东省肿瘤医院2007年6—11月间收治的5例子宫内膜癌患者的癌组织（内膜癌组1）以及5例因妇科良性病变行子宫切除术患者的正常子宫内膜组织（对照组1）标本，分离两组HEEC，应用基因芯片技术检测子宫内膜癌组织HEEC中差异表达基因（指差异表达倍数〉2或〈0．5者，其中差异表达倍数〉2者为上调基因、差异表达倍数〈0．5者为下调基因），筛选出其中与肿瘤血管生成密切相关的基因。（2）另选取2007年1月-2008年4月间收治的36例子宫内膜癌患者的癌组织（内膜癌组2）以及10例因妇科良性病变行子宫切除术患者的正常子宫内膜组织（对照组2）标本，实时定量PCR技术和免疫组化法验证两组HEEC中差异表达上调基因——内皮细胞特异分子1（ESMl）、基质金属蛋白酶（MMP）10、骨桥蛋白（SPP1）、高移动族框1（HMGBl）mRNA和蛋白的表达。比较实时定量PCR技术和免疫组化法检测结果与基因芯片技术检测结果的一致性。结果（1）基因芯片技术检测显示，从内膜癌组1和对照组1中共筛选出317个差异表达基因，其中191个为上调基因、126个为下调基因。上调基因主要包括与细胞外基质功能、细胞周期调节相关的基因，其中与肿瘤血管生成相关的差异表达基因97个；下调基因主要包括具有潜在抗血管生成和增殖作用的基因，其中与肿瘤血管生成相关的差异表达基因44个。（2）实时定量PCR技术检测显示，内膜癌组2HEEC中ESM1、MMP-10、SPP1、HMGB1 mRNA的表达水平分别为0．898、3．890、1．443、1．881，分别与对照组2（分别为0．112、0．323、0．045、0．414）比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化法检测显示，内膜癌组2HEEC中SPP1�
- 杜雪莲盛修贵颜春晓刘婷王聪宋趣清李庆水
- 关键词：子宫内膜肿瘤子宫内膜寡核苷酸序列分析
- 免疫磁珠法原代分离培养人子宫内膜癌微血管内皮细胞及鉴定被引量：2
- 2012年
- 目的:建立人子宫内膜癌(EC)微血管内皮细胞的原代分离培养方法并研究其体外免疫组化特征。方法:采用免疫磁珠法结合胶原酶消化法及筛网过滤法分离纯化EC微血管内皮细胞,采用含有20%胎牛血清的M199培养。通过光镜、细胞免疫荧光技术对所获得的微血管内皮细胞进行鉴定,流式细胞仪检测微血管内皮细胞的纯度。微血管内皮细胞的生长曲线通过MTT法测定。结果:微血管内皮细胞台盼蓝拒染率为90%,纯度95%,并能连续传代。原代细胞7～9d完全融合,传代培养后5～6d可传代1次。细胞单层生长,融合后呈铺路石样具有接触抑制现象。免疫荧光证实,传代细胞表达内皮细胞特异性vWF因子及细胞间黏附蛋白CD31。经MTT法测定得到的微血管内皮细胞体外生长曲线呈"S"型。结论:成功建立了人EC微血管内皮细胞的分离培养方法,所获得的细胞可用于EC的相关研究,为探讨EC的临床治疗方法提供了新的平台。
- 颜春晓盛修贵杜雪莲
- 关键词：子宫内膜肿瘤微血管内皮细胞细胞培养技术免疫磁珠
- 人卵巢上皮癌微血管内皮细胞分离培养与鉴定被引量：1
- 2013年
- 目的:建立人卵巢上皮癌微血管内皮细胞的原代分离纯化及培养方法。方法:收集2012-03-01-2012-10-31山东省肿瘤医院妇瘤科手术切除的卵巢上皮癌标本21例,采用胶原酶消化法分离人卵巢上皮癌微血管内皮细胞,免疫磁珠法提取纯化内皮细胞。采用形态学观察,免疫荧光技术及自发管腔形成实验对提取的内皮细胞进行鉴定;流式细胞仪检测细胞纯度;MTT法测定细胞增殖并绘制细胞生长曲线。结果:提取人卵巢微血管内皮细胞呈圆形或类圆形,周围有抗CD31免疫磁珠附着,活细胞计数测定>95%,流式细胞仪检测纯度>95%,细胞贴壁后呈长梭形、星形或多角形,胞内含有CD31磁珠,3～6d细胞间互相融合呈单层片状生长,铺满后呈典型铺路石样特征,荧光显微镜下观察表达内皮细胞特异性标志vWF,管腔形成实验证实体外有二维管腔形成。通过观察发现,内皮细胞24h内贴壁,7～11d可完全融合并出现接触抑制现象。通过MTT法测定内皮细胞生长分为增殖期、对数增长期和平台期3个阶段,生长曲线为"S"型。结论:应用免疫磁珠法成功建立了一种操作简单,且可获得纯度高和活性好的人卵巢上皮癌微血管内皮细胞分离及原代培养体系。
- 刘婷杜雪莲盛修贵颜春晓王学政蔡维望
- 关键词：上皮内皮细胞血管荧光免疫测定流式细胞术原代培养
