高地
- 作品数：10 被引量：149H指数：3
- 供职机构：复旦大学附属中山医院皮肤科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 丹参对系统性硬化病高胶原合成成纤维细胞克隆Ⅰ型前胶原基因转录的调控
- 2011年
- 目的探讨丹参对系统性硬化病患者皮损高胶原合成成纤维细胞克隆Ⅰ型前胶原基因转录的调控。方法采用系统性硬化病患者皮损和正常人皮肤胶原合成异质性成纤维细胞克隆，通过四甲基偶氮唑盐比色法，检测1g／L丹参注射液及其主要水溶性单体（20mg／L丹参素钠、5mg／L丹酚酸B、5mg／L原儿茶醛）和脂溶性单体（5mg／L丹参酮ⅡA）对系统性硬化病和正常人高、低胶原合成克隆增殖活性（A490）的影响。利用瞬时转染、双荧光素酶报告基因技术，检测上述药物对克隆Ⅰ型前胶原仅1链（COL1A1）基因近端启动区活性的调控。结果在早期（≤3d），丹参注射液及单体对成纤维细胞克隆增殖的抑制不显著（P〉0．05）。但随作用时间延长，它们对克隆增殖的抑制作用多逐渐增强，第5天，丹参注射液组与水溶性阴性对照组比较，差异有统计学意义（q’=3．22，P〈0．01）；第7天，丹参注射液组、丹酚酸B组和原儿茶醛组与水溶性阴性对照组比较，差异均有统计学意义（q’分别为4．74、3．03、2．56，P值均〈0．05）。第5天和第7天，丹参酮ⅡA组与脂溶性阴性对照组比较，差异均有统计学意义（t值分别为2．22和2．15，P值均〈0．05）。丹参注射液、丹参酮ⅡA和原儿茶醛抑制系统性硬化病和正常人成纤维细胞克隆中COL1A1近端启动区的活性（P〈0．01），前两种药优先下调系统性硬化病高胶原合成克隆中COL1A1近端启动区的活性，COL1A1近端启动区在系统性硬化病高、低胶原合成克隆中的活性水溶性阴性对照组为12．019±0．830和5．388±0．480，丹参注射液组为4．445±1．061和2．856±0．597，F=31．78，P〈0．01；脂溶性阴性对照组为14．155±0．672和4．299±0．252，丹参酮ⅡA组为9．638±0．854和3．192±0．450，F=24．10，P〈0．01。结论丹参可抑制系统性硬化病高胶原合成成纤�
- 朱鹭冰高地李明
- 关键词：成纤维细胞克隆细胞丹参
- 转化生长因子β1、结缔组织生长因子和干扰素-γ对系统性硬化病胶原合成异质性成纤维细胞克隆胶原基因转录的调控被引量：2
- 2011年
- 目的:研究3种促/抗纤维化细胞因子-转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和干扰素γ(IFN-γ)对系统性硬化病(SS)患者皮损成纤维细胞(Fb)克隆胶原基因转录的调控。方法:采用含有人Ⅰ型、Ⅲ型前胶原α1链(COL1A1,COL3A1)基因近端转录调控序列的重组质粒,利用瞬时转染、双荧光素酶报告基因技术检测TGF-β1、CTGF和IFN-γ对SS患者皮损和健康人皮肤胶原合成异质性Fb克隆COL1A1和COL3A1近端启动区活性的调控。结果:TGF-β1(5μg/L)上调COL1A1近端启动区在SS患者和健康人Fb克隆及COL3A1近端启动区在健康人Fb克隆中的活性;CTGF(20μg/L)上调COL1A1、COL3A1近端启动区在SS患者和健康人Fb克隆中的活性,且在SS患者Fb优先上调COL3A1近端启动区在低胶原合成克隆中的活性。IFN-γ(100μg/L)上调COL3A1近端启动区在SS患者低胶原合成Fb克隆中的活性,未发现其显著改变COL1A1近端启动区在SS患者和健康人Fb克隆、COL3A1近端启动区在健康人Fb克隆中的活性。结论:在胶原基因转录水平,SS高胶原合成Fb克隆对外源性细胞因子的反应呈现下降趋势;IFN-γ不抑制SS和健康人Fb克隆COL1A1和COL3A1近端启动区的活性。
- 朱鹭冰高地李明
- 关键词：硬皮病成纤维细胞克隆细胞胶原
- 系统性硬皮病患者皮肤克隆成纤维细胞胶原代谢的异质性被引量：2
- 2010年
- 目的在克隆水平上研究系统性硬皮病(SSc)和正常皮肤成纤维细胞(FB)胶原代谢异质性的特点。方法以皮肤克隆FB作为研究对象,采用实时荧光定量RT-PCR法检测其Ⅰ,Ⅲ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMP-1,MMP-3)mRNA水平;采用酶联免疫吸附法检测其细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白的表达,筛选出具有不同胶原合成能力的异质性克隆,分析其胶原代谢的特点。结果 SSc和正常皮肤克隆FB的胶原代谢均具有异质性,SSc患者克隆FBⅠ,Ⅲ型前胶原mRNA水平的异质性较正常人大(F=20.540,P=0.000;F=6.822,P=0.012),SSc患者Ⅰ型前胶原mRNA高表达克隆的比例高于正常人(48.0%vs14.3%);SSc和正常皮肤克隆FB细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白水平与其mRNA水平均存在正相关关系(r=0.873,P=0.000;r=0.538,P=0.039)。结论 SSc和正常皮肤克隆FB的胶原代谢均具有异质性。
- 高地朱鹭冰李明
- 关键词：成纤维细胞克隆细胞胶原
- 系统性硬化病成纤维细胞单克隆Ⅰ型前胶原基因转录特性的研究被引量：3
- 2009年
- 目的探讨系统性硬化病（ss）患者皮损成纤维细胞高胶原合成克隆的发生机制。方法通过原位杂交法检测成纤维细胞克隆Ⅰ型前胶原理1链（COL1A1）mRNA表达，并将成纤维细胞克隆依COL1A1mRNA水平分为高、中、低组。构建5个含有人COL1A1基因不同长度转录调控序列的重组质粒，应用瞬时转染、荧光素酶报告基因技术检测5个COL1A1基因转录调控序列在不同组别成纤维细胞克隆中的启动活性。结果SS组和正常对照组不同成纤维细胞克隆COL1A1mRNA水平都具有明显差异，ss组高表达COL1A1mRNA的成纤维细胞克隆所占的比例（50．O％）高于正常对照组（12．5％），SS组成纤维细胞克隆的平均COL1A1mRNA水平显著高于正常对照组（t=3．690，P〈0．01）。5个COL1A1上游转录调控序列中-174～＋42bp在SS组和正常对照组不同成纤维细胞克隆均具有最强启动活性。COL1A1转录调控序列的活性与成纤维细胞克隆的COL1A1mRNA水平呈正相关。结论ss高胶原合成的成纤维细胞克隆的COL1A1基因在转录水平即被激活。
- 朱鹭冰高地李明
- 关键词：成纤维细胞
- 系统性硬皮病患者皮肤成纤维细胞克隆与生长异质性被引量：2
- 2009年
- 目的分离系统性硬皮病(SSc)和正常皮肤成纤维细胞(FB)克隆,观察其形态和生长特性。方法采用改良的有限稀释法分离SSc和正常皮肤FB克隆,光镜下观察克隆FB细胞形态,应用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果SSc和正常皮肤克隆FB的细胞形态均有异质性,主要分为细小梭形细胞、粗长梭形细胞和大多角形细胞3种。细胞形态呈大多角形的克隆增殖很慢,难以传代和冻存。与细胞形态呈细小梭形的克隆相比,呈粗长梭形的克隆增殖速度较慢,细胞倍增时间较长,G0/G1期细胞比例较高(P<0.05),S+G2/M期细胞比例较低(P<0.05)。SSc和正常皮肤克隆FB的细胞形态和生长特性经数次传代保持稳定。结论SSc和正常皮肤克隆FB的细胞形态和生长特性均有异质性。
- 高地朱鹭冰李明
- 关键词：硬皮病成纤维细胞克隆细胞有限稀释法
- 带状疱疹后神经痛及其防治被引量：123
- 2002年
- 带状疱疹后神经痛是带状疱疹常见的并发症 ,在老年患者中发生率更高 ,疼痛更顽固 ,严重影响生活质量。关于它的定义仍没有统一的意见。对带状疱疹后神经痛的临床特征、发病机制。
- 高地李明
- 关键词：带状疱疹神经痛PHN并发症
- 细胞因子TGFβ1,CTGF和IFN-γ对系统性硬皮病克隆成纤维细胞胶原代谢的影响被引量：13
- 2012年
- 目的研究细胞因子(TGFβ1,CTGF和IFN-γ)对系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞胶原代谢的影响。方法采用实时荧光定量RT-PCR法检测细胞因子(TGFβ1,CTGF和IFN-γ)对系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞Ⅰ型前胶原和MMP-1 mRNA水平的影响情况。结果 TGFβ1(5ng/mL)作用48h仅使具有低胶原合成能力的系统性硬皮病克隆成纤维细胞的Ⅰ型前胶原mRNA水平上升(1.20±0.50vs0.04±0.04,P=0.001);CTGF(20ng/mL),IFN-γ(100ng/mL)作用48h使系统性硬皮病克隆成纤维细胞MMP-1 mRNA水平下降(F=6.221,P=0.034;F=53.505,P=0.000),且具有高胶原合成能力的克隆成纤维细胞MMP-1 mRNA水平下降幅度大(F=8.817,P=0.016;F=8.092,P=0.019)。结论系统性硬皮病具有不同胶原合成能力的克隆成纤维细胞Ⅰ型前胶原和MMP-1 mRNA水平对细胞因子的反应存在异质性。
- 高地朱鹭冰李明
- 关键词：成纤维细胞胶原TGFΒ1CTGFIFN-Γ
- 系统性硬皮病患者外周血单个核细胞对皮肤克隆成纤维细胞胶原代谢的影响
- 2012年
- 目的:探讨系统性硬皮病(systemic scleroderma,SSc)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PB-MCs)对具有不同胶原合成能力的皮肤克隆成纤维细胞的胶原代谢的影响。方法:采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测系统性硬皮病患者和健康对照者PBMC培养上清液对具有不同胶原合成能力的皮肤克隆成纤维细胞中的Ⅰ型前胶原和基质金属蛋白酶-1(matrix metalloproteinase-1,MMP-1)的mR-NA水平的影响。结果:在体外培养的系统性硬皮病皮肤克隆成纤维细胞中加入10%患者PBMC培养上清液继续培养48h,仅使具有低胶原合成能力的SSc克隆成纤维细胞的Ⅰ型前胶原和MMP-1的mRNA水平上升[(0.70±0.29)比(0.07±0.08),P=0.001;(0.75±0.16)比(0.09±0.20),P<0.001];而加入10%健康对照PBMC培养上清液继续培养48h,仅使具有高胶原合成能力的SSc克隆成纤维细胞的Ⅰ型前胶原的mRNA水平下降[(-0.24±0.08)比(0.12±0.10),P=0.024],同时使具有高、低胶原合成能力的SSc克隆成纤维细胞的MMP-1mRNA水平上升(P=0.003;P<0.001),且具有低胶原合成能力的克隆成纤维细胞MMP-1mRNA水平上升幅度大[(1.27±0.23)比(0.56±0.08),P=0.000]。结论:SSc具有不同胶原合成能力的皮肤克隆成纤维细胞的Ⅰ型前胶原和MMP-1的mRNA水平对PBMC的反应存在异质性。
- 高地朱鹭冰李明
- 关键词：系统性硬皮病成纤维细胞克隆细胞胶原外周血单个核细胞
- 系统性硬化病成纤维细胞单克隆Ⅲ型前胶原基因转录特性及丹参对其的调控研究被引量：2
- 2012年
- 目的探讨系统性硬化病（ss）患者皮损成纤维细胞单克隆Ⅲ型前胶原基因的转录特性及丹参对其的调控。方法构建含有人Ⅲ型前胶原仅1链（COL3A1）基因不同长度转录调控序列的重组质粒，利用瞬时转染、双荧光素酶报告基因技术检测其在ss患者皮损和正常人皮肤胶原合成异质性成纤维细胞克隆中的活性，并筛选出COL3A1近端转录调控靶序列。再通过转染、报告基因测活技术测定丹参注射液及其主要单体（丹参素钠、丹酚酸B、原儿茶醛和丹参酮ⅡA）对ss和正常人胶原合成异质性成纤维细胞克隆COL3A1近端启动区活性的调控。应用SPSS15．0软件进行统计学分析，基因转染、测活实验中。phCOLH30．1活性的比较采用t检验；丹参干预实验中，phCOLH，0．1活性的比较采用双因素方差分析，若两因素存在交互作用，再进行单因素方差分析；若无交互作用，去除交互项，检验主效应。结果6个COL3A1转录调控序列中，近端启动区-96bp-＋16bp在SS组和正常对照组不同成纤维细胞克隆具有最高或较高的活性，且其活性与克隆的胶原合成能力呈正相关。丹参注射液下调COL3A1近端启动区在ss组（阴性对照组高、低胶原合成克隆COL3A1近端启动区相对活性分别为3．879±0．309和2．150±0．262，丹参注射液组分别为2．261±0．619和1．462±0．291，与阴性对照组相比，P均〈0．01）和正常对照组高、低胶原合成克隆中的活性（阴性对照组分别为3．039±0．271和2．223±0．247，丹参注射液组分别为1．681±0．263和1．121±0．361，与阴性对照组相比，P均〈0．01）。丹酚酸B下调COL3A1近端启动区在Ss组高胶原合成克隆中的活性（为2．309±0．524，与阴性对照组高胶原合成克隆相比，P〈0．01）和在正常对照组高、低胶原合成克隆中的活性（分别为2．126±0．320和1．976±0．362，与阴性对照组相比，P�
- 朱鹭冰高地李明
- 关键词：硬皮病成纤维细胞克隆细胞丹参
- Th17在SLE的组织定位和外周血单一核细胞中的比例被引量：4
- 2009年
- 目的探讨产生IL-17的CD4’T细胞（Th17）在SLE患者组织中的定位，以及与狼疮活动的关系。方法共聚焦显微镜、免疫荧光双标技术、免疫组化和HE染色，分析Th17细胞亚群在4例活动期SLE患者和2例正常人外周血单一核细胞中、皮损组织和肺组织中的定位。流式细胞仪检测50例SLE患者和15例正常人对照外周血Th17的比例，RT—PCR检测相关细胞因子基因表达，用ELISA检测血清中IL-17的分泌水平。结果在活动期狼疮患者外周血单一核细胞中可见有Th17细胞，其IL—17的荧光强度为（127．6±20．5），明显高于正常人IL-17荧光强度，其值为（40．6±11．1），P〈0．001。在活动期SLE患者受损的皮肤组织和肺组织中可见有Th17细胞的浸润，而正常人皮肤未见有Th17细胞的浸润。活动期SLE患者外周血中Th17比例明显增加，且与SLE活动指数（SLEDAI）呈正相关。相关细胞因子IL-17A和IL-17F mRNA表达明显增加，血清中的IL-17水平分泌增加，活动期SLE患者中Th17增加与血管炎的发病呈正相关，经过治疗后Th17随病情缓减而减少。结论Th17细胞亚群在活动期SLE患者体内扩增，其扩增与SLE活动密切相关，可能参与SLE血管炎的发生。
- 杨骥杨雪张菊莉储以微朱鹭冰高地李明
- 关键词：TH17细胞因子类
