高青梅
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：同济大学附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划上海市科技人才计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 2种CCK-8试剂最佳实验条件比较被引量：5
- 2012年
- 在细胞学实验中，MTT（噻唑蓝）比色法常用于细胞毒性、细胞活性和细胞增殖的检测。因MTT法具有简便、经济、安全等特点，而被广泛使用，但其操作较繁琐，需加入二甲基亚砜（DMSO）溶解甲腆颗粒，且往往因溶解不全而对实验结果造成影响，为克服MTT法的不足，近年来出现了另外一些检测试剂，如XTr试剂、MTS试剂，国外研发出了1种新型的检测方法CCK-8（cellcountingkit-8），其原理为活细胞线粒体脱氢酶转化的黄色结晶为高度水溶性，
- 梁伟高青梅张文君秦伟陆惠娜黄滨滨梁爱斌
- 关键词：CCK-8细胞活性试剂比较
- F17.靶向沉默SENP1基因应用于NHL基因治疗的初步探讨
- 梁爱斌高青梅黄滨滨
- 文献传递
- 特发性血小板减少性紫癜血小板生成素的测定及其临床意义被引量：2
- 2012年
- 目的研究特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患者血清血小板生成素(thrombopoientin,TPO)水平改变与疗效的关系。方法选取我院45例ITP患者(ITP组)和25例体检正常者(对照组),应用酶联免疫吸附法定量检测2组患者治疗前后TPO浓度,同时分别采用血细胞分析仪及骨髓涂片法检测治疗前后ITP患者外周血血小板和骨髓巨核细胞的数量,并根据治疗1个月后患者的疗效情况,将ITP患者分为治疗有效组和治疗无效组。结果 ITP组与对照组相比,血小板计数及巨核细胞计数差异显著,具有统计学意义(P<0.05),而TPO浓间差异无显著性,不具有统计学意义(P>0.05);治疗前,ITP组中治疗无效组的TPO浓度明显高于治疗有效组和对照组(P>0.05),而巨核细胞计数明显低于治疗有效组和对照组。结论血清TPO水平在ITP患者预后判断中具有重要意义。
- 高青梅梁爱斌
- 关键词：特发性血小板减少性紫癜血小板生成素疗效
- 利用siRNA靶向沉默Jeko-1细胞survivin mRNA基因的实验研究被引量：6
- 2012年
- 本研究旨在探讨Survivin基因在淋巴瘤细胞中的生物学作用,为将来以Survivin为靶点治疗套细胞淋巴瘤提供实验室证据。体外化学合成针对survivin mRNA基因的siRNA片段,通过DMRIE-C转染Jeko-1细胞,以无关siRNA、未转染的细胞为对照,采用RT-PCR和Western blot方法检测siRNA的抑制效果,利用流式细胞术检测细胞的凋亡率,用CCK-8法检测转染24、48、72 h对细胞增殖的影响。结果表明,与未转染的空白组相比,siRNA转染Jeko-1细胞后24、48、72 h survivin mRNA的相对表达量分别为0.49±0.03、0.38±0.02和0.17±0.02;细胞增殖抑制率分别为(31.2±2.1)%、(43.3±3.4)%和(52.6±2.5)%;细胞凋亡率分别为(6.3±0.5)%、(13.5±1.1)%和(23.6±1.6)%;survivin蛋白表达水平逐步减低。结论:靶向survivin的siRNA能在体外特异性下调目的基因survivin mRNA和蛋白的表达,表现出抑制Jeko-1细胞增殖和促使其凋亡的生物学效应,survivin基因有望成为淋巴瘤治疗的一个药物靶点。
- 梁伟张文君高青梅陆惠娜黄滨滨修冰梁爱斌
- 关键词：淋巴瘤SIRNA基因沉默SURVIVIN
- IL-21诱导SUDHL-4细胞凋亡的作用及其机制
- 2012年
- 目的探讨IL-21对弥漫大B淋巴瘤（DLBCL）细胞系SUDHL4细胞凋亡的影响及其相关机制。方法用不同浓度IL-21（终浓度1、10、100、1000ng／m1）处理SUDHL4细胞不同时间（24、48、72h），用CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制率，绘制细胞增殖抑制曲线，计算IC50值；用流式细胞术检测细胞凋亡；用Westernblot法检测IL-21处理后SUDHL-d细胞caspase-9、caspase-3、cleavedcaspase-3、Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax和c-myc蛋白表达。用RT-PCR法检测Bcl-2、Bcl-XL、Bid、Bax、c-myc和Sur-vivin基因mRNA表达。结果IL-21可明显抑制SUDHL4细胞增殖，且呈时间-剂量依赖性，其48h半数抑制浓度（IC50）为140．9ng／ml。流式细胞术分析发现100ng／mlIL-21处理的SUDHL-4细胞48h凋亡率（AnnexinV-FITC^＋细胞率）明显增加[（19．7±2．3）％]，同时caspase-9、caspase-3、Bcl-2和Bcl-XL蛋白表达减低，均呈时间依赖性。cleavedcaspase-3从48h开始出现明显的剪切带；Bax和c-myc蛋白表达明显增高，而Bid蛋白表达变化不明显。RT-PCR检测显示IL-21上调c-myc和Bax基因mRNA的表达，下调Bcl-2和Bcl-XL基因mRNA的表达，Bid和Survivin基因mRNA表达变化不明显。结论IL-21可抑制SUDHL-4细胞增殖，诱导细胞凋亡，其作用可能是通过c-myc和Bcl-2基因调节的线粒体途径实现。
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- 关键词：白细胞介素21细胞凋亡
- YM155对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及机制初探被引量：1
- 2012年
- 目的研究生存素（survivin）抑制剂YMl55对滤泡淋巴瘤细胞的凋亡效应及作用机制，为应用YMl55治疗淋巴瘤提供实验依据。方法培养滤泡淋巴瘤细胞株SUDHL-4至对数生长期，加入YMl55形成一系列浓度梯度：100、10…101、0rig／ml，培养24、48、72h后进行活细胞计数试剂盒（CCK）8实验，观察YMl55对其生长抑制效应，计算其细胞半数抑制药物浓度（IC50）。加入YMl55至培养瓶中使其药物浓度为1．g／ml，培养24、48、72h进行流式细胞术检测，膜联蛋白（Annexin）V一异硫氰酸荧光素（FITC）／碘化丙啶（PI）双染法观察细胞凋亡情况。选取不加药的对照组和加YMl55后24、48h的实验组细胞抽提总RNA，然后进行反转录PCR（RT．PCR）检测48h时抗凋亡基因bcl-2、bcl．xl、survivin和促凋亡基因bid、bax的mRNA的相对表达量，检测24h时survivinmRNA的相对表达量。同时抽提各个时间点的总蛋白用Western印迹技术检测survivin、半胱氨酸蛋白酶（caspase）9、活化的caspase-9、caspase-3和活化的caspase一3蛋白的表达量。结果YMl55对SUDHL-4具有明显的生长抑制效应且呈剂量和时间依赖性，24、48、72h的Ic，。分别为6．1、2．7、1．2ng／ml。用流式细胞仪分析发现细胞凋亡比例随时间的推移逐步增加（17．3％4-2．1％、35．7％-4-3．3％、54．6％±4．3％比2．1％-t-O．3％，均P〈0．05）；PCR结果显示YMl55作用后24和48h下调survivin基因mRNA的表达（0．72±0．02、0．56±0．01比1．00，均P〈0．05），但bcl．2家族基因表达变化不显著（P〉0．05）。Western印迹检测发现随着时间的推移，survivin、caspase．3蛋白的表达逐渐减低，caspase-9和活化的caspase-9蛋白表达没有明显变化，而活化的easpase-3表达逐渐增加。结论YMl55能够有效促进淋巴瘤SUDHL-4细胞株凋亡，其机制可能是由于survivin蛋白下调绕过caspase-9直接激活下游easpase-3，从而切�
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- 关键词：淋巴瘤细胞凋亡
- FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病的临床观察被引量：3
- 2011年
- 目的探讨氟达拉滨联合中剂量阿糖胞苷即FA方案巩固强化治疗急性髓系白血病(acute myeloidleukemia,AML)的临床疗效及副作用。方法观察组28例AML患者采用FA方案进行巩固强化治疗,氟达拉滨30 mg/m2(1～3 d),静脉滴注,阿糖胞苷2 g/m2,(1～3 d),静脉滴注,阿糖胞苷在氟达拉滨结束后4 h应用。同期对照组10例AML患者采用大剂量阿糖胞苷进行巩固强化治疗,即Ara-C 3 g/m2,q12 h×3 d。结果 FA组28例AML患者CR时间为109～1 735 d,14例患者持续完全缓解(continuous complete remission,CCR)2年以上,(3年)生存率为21.4%,1 300 d(>3年)的生存率为14.3%,与大剂量阿糖胞苷组没有统计学差异。7例患者于CCR后3～47个月复发,复发患者均存在各种不良预后因素,至少处于中高危分级。不良反应主要为骨髓抑制和继发感染,但总体而言骨髓抑制时间较短,非血液毒性较轻,住院时间在3周左右。结论氟达拉滨能提升胞内Ara-CTP浓度,增强抗白血病作用。FA方案多疗程巩固治疗低中危AML,能减少AML复发,提高总体生存率和无病生存率,临床疗效肯定,不良反应较少,值得进一步深入研究。
- 陆惠娜秦伟高青梅张文君熊红梁爱斌
- 关键词：急性髓系白血病
