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大鼠视网膜微血管周细胞的选择性培养被引量：2: 2014年; 背景视网膜微血管周细胞（RMPs）在糖尿病视网膜病变（DR）等视网膜新生血管性疾病中的作用日益受到重视，并被视为潜在的治疗靶点。然而因组织材料来源受限及细胞分离纯化不易，RMPs体外研究工作的开展受到了限制。目的建立简便的大鼠RMPs分离、培养和纯化方法。方法摘取清洁级健康雄性SD大鼠的眼球，置于体积分数75％乙醇中浸泡1min，用眼科显微手术器械分离获取视网膜并将其剪成碎片，依次用2．5g／L胰蛋白酶和2g／LⅠ型胶原酶各消化15min，消化后分别过直径100μm和55μm滤网，收集视网膜消化后的微血管片段，用含有体积分数20％胎牛血清的低糖型DMEM接种于6孔板，至培养14～16d细胞达到80％～90％融合时进行消化传代，培养和传代期间通过换液法及差异消化法去除杂质细胞。用倒置相差显微镜观察细胞的形态和生长状态，用免疫荧光法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）、血小板源性生长因子受体-β（PDGFR—β）、von Willebrand因子（vWF）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，以鉴定RMPs。结果RMPs在接种后24—48h自微血管片段中迁移出，7d后形成中等大的细胞集落，14～16d后达到80％-90％融合状态。RMPs传代后生长速度加快，至12—14d达到融合。形态学鉴定显示，培养的细胞呈宽大、扁平、不规则形并伴多个突起的典型周细胞形态特征，且传代至第9代形态特征无明显变化。免疫荧光法检测显示，所培养的细胞均不表达内皮细胞特异性标志物vWF，约96％的细胞对周细胞标志物α—SMA或PDGFR—β抗体呈阳性反应，极少量细胞对胶质细胞特异性标志物GFAP抗体呈阳性表达。结论本实验成功建立了一种简单、经济的大鼠RMPs分离、纯化、培养方法，可以获得理想的高纯度RMPs。; 刘光辉孟春徐朝阳刘安黄以鹏黄陈稳; 关键词：视网膜微血管周细胞纯化

IHC二抗放大检测系统质控片的制备及评价: 2013年; 目的本研究分别采用不同表面修饰方法处理的玻璃载玻片为基质,以一抗为对象制备二抗放大检测系统质控片。方法将小鼠IgG作为探针固定在玻片上,采用二抗放大检测系统对不同质控片的吸附结合效果进行评价。结果戊二醛预处理的载玻片和硅烷化预处理的载玻片对蛋白吸附较好,反应活性高。结论通过不同二抗放大检测系统的比较表明,MaxVisionTM和EliVisionTMSuper放大检测系统的检测灵敏度高,检测范围宽。EliVisionTMSuper放大检测系统的显示灰度值与检测对象浓度的对数值线性化程度最高。; 林齐心王小亚黄以鹏郑美云孟春; 关键词：免疫组化

一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法: 本发明提供了一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法，该方法将能够与抗体发生特异性反应的多肽或蛋白，设置不同浓度预先吸附在玻片上，或是将经过包埋的不同浓度的多肽或蛋白石蜡切片预先放置在玻片上，与病理组织切片同时...; 孟春黄以鹏王航郭养浩; 文献传递

一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法: 本发明提供了一种用于免疫组化过程质量检控的阳性参照物的制备方法，该方法将能够与抗体发生特异性反应的多肽或蛋白，设置不同浓度预先吸附在玻片上，或是将经过包埋的不同浓度的多肽或蛋白石蜡切片预先放置在玻片上，与病理组织切片同时...; 孟春黄以鹏王航郭养浩

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黄以鹏

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