黄君健
- 作品数：54 被引量：127H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- t-PA K1区的同源模建及Kringle区与赖氨酸相互作用的研究
- 1996年
- 利用同源模建方法预测了t-PAK1区的三维结构。通过结构叠合确定了t-PAK1、K2区,纤溶酶原K1、K4区及UKK区的赖氨酸结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在t-PAK2区以及纤溶酶原K1、K4区与纤维蛋白裸露的赖氨酸之间存在明显的静电势互补和疏水面契合。确定了影响Kringle区结合口袋与赖氨酸亲和的重要氨基酸,分析了t-PAK1区、UKK区不能结合赖氨酸的原因,由此设计了具有赖氨酸亲和力的新型t-PAK1区及UKK区突变体。利用模拟残基突变技术预测了突变体的结构变化,分析了突变后t-PAK1区及UKK区与赖氨酸亲和力的变化,初步在理论上肯定了设计方案的合理性。
- 王国力刘士辉黄君健俞炜源黄培堂黄翠芬
- 关键词：同源模建分子设计
- 一种新型导向溶栓剂，其制备方法及用途
- 本发明公开了一种新型导向溶栓制剂，还公开了其制备方法及用途。本发明第一部分为鼠抗人纤维蛋白单链抗体－低分子量尿激酶杂合体，其制备方法包括表达载体构建，表达，纯化，活性分析等步骤。第二部分为两种人源化鼠抗人纤维蛋白单链抗体...
- 俞炜源刘志刚黄君健林建波徐桂清
- 文献传递
- 端粒及端粒酶的研究进展被引量：3
- 2007年
- 端粒是真核细胞染色体末端的特有结构,是由端粒结合蛋白和一段重复序列的端粒DNA组成的一个高度精密的复合体,在维持染色体末端稳定性,避免染色体被核酸酶降解等方面起着重要的作用。端粒的长度、结构及组织形式受多种端粒结合因子的调控。由于端粒的重要性,在哺乳动物细胞里,端粒的长度或端粒结构变化与癌症发生及细胞衰老有密切的关系。由于末端复制问题的存在,随着细胞分裂次数的增加,端粒不断缩短,细胞不可避免的走向衰老或凋亡。由于在细胞分裂过程中端粒长度的不断缩短与细胞分裂代数增加具有相关性,即端粒长度反应了细胞的分裂次数,因此有人将端粒形象的比喻为生物时钟。在90%的癌细胞中,端粒酶被重新激活,以此来维持端粒的长度,使细胞走向永生化。简要综述了端粒、端粒酶及端粒酶结合蛋白的最新研究进展。
- 杨平勋黄君健
- 关键词：端粒端粒酶端粒结合蛋白
- MDM2与端粒保护蛋白1的相互作用及其功能
- 2014年
- 目的:探究鼠双微体2同源体(MDM2)与端粒保护蛋白1(POT1)在细胞水平是否有相互作用,及其是否发挥E3泛素化连接酶的功能。方法:首先,用蛋白酶体抑制剂MG132处理稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达情况;其次,在HeLa细胞中转入外源的Myc-MDM2和Flag-POT1质粒,48 h后收集细胞,通过免疫共沉淀方法验证Myc-MDM2和Flag-POT1是否具有相互作用;再次,在稳定表达Flag-POT1的HeLa细胞中转入Myc-MDM2或MDM2 siRNA,48 h后收集细胞,Western印迹检测Flag-POT1的表达水平。结果:MG132处理后,Flag-POT1的表达量明显升高且有拖尾现象,免疫共沉淀显示Myc-MDM2和Flag-POT1具有相互作用,但无论转入Myc-MDM2还是MDM2 siRNA,Flag-POT1的表达水平没有明显变化。结论:POT1通过泛素化途径降解,MDM2与POT1具有相互作用,但MDM2不是POT1主要的E3泛素化连接酶。
- 王亚楠金蕊马世良黄君健
- 关键词：HELA细胞免疫共沉淀
- 不同型Gsα基因缺失体在大肠杆菌中的克隆与表达
- 2000年
- 在人类的一些肿瘤中已发现存在Gsα基因突变。本研究室在白血病细胞系的研究中发现了Gsα基因的 3个缺失突变体以及野生型的Gsα(分别命名为GsαL 1,5 0 0bp ;GsαL 2 ,30 0bp ;GsαL 3,2 0 0bp和Gsα 4 ,12 0 0bp) ,并已在一些急性白血病患者中检测到。为进一步研究这些缺失体的结构、功能和生物学意义 ,作者将克隆了GsαL 1,GsαL 2和Gsα 4基因的质粒分别转化到大肠杆菌DH5α中 ,提取DNA ,采用特异引物进行PCR扩增 ,获得相应的目的基因 ,分别将其克隆到 pET2 2b(+ )表达载体上 ,再转化大肠杆菌进行表达。经培养 ,取菌体行SDS PAGE电泳分析。研究结果 :3个基因都有相应分子量的蛋白表达 ,且均以包涵体形式存在。这表明构建的这 3个基因确具完整的基因结构 ,及相应的蛋白表达。
- 楼金星黄君健司艺玲李杰之赵亚力叶棋浓黄翠芬
- 关键词：基因克隆基因表达白血病
- 雌激素信号通路在肿瘤中的调控机制
- 叶棋浓黄君健丁丽华张浩金蕊
- 该项目属于基础医学研究领域。肿瘤是危害人类健康的重大疾病，它的发生发展与癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。美国两位科学家因癌基因的发现而获得1989年诺贝尔生理学或医学奖。一些肿瘤的发生具有性别差异，如乳腺癌和肝癌，...
- 关键词：
- 关键词：肿瘤疾病
- 端粒酶反义寡核苷酸对膀胱癌T24细胞的作用被引量：4
- 2001年
- 目的 探讨全硫代修饰的端粒酶反义寡核苷酸 (ASODN t)抑制人膀胱癌T2 4细胞增殖并诱导其凋亡的可能性 ,为膀胱癌基因治疗提供新靶点。方法 采用光镜、电镜、四唑盐比色(MTT)法及流式细胞术等检测不同浓度 (2～ 10 μmol/L)ASODN t对T2 4细胞生长、细胞周期和诱导其凋亡的作用。结果 不同浓度ASODN t对T2 4细胞生长有抑制作用 ,且具有序列特异性及剂量依赖性 ,6μmol/lASODN t作用细胞 72h ,电镜观察可见典型凋亡特征 ,流式细胞仪检测到凋亡峰 ,凋亡率为 10 .4% ,而无关寡核苷酸 (N ODN )则无此作用。结论 ASODN t对T2 4细胞生长有抑制作用 ,可诱导其发生凋亡 ,说明端粒酶与T2 4细胞恶性增殖有关 。
- 符伟军邵国兴黄君健王禾徐兵李山虎
- 关键词：端粒酶脱噬作用反义寡核苷酸T24细胞
- 端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域的鉴定
- 2004年
- 目的 :鉴定端粒单链结合蛋白hPOT1核定位结构域。方法 :通过hPOT1的不同长度缺失突变体与EGFP绿色荧光蛋白融合 ,转染细胞后用荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的定位。结果 :确定了hPOT1进核序列是定位于第 35 5～ 375位氨基酸之间的富含碱性氨基酸序列 ,其中R3 72 ,R3 73 影响hPOT1的细胞核内定位。结论 :鉴定出hPOT1的核定位结构域 ,该结构域影响了hPOT1不同形式剪接体蛋白的细胞内分布。为进一步研究hPOT1在端粒末端调控中的作用提供了线索。
- 林坚陈皓白云秀金蕊张彬黄翠芬黄君健
- 关键词：HPOT1端粒DNA结合蛋白质类
- 核磷蛋白NPM1的RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定
- 2014年
- 目的:构建高效抑制核磷蛋白NPM1基因的短发夹RNA(shRNA)干扰载体。方法:以人NPM1基因为靶序列,设计并合成shRNA序列,将其连入RNA干扰慢病毒载体pll3.7;酶切鉴定插入shRNA序列片段的质粒,经测序正确后转染293T细胞;Western印迹检测得到抑制效果好的载体pll-shRNA,将其与慢病毒载体共转染293T细胞,进行病毒的包装,将得到的病毒感染HT1080细胞,通过RT-PCR、Western印迹等方法验证其抑制效果。结果:酶切证实构建的载体pll-shRNA中已插入外源基因片段,转染293T细胞后都有抑制效果,其中pll-shRNA2的抑制效果最好;用pll-shRNA2病毒感染HT1080细胞,RT-PCR和Western印迹检测分别在RNA和蛋白质水平证实NPM1的表达显著降低。结论:构建的RNA干扰载体pll-shRNA2能有效抑制NPM1的表达,为NPM1功能的研究提供了有力工具。
- 王亚楠金蕊张宪马世良黄君健
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
- 端粒酶调控机制的研究进展被引量：2
- 2005年
- 端粒酶在细胞中的主要生物学功能是通过其逆转录酶活性复制和延长端粒DNA来稳定染色体端粒DNA的长度。近年有关端粒酶与肿瘤关系的研究进展表明,在肿瘤细胞中端粒酶还参与了对肿瘤细胞的凋亡和基因组稳定的调控过程。与端粒酶的多重生物学活性相对应,肿瘤细胞中也存在复杂的端粒酶调控网络。通过蛋白质-蛋白质相互作用在翻译后水平对端粒酶活性及功能进行调控,则是目前研究端粒酶调控机制的热点之一。
- 金蕊黄君健
- 关键词：端粒酶蛋白质相互作用
