关婉怡
- 作品数：10 被引量：9H指数：2
- 供职机构：河北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学化学工程更多>>
- 巨大芽孢杆菌WSH-002丙氨酸脱氢酶066晶体制备及X-射线衍射分析（英文）
- 2015年
- 丙氨酸脱氢酶可逆催化丙氨酸脱氨生成丙酮酸,在氨基酸和酮酸的合成及代谢中至关重要.本研究通过PCR从巨大芽孢杆菌WSH-002中克隆并构建了丙氨酸脱氢酶基因(aldBM066)的原核表达载体,经原核表达后,采用Ni-NTA亲和层析法和阴离子交换色谱法纯化获得蛋白AldBM066,在289 K下以座滴法进行晶体生长条件筛选和制备.通过对蛋白质结晶条件的筛选,最终在蛋白质浓度为15 mg/mL及含有0.1 mol/L乙酸钠(p H 5.0)和2.4 mol/L甲酸钠的缓冲液中获得了理想的蛋白质晶体,晶体大小约为210μm×180μm×150μm,X-射线衍射数据显示,该蛋白质晶体衍射分辨率为2.88,空间群为三方晶系,晶胞参数为a=b=118.71,c=150.51,α=β=90°,γ=120°,每个不对称单位中含有1个AldBM066单体,马修斯系数为2.623/Da,溶剂含量约为53.02%.衍射数据的成功收集为解析巨大芽孢杆菌WSH-002中丙氨酸脱氢酶的三维结构奠定了前期基础,将有助于阐明以单体存在的丙氨酸脱氢酶的催化机制.
- 胡平雄王青青关婉怡鞠建松董辉徐书景
- 关键词：丙氨酸脱氢酶X-射线衍射
- 假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶的晶体制备及X-射线衍射研究（英文）被引量：1
- 2015年
- 【目的】假坚强芽孢杆菌四氢嘧啶羟化酶蛋白纯化、晶体制备及X-射线衍射研究。【方法】通过PCR从假坚强芽孢杆菌OF4中克隆获得四氢嘧啶羟化酶基因,构建原核表达载体,经过原核表达,采用Ni-NTA亲和层析法和分子排阻色谱法纯化蛋白,289 K下采用座滴法进行晶体筛选和制备,在低温100 K下通过X-射线衍射仪(Rigaku Micro Max-007 HF)收集晶体衍射数据。【结果】通过原核表达及纯化成功获得了适合晶体生长的蛋白Bp EctD。通过筛选最终在蛋白浓度为6.5 mg/mL及含有0.2 mol/L Mg Cl2·6H2O,0.1 mol/L Bis-Tris p H6.5,25%(W/V)聚乙二醇3,350的缓冲液中获得了理想的蛋白晶体,其大小约为360μm×240μm×60μm,并在100K下成功收集了衍射数据,晶体衍射分辨率为2.40,空间群为三斜晶系P1,晶胞参数为a=45.18,b=58.87,c=68.81,α=77.48°,β=86.03°,γ=66.97°,每个不对称单位中含有2个Bp EctD单体,马修斯系数为2.443/Da,溶剂含量约为49.53%。【结论】衍射数据的成功收集为假坚强芽孢杆菌OF4四氢嘧啶羟化酶三维结构的解析奠定了前期基础,将有助于阐明四氢嘧啶羟化酶的催化机制。
- 杨江丽王青青徐书景关婉怡赵宝华董辉鞠建松
- 关键词：X-射线衍射
- 猪肺炎支原体168弱毒菌株P65-DnaKc融合蛋白的表达及免疫原性被引量：4
- 2015年
- 研究猪肺炎支原体168(Mycoplasma hyopneumoniae 168,Mhp168)弱毒株融合蛋白P65-DnaKc免疫原性。根据GenBank中Mhp168弱毒株p65和dnaKc基因的开放阅读框设计特异性引物,进行PCR扩增,构建原核表达载体pET-28α-P65,pET-28α-DnaKc以及pET-28α-P65-DnaKc,经原核表达并纯化获得的蛋白与佐剂以体积比1∶1乳化后免疫小鼠,通过酶联免疫吸附反应(ELISA)测定小鼠血清的抗体效价。选取抗体效价较高的小鼠进行攻毒试验,记录分析试验结果。经间接ELISA试验证明单蛋白P65、DnaKc以及融合蛋白P65-DnaKc均具有良好的免疫原性,血清效价分别为:1∶12 800、1∶51 200和1∶204 800,融合蛋白的血清抗体效价明显高于单蛋白;攻毒试验证明,P65-DnaKc重组蛋白疫苗的保护率可达90%。融合蛋白P65-DnaKc具有良好的优于P65和DnaKc单蛋白的免疫原性。
- 刘思远刘东关婉怡鞠建松赵宝华
- 关键词：猪肺炎支原体P65基因
- 长双歧杆菌N-乙酰氨基己糖1-位激酶的活性位点被引量：2
- 2016年
- 【目的】研究长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)JCM1217的N-乙酰氨基己糖1-位激酶(Nacetylhexosamine 1-kinase,Nah K)中对催化活性有影响的位点。【方法】利用点突变试剂盒,获得Nah K的4个位点的共10种单点突变体表达菌株。诱导表达并纯化野生型和突变体酶,用DNS法和NADH偶联的微孔板分光光度法检测野生型及突变体酶的最适p H和最适Mg^(2+)浓度,并测定酶促反应动力学参数。【结果】D208A、D208N、D208E和I24A四种突变体的催化活性几乎丧失。突变体H31A、H31V、F247A和I24V的最适p H由野生型的7.5变为7.0,突变体H31A和F247A的最适Mg^(2+)浓度由野生型的5 mmol/L变为10 mmol/L。反应动力学参数测定结果表明,突变体F247Y对底物Glc NAc/Gal NAc及ATP的催化活性均高于野生型。【结论】通过定点突变,确定了对Nah K催化活性有影响的4个位点,并且获得了一个催化效率提高的突变体(F247Y),为进一步对Nah K进行分子改造奠定了一定基础。
- 关婉怡白静周天惠赵宝华
- 关键词：活性位点长双歧杆菌DNS法
- 生物导向药物研究进展
- 2012年
- 生物导向药物（immunoconjugate）又称生物靶向药物，是有导向功能的载体与具有细胞杀伤能力的物质的结合。这类药物至少包括两个功能区：一个功能区是载体（如单抗、细胞因子等），具有细胞识别功能，能将药物自动导向到靶细胞表面；另一个功能区具有细胞杀伤能力，通过内化作用进入细胞后将其杀死。
- 周天惠关婉怡赵宝华
- 关键词：细胞因子功能区靶向药物细胞表面进入细胞
- Globo系列糖抗原Gb4的细胞工厂法克级合成
- 2021年
- Globo系列糖抗原Gb4广泛存在于多种细胞表面,参与细胞识别等多种生理活动,对机体生命活动起着重要作用.利用细胞工厂法大量合成Globo系列糖抗原Gb4,首先构建基因工程菌株,通过添加乳糖(Lac,二糖)为底物进行发酵,直接合成Gb4(四糖),并采用单因素分析法,依次对受体底物质量浓度、糖供体的前体糖的种类和质量浓度、发酵温度以及发酵时间进行了优化,最后确定1 g/L Lac为最适受体底物,添加5 g/L半乳糖(Gal)有利于糖供体UDP-Gal的合成,Gb4的合成产量提升了14倍,25℃为最适发酵温度,补加底物后21 h为最适发酵时间.以此最适条件在摇瓶进行大量发酵合成,胞内获得纯度约96%的Gb4,1 L发酵液可得到1.145 g的Gb4.该法简便迅速,极大地减小了寡糖合成的工作量,为Gb4的大量合成及功能研究奠定了基础.
- 王晓雨白静王志颖周子璇关婉怡
- 关键词：单因素分析
- 分子量可控且均一的透明质酸多糖的生物化学酶法制备
- 透明质酸(HA)是一种重要的糖胺聚糖,在生物体内发挥着诸多生物功能,不仅是细胞外基质的主要构成组分,还作为信号分子在炎症反应、肿瘤发生发展等过程中起到信号通讯的功能.不同分子量大小的透明质酸在细胞生长等生物过程发挥着差异...
- 薛梦阳王帅帅付玄关婉怡王鹏房俊强
- 关键词：透明质酸
- N-乙酰氨基葡萄糖/半乳糖核苷酸及类似物的酶法合成与应用研究
- 糖类(包括单糖、寡糖和多糖)及糖缀合物广泛存在于从低等的细菌到高等的动植物等所有生物体中，不仅是重要的结构组分，而且作为信息分子在许多关键的生物过程中发挥着不可替代的作用。糖链结构的特定改变与特定的病理状态(如炎症和肿瘤...
- 关婉怡
- 关键词：酶法合成
- 糖激酶活性检测方法进展
- 2015年
- 糖激酶是一类利用ATP中的磷酸基团使糖磷酸化的酶,产生的磷酸糖可进一步转化为糖核苷酸(NDP-糖),为自然界中糖类的合成代谢提供糖基供体.糖激酶不仅在植物、动物和微生物的很多生理及病理过程中起重要作用,也是合成糖类化合物的催化剂及药物开发的靶点,研究其活性既有理论意义又有应用价值.然而,糖激酶催化的反应产物磷酸糖一般不含易检测基团,直接检测并不容易,因此,许多方法被开发用来检测糖激酶的活性.综述了糖激酶活性检测技术的最新进展.
- 关婉怡周天惠赵宝华
- 关键词：活性检测磷酸糖
