冯瑜菲
- 作品数：21 被引量：43H指数：4
- 供职机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项黑龙江省科技攻关计划项目国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：农业科学自动化与计算机技术更多>>
- 抗蓝舌病病毒VP6和VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定被引量：3
- 2012年
- 为制备针对蓝舌病病毒(BTV)的单克隆抗体(MAb),本研究利用血清型1型BTV(BTV1)免疫BALB/c鼠,将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,并用BTV1包被ELISA板,通过间接ELISA方法筛选出3株稳定分泌抗BTV1的MAb的杂交瘤细胞株(2B10、3D4和4H8)。利用表达BTV1主要蛋白的真核表达重组质粒转染BHK-21后,对所制备的杂交瘤细胞株上清进行间接免疫荧光(IFA)以及western blot鉴定,结果显示:2B10和4H8与VP7蛋白反应,而3D4与VP6蛋白反应。同时,IFA鉴定结果进一步表明,3株MAb与24个血清型的BTV均可以发生反应。本研究制备的MAb为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白的功能研究奠定了基础。
- 魏鹏孙恩成刘霓红杨涛徐青元秦永丽赵晶冯瑜菲王文世张翠云吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒单克隆抗体VP7蛋白
- 蓝舌病病毒核酸检测方法及16型蓝舌病病毒重组腺病毒疫苗的研究
- 蓝舌病(Bluetongue，BT)是热带和亚热带国家常见的一种感染反刍动物的虫媒传染病。该病由蓝舌病病毒(Bluetongue virus，BTV)引起，经媒介昆虫（库蠓）叮咬哺乳动物而传播，几乎可以感染所有的反刍动物...
- 冯瑜菲
- 关键词：反刍动物蓝舌病病毒核酸检测
- 文献传递
- 蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定
- VP7蛋白作为蓝舌病病毒群特异性抗原，在BTV各个血清型中高度保守，而针对VP7蛋白的血清学检测方法也是当前检测BT的主要方法之一。本研究通过鉴定BTV VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，初步阐明了BTV VP7蛋...
- 魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜钱爱东吴东来
- 关键词：动物医学蓝舌病病毒抗原表位
- 文献传递
- 蓝舌病病毒核酸通用检测方法的建立
- 目的：建立具有群特异性的BTV通用核酸检测方法，为有效的防控蓝舌病奠定了基础。方法：利用DNAMAN生物学软件，比对了GenBank中26个不同血清型BTV的共104条S10基因的核酸序列，选取最保守的序列区域设计特异性...
- 冯瑜菲徐青元杨涛孙恩成李俊平吴东来
- 关键词：动物医学蓝舌病病毒核酸检测
- 文献传递
- 蓝舌病病毒VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位的初步鉴定被引量：3
- 2014年
- 为鉴定蓝舌病病毒（BTV）的单克隆抗体（MAb）所识别的VP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位，本研究采用噬菌体展示技术对BTVVP7蛋白构象抗原表位氨基酸进行筛选，通过质粒定点突变技术对编码筛选获得的氨基酸区域的基因进行突变，同时利用ELISA法验证该氨基酸区域突变后对BTVvP7蛋白抗原性的影响。结果表明被BTVMAb4H7所识别的BTVVP7蛋白竞争抑制群特异性构象抗原表位由175FQG177、185YL186和278WH279组成，其中aal75～aal77和aal85～aal86为该抗原表位的关键性氨基酸，本研究初步阐明了BTvVP7蛋白竞争抑制特异性的分子基础，对VP7蛋白功能研究和建立BTV群特异性检测方法具有重要意义。
- 魏天徐青元耿宏伟冯瑜菲杨涛孙恩成席娜刘二战钱爱东邸英华吴东来
- 关键词：蓝舌病病毒VP7蛋白
- 断奶仔猪对毒力基因缺失大肠杆菌的免疫应答
- 2011年
- 为研究猪水肿病大肠杆菌SLT-Ⅱe编码基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用构建的突变菌株(O139/SLT-Ⅱe*/07)口服免疫断奶仔猪后,检测突变菌株在仔猪肠道的定植情况,仔猪血清及粪便中的特异性抗体和细胞因子水平,并进行了免疫保护效力评价。结果显示,免疫后21 d仍能在实验1组(微胶囊口服免疫)和2组(直接口服免疫)的仔猪粪便中检出突变菌株;从免疫后第7 d、14 d和21 d开始,在实验1组血清样品中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、F18ab菌毛蛋白和O139抗原的IgG抗体(P/N>2);从免疫后第7 d、14 d开始,在粪便中可分别检测到抗SLT-ⅡeA蛋白、SLT-ⅡeB蛋白、O139抗原、F18ab菌毛蛋白的sIgA抗体(P/N>2);免疫仔猪血清中的INF-γ的含量升高;实验2组的血清特异性IgG水平和粪便中sIgA抗体水平比实验1组低;该突变菌株对仔猪具有免疫保护作用。研究结果表明该大肠杆菌基因突变株可作为仔猪水肿病口服疫苗的候选菌株。
- 胡文霞冯瑜菲何丽丽关玮琨江馗语师东方
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌免疫应答
- 猪水肿病大肠杆菌毒力因子鸡卵黄抗体制备及Stx2e基因LAMP方法建立
- 猪水肿病(ED)是由某些特定血清型产志贺样毒素大肠杆菌(STEC)引起的断奶仔猪的一种急性致死性传染病。以眼睑、胃壁等处水肿、共济失调、惊厥和麻痹为特征。该病发病急、死亡快、病死率较高。该病主要通过消化道感染,因此针对其...
- 冯瑜菲
- 关键词：猪水肿病大肠杆菌毒力因子抗体制备
- 犬细小病毒环介导等温扩增检测方法的建立被引量：2
- 2013年
- 根据GenBank中犬细小病毒(CPV)VP2基因序列,利用Primer Explorer V4软件设计并合成了针对CPV VP2基因序列保守区域的4条寡核苷酸片段(F3/B3,FIP/BIP)作为LAMP引物。以CPV DNA为模板,通过对LAMP反应温度和时间的优化以及特异性试验、敏感性试验和对临床样品的检测,建立了一种针对CPV VP2基因的LAMP快速检测方法。结果显示,该LAMP检测方法只对CPV有梯状扩增条带,对犬瘟热病毒(CDV)、狂犬病病毒(RV)和犬腺病毒Ⅱ型(CAV-Ⅱ)无扩增条带;对CPV的最低检出量为2.1×10-2 TCID50,其敏感性约为常规PCR检测方法(最低检出量为2.1TCID50)的100倍,是犬细小病毒抗原快速检测试纸(最低检出量为101.5 TCID50)的1 500倍。临床样品的LAMP检测结果与PCR检测结果的符合率为100%。
- 关玮琨何丽丽冯瑜菲朱颖刘文鑫江馗语胡文霞师东方
- 关键词：犬细小病毒环介导等温扩增
- 蓝舌病病毒8型VP2蛋白的真核表达与抗原性检测
- 目的:利用真核表达系统对BTV8型VP2蛋白进行表达并对其抗原性进行检测。方法:从BTV8感染的BHK-21细胞提取病毒RNA,依据Genback中已登录的BTV8的L2基因序列设计一对引物,采用RT-PCR技术扩增BT...
- 席娜王文世冯瑜菲李俊平吴东来孙恩成孙亮魏天杨涛徐青元刘二战孙晶魏鹏
- 关键词：动物医学蓝舌病病毒重组蛋白真核表达
- 文献传递
- 犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为建立犬瘟热病毒(CDV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中CDVN基因保守序列设计合成了2对LAMP引物,内引物FIP、BIP和外引物F3、B3。以CDVN基因重组质粒(pMD-CDV-N)为模板,经反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及临床样品检测。检测结果显示,该方法于61℃水浴60min即可完成反应,最低检出量为70个拷贝,比RT-PCR灵敏10倍。该检测方法仅对CDV产生阳性扩增,而对狂犬病毒,犬细小病毒,犬腺病毒Ⅱ型扩增结果均为阴性。用建立的LAMP方法检测临床样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。本方法简便,特异,有利于CDV的临床检测。
- 何丽丽关玮琨江馗语朱颖刘文鑫冯瑜菲胡文霞师东方
- 关键词：犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增
