刘城 作品数:33 被引量:84 H指数:5 供职机构: 广州市第一人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 新疆维吾尔自治区自然科学基金 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α对血管新生的影响 被引量:5 2010年 目的研究重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1α(Ad-HIF-1α-Ala564-Ala402-Ala803,简称Ad-HIF-1α-564/402/803)对体外血管新生的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,终点稀释法测定病毒滴度,提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定三突变型HIF-1α基因;X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null分别转染hMVECs后,观察hMVECs在Matrigel上毛细血管管腔样结构的形成情况;Ad-HIF-1α-564/402/803、Ad-HIF-1αnature、Ad-Null和PBS分别转染鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型后,利用Image Pro Plus6.0软件收集数据并计算各组CAM血管面积比。结果经PCR及基因测序鉴定,扩增纯化后的腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或变异,病毒滴度达1011~1012PFU/ml;X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定;Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs后Matrigel上的管腔数目显著多于Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null及对照组;基因转染CAM72h后,Ad-HIF-1α-564/402/803组CAM上微小血管数目较Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组明显增多;Ad-HIF-1α-564/402/803组血管面积比与Ad-HIF-1α-nature组、Ad-Null组、PBS组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.01、0.000、0.000)。结论Ad-HIF-1α-564/402/803能明显促进hMVECs毛细血管管腔样结构的形成,同时可以促进CAM模型上微小血管新生,证实了Ad-HIF-1α-564/402/803在常氧情况下对血管新生有一定的促进作用。 魏璇 陶宇 裴静娴 李明琰 陈建威 刘城 吴平生关键词:低氧诱导因子-1Α 重组腺病毒 血管新生 鸡胚绒毛尿囊膜 新疆维吾尔族人群ACE2基因多态性与高血压相关性研究 被引量:1 2017年 目的:探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)基因多态性与新疆喀什地区维吾尔族人群高血压(essential hypertension,EH)的相关性。方法:采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术,检测在新疆维吾尔自治区喀什地区疏附县人民医院采集的门诊与住院维吾尔族无血缘关系的HT患者血液标本102例(高血压组)及同期体检的健康维吾尔族居民血液标本96例(对照组),分析在前述两组人群中ACE2基因rs2285666、rs1978124、rs4646142和rs4830542位点多态性的差异。结果:除ACE2基因rs4830542位点多态性在两组基因型频率(P=0.000)、等位基因频率分布(P=0.002)差异有统计学意义外,其余的ACE2基因rs2285666、rs1978124、rs4646142位点多态性在两组基因型频率(P值分别为0.815、0.352、0.653)、等位基因频率分布(P值分别为0.562、0.139、0.568)差异均无统计学意义。在对照组中,ACE2基因rs4830542位点多态性基因型频率在男性或女性之间的分布差异无统计学意义(P=0.204),均以TT基因型为主(66.7%/72.7%);而在高血压组中,其差异有统计学意义(P=0.003),且以CT基因型为主(70.0%/54.8%)。更进一步地,无论男性或女性,在高血压组中ACE2基因rs4830542位点CT基因型频率明显高于对照组,其CT基因型人群发生高血压的风险高于CC等位基因人群(OR=5.366,95%CI:1.315-21.659,P=0.019)。结论:ACE2基因rs4830542位点多态性与新疆维吾尔族人群高血压相关,其CT基因型可能是新疆维吾尔族人群高血压的遗传易感因素。 刘城 郭宝云 郭宝云 申艳 赵海燕 赖艳娴 赖艳娴关键词:维吾尔族 ACE2 基因多态性 高血压 不同HIF-1α基因诱导人骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的效能差异 2013年 目的研究腺病毒介导的野生型及突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)向心肌细胞(cardiomyocyte)分化过程中的效能差异。方法重组腺病毒Ad-LacZ、Ad-HIF-1αnative、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402及Ad-HIF-1α564/803分别以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,于诱导培养后第6周提取细胞浆蛋白,应用酶联免疫分析检测法或Western blot检测法分别测定其中的心肌肌钙蛋白I(cTnI)、HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平。结果经5-aza诱导hMSCs第6周cTnI值为:对照组(0.700±0.013)、Ad-LacZ组(0.702±0.006)、Ad-HIF-1αnative组(0.729±0.004)、Ad-HIF-1α564组(0.741±0.008)、Ad-HIF-1α564/402组(0.764±0.009)及Ad-HIF-1α564/803组(0.804±0.021),各实验组cTnI表达差异有统计学意义(P<0.05),其中尤以Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达水平最高,与前述其它各组相比差异有统计学意义(P值均<0.05)。Western blot结果显示:与Ad-LacZ组相比,Ad-HIF-1αnative组、Ad-HIF-1α564组、Ad-HIF-1α564/402组、Ad-HIF-1α564/803组HIF-1α、VEGF及Nkx2.5蛋白均升高(P<0.05),其中以Ad-HIF-1α564/402组HIF-1α蛋白表达水平最高(P值均<0.05),以Ad-HIF-1α564/803组VEGF及Nkx2.5蛋白表达水平最高(P<0.05)。结论野生型及不同突变型HIF-1α基因均可促进hMSCs向心肌细胞分化,尤以Pro564 Asn803双突变型HIF-1α基因(HIF-1α564/803)作用最强。 刘城 王月刚 吴平生 裴静娴 赖艳娴关键词:低氧诱导因子1Α 骨髓间充质干细胞 分化 野生型低氧诱导因子1α对人微血管内皮细胞增殖、迁移及成管的影响 被引量:3 2013年 目的研究野生型低氧诱导因子1a(HIF.1et)对人微血管内皮细胞(HMVEC.L)增殖、迁移、成管的影响,并初步探讨其作用机制。方法实验分正常对照组、物理低氧组及野生型HIF.1a基因组,分别用MTS法、划痕法、成管法检测前述3组HMVEC.L增殖、迁移、成管的能力,并用Westem印迹测定HIF-1a及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平。结果MTS法结果显示,野生型HIF—1a基因转染HMVEC—L后明显促进HMVEC—L增殖,与正常对照组、物理低氧组差异有统计学意义(P〈0.05)。划痕结果显示,正常对照组、物理低氧组、野生型HIF—1a基因组HMVEC.L迁移率分别为(1.09±0.25)%、(8.65±1.03)%及(17.12±1.97)%,其中野生型HIF.1a基因组迁移率最大(P〈0.05)。成管法结果显示,正常对照组、物理低氧组、野生型HIF-1a基因组成管长度分别为(0.34±0.07)、(0.90±0.16)、(1.76±0.09)mm/视野,其中野生型HIF—1a基因组成管长度最长(P〈0.05)。Western印迹结果显示,与正常对照组相比,物理低氧组、野生型HIF.1et基因组HIF.1a、VEGF蛋白表达均明显升高(P〈0.05),其中野生型HIF—1a基因组HIF—1a、VEGF蛋白表达水平最高(均为P〈O.05)。结论野生型HIF.1a基因能在体外促进HMVEC-L增殖、迁移、管样形成,是一种具有临床应用前景的血管新生基因。 刘城 吴平生 王月刚 裴静娴 赖艳娴关键词:微血管 新生血管化 生理性 突变型HIF-1α基因对人骨髓间充质干细胞分化成心肌样细胞的影响 被引量:1 2009年 目的探讨突变型低氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)基因对体外诱导环境人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)分化成心肌样细胞(cardiomyocyte-like)过程中的影响。方法重组腺病毒Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803以最佳转染复数转染体外5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导的hMSCs,诱导培养后第4周,提取细胞浆蛋白,一步法酶联免疫分析检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)含量;Western blot测定HIF-1α及VEGF蛋白表达水平。结果5-aza诱导hMSCs第4周cTnI值:Ad-HIF-1αnature(0.426±0.001)、Ad-HIF-1α564(0.424±0.002)、Ad-HIF-1α564/402(0.428±0.005)、Ad-HIF-1α564/803(0.441±0.003)、空白组(0.411±0.010)、Ad-LacZ(0.410±0.016),各实验组有显著性差异(P<0.05);Ad-HIF-1α564/803组cTnI表达高于Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402三组(P<0.05)。Western blot结果显示Ad-HIF-1αnature、Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803四组HIF-1α及VEGF蛋白表达水平均较Ad-LacZ组高,有显著性差异(P=0.000),但Ad-HIF-1α564、Ad-HIF-1α564/402和Ad-HIF-1α564/803与Ad-HIF-1αnature相比,各组间两种蛋白表达差异均无显著性(P>0.05)。结论野生型HIF-1α基因及突变型能促进5-aza诱导的hMSCs向心肌样细胞转化,为HIF-1α及hMSCs在心肌再生中的联合应用奠定了实验基础。 裴静娴 刘城 童锴 胡英芳 王月刚 郭寿贵 吴平生关键词:低氧诱导因子1Α 5-氮胞苷 心肌样细胞 柔毛水杨梅对人微血管内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响 被引量:5 2016年 【目的】研究柔毛水杨梅对人微血管内皮细胞增殖、迁移、成管能力的影响。【方法】将不同浓度(0~200 ng/m L)柔毛水杨梅作用于人微血管内皮细胞(HMVEC-Ls),分别采用MTS法检测细胞的增殖活性,划痕法检测细胞的迁移能力,Matrigel法检测细胞的成管能力以及Western blot法验证低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)、端粒酶逆转录酶(TERT)的表达水平。【结果】MTS结果显示:柔毛水杨梅与HMVEC-Ls共同培养7 d,25~200 ng/m L不同浓度组均可促进HMVEC-Ls增殖,与对照组(0 ng/m L)比较,差异均有统计学意义(P〈0.05),以100 ng/m L组促进HMVEC-Ls增殖能力最显著(P〈0.05)。划痕实验结果显示:与对照组比较,50~150 ng/m L组HMVEC-Ls迁移率显著增大,差异均有统计学意义(P〈0.05),以150 ng/m L组HMVEC-Ls迁移率最高。成管实验结果:与对照组比较,50~150 ng/m L组HMVECLs成管长度显著增加,差异均有统计学意义(P〈0.05),亦以150 ng/m L组HMVEC-Ls成管长度最大。Western blot检测结果:与对照组比较,150 ng/m L柔毛水杨梅浓度组HIF-1α、TERT和VEGF表达均显著升高(P〈0.05)。【结论】柔毛水杨梅可通过促进人微血管内皮细胞增殖、迁移、管样形成而发挥促血管新生效应,其机制可能与HIF-1α-TERT-VEGF途径介导的血管新生有关。 刘城 宋雨鸿 王月刚 裴静娴 赖艳娴 申艳关键词:血管新生 细胞培养 新疆疏附县人民医院心脑血管疾病发病趋势及高血压危险因素分析 被引量:1 2018年 目的了解新疆疏附县人民医院心脑血管疾病发病趋势和分析高血压发病相关危险因素,为高血压及其相关的心脑血管疾病的综合防治提供依据。方法回顾性分析2007—2011年疏附县人民医院住院患者资料,按年份统计慢性非传染性疾病(以下简称慢性病)住院人数情况,并采用Logistic回归分析法分析维吾尔族人群高血压发病的相关危险因素。结果新疆疏附县人民医院心脑血管疾病住院人数逐年增长,5年增长了约2.7倍,其中因高血压住院人数增长了3.5倍。BMI、血钠水平升高、血脂异常、年龄是维吾尔族人群高血压的危险因素。结论新疆疏附县人民医院住院患者中以高血压为主的心脑血管疾病逐年增长。当地高血压及其相关的心脑血管疾病的防治采取生活方式干预基础上给予降压、降脂治疗的综合策略是优选。 黎艳芳 关天旺 图提古丽·麦麦提 阿不都热西提·则亚维丁 刘城关键词:高血压 心脑血管疾病 维吾尔族 p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定 被引量:4 2017年 目的构建人p53RFP基因启动子序列不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,研究启动子的转录活性。方法 PCR扩增人p53RFP基因启动子区域不同长度的目的片段,克隆到pGL3-Basic中,构建启动子区域3个不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双酶切和基因测序鉴定正确后,转染HEK293细胞,双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性。结果成功构建了p53RFP启动子不同截短片段的荧光素酶报告基因载体,经双荧光素酶报告基因检测分析,3个启动子片段均具有转录活性。结论成功构建了人p53RFP基因启动子荧光素酶报告基因载体,为研究p53RFP基因的转录调控机制提供了实验基础。 裴静娴 王月刚 张艺军 刘城 吴平生关键词:启动子 荧光素酶报告基因 冻干重组人三突变型HIF-1α腺病毒生物学效应考察 2011年 目的研究冻干对重组人三突变型HIF-1α腺病毒(Ad-HIF-1α-564/402/803)生物学效应的影响。方法将前期构建的Ad-HIF-1α-564/402/803在HEK293A细胞中进行扩增,用氯化铯浓度梯度离心法进行腺病毒纯化,X-Gal染色法测定重组腺病毒转染效率,在适宜的条件下制成冻干剂。采用MTS试剂盒观察冻干前后Ad-HIF-1α-564/402/803对hMVECs增殖的影响。分别在冻干前、冻干后1 d、6月、12月四个时间点提取病毒DNA,进行PCR及PCR产物测序鉴定重组人三突变型HIF-1α腺病毒基因;并在4个时间点以Ad-HIF-1α-564/402/803转染hMVECs,提取蛋白进行western blot检测HIF-1α蛋白的表达。结果 X-gal染色显示MOI为100pfu/cell时,转染效率趋于稳定。冻干前后重组人三突变型HIF-1α腺病毒对hMVECs增殖影响无显著差异(P>0.05)。经PCR及基因测序鉴定,在四个时间点,腺病毒所携带的目的基因信息无丢失或突变,HIF-1α蛋白表达无差异(P>0.05)。结论冻干能够长期保持重组人三突变型HIF-1α腺病毒的高生物活性。 陶宇 王月刚 魏旋 刘城 陈冬冬 吴平生关键词:HIF-1Α 重组腺病毒 冷冻干燥 生物学活性 原发性高血压患者血管紧张素转化酶基因多态性与血清蛋白水平的关系 被引量:2 2015年 目的:探讨新疆地区维吾尔族、汉族原发性高血压(EH)患者血管紧张素转化酶(ACE)基因多态性与血清ACE水平的关系。方法采用随机抽样的方法,收集2012年8月至2014年1月新疆维吾尔自治区喀什地区疏附县人民医院就诊的EH患者104例(EH组),以同期该院门诊健康体检者102例作为对照(NT组),聚合酶链反应(PCR)检测ACE基因16号内含子I/D多态性,紫外分光光度法测定血清ACE水平,多重线性回归分析ACE基因型与血清ACE水平的关系。结果在维吾尔族、汉族人群中EH组血清ACE水平均高于NT组[维吾尔族:(45.21±14.53)U/L比(29.05±8.42)U/L,汉族:(46.42±16.45)U/L比(42.27±12.84)U/L,均P〈0.05];EH组和NT组中不同ACE基因型之间血清ACE水平比较,差异均有统计学意义(均P〈0.05),且均为DD基因型〉DI基因型〉II基因型(均P〈0.05)。多重线性回归分析显示,维吾尔族和汉族人群中DD基因型、DI基因型相对于II基因型均能显著增加血清ACE水平(β=25.677、9.072,均P〈0.05)。结论新疆地区维吾尔族、汉族人群中ACE基因多态性与血清ACE水平有关联。 赖艳娴 郭宝云 邓聪 阿不都热西提 刘城 陈文忠 刘凯关键词:血管紧张素转化酶 高血压 多态性 汉族 维吾尔族